高效液相色譜法測定小兒清熱口服液中綠原酸的含量

范友強(qiáng)（哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150000）

高效液相色譜法測定小兒清熱口服液中綠原酸的含量

范友強(qiáng)
（哈藥集團(tuán)中藥二廠，黑龍江 哈爾濱 150000）

摘 要：本文以高效液相色譜為主要的檢測手段，來建立這種綠原酸檢測方法，具體研究如下文所述。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；小兒清熱口服液；綠原酸；含量；測定

作為一種較為常見的小兒清熱退燒藥物，在小兒清熱口服液中，，綠原酸作為重要藥效成分，其含量的多少會對口服液的退熱效果產(chǎn)生直接影響，為此在生產(chǎn)小兒清熱口服液時，一般都會對綠原酸的含量進(jìn)行有效控制，這就需要一種高效便捷的測量方法來檢測綠原酸的含量。現(xiàn)本文就以高效液相色譜為主要的檢測手段，來建立這種綠原酸檢測方法，具體研究如下文所述。

1 儀器和試藥

本試驗(yàn)中所使用的儀器主要有高效液相色譜泵、檢測儀和數(shù)據(jù)處理機(jī)。這些儀器設(shè)備均為試驗(yàn)室常用設(shè)備，且能夠滿足本試驗(yàn)的研究需要。所使用的試藥為小兒清熱口服藥品，以及綠原酸對照品，這些藥品和對照品均由相關(guān)單位檢測合格，另外試驗(yàn)中所使用的其他試劑均為分析純。

表1 小兒清熱口服液中綠原酸的回收率測定結(jié)果

2 測定方法

2.1 色譜條件

YWG-C18柱（4.0mm×150mm，10μm）；流動相甲醇-水-四氫吠喃-冰醋酸（2.5∶97∶5∶1.5）；流速1.5mm·min-1；檢測波長327nm；靈敏度0.05AUFS；紙速0.1mm·min-1。

2.2 綠原酸對照品溶液的配制

首先應(yīng)該精密稱取一定的綠原酸對照品，以便于配制一定的對照品溶液。本試驗(yàn)中稱取了10.1mg的對照品，并將其放在10mL的容量瓶里進(jìn)行稀釋，稀釋溶液使用濃度為50%的甲醇，稀釋完后將溶液搖勻即可得到1號對照品溶液。之后再從1號對照品溶液中精密量取1mL，將其放置在10ml容量瓶中，繼續(xù)稀釋，搖勻，得到2號對照品溶液。

2.3 供試樣品液的配制

在配備完對照品溶液后，就要配制相應(yīng)的供試樣品液。其配制方法與對照品溶液相同，均是精密量取后加50%甲醇進(jìn)行稀釋，搖勻。

2.4 陰性液的配制

由于綠原酸主要存在于金銀花這一藥材中，為了排除其他藥材對綠原酸含量測量的影響，本實(shí)驗(yàn)還專門配制了陰性液加以對比分析。陰性液的配制主要是按照小兒清熱口服液的制備工藝和相關(guān)工藝參數(shù)所制備出的不含金銀花的小兒清熱口服液，并以這一溶液為樣品，采用與對照品溶液制備相同的方法制備出陰性液。

2.5 藥材液的配制

同樣需要進(jìn)行精密稱取，并將所稱取的0.15g藥材放置到到具塞錐形瓶中，加入50mL濃度為50%的甲醇溶液之后將瓶塞塞緊，然后稱量其重量，并對其進(jìn)行時長為半個小時的超聲處理。然后待溶液冷卻后，再稱量其重量，并用50%甲醇將所損失的重量補(bǔ)充回來，并搖勻。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取綠原酸對照品2號溶液2，4，5，6，8μl進(jìn)樣測定，以綠原酸進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪圖。其回歸方程為：Y=781483.90，X-15316.87， r=0.9999，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品在0. 201～0. 807μg與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

按照測定方法重復(fù)進(jìn)樣5次，綠原酸峰面積積分值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD = 1.33%。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按照測定方法重復(fù)測定5份樣品，綠原酸含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0. 4%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取5份樣品（批號：110618）各0.5mL，置50mL，容量瓶中，精密吸取各樣品液，分別精密加入綠原酸對照品2號溶液0.90mL、1.09mL、1.00mL、1.04mL、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，搖勻即得。按上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結(jié)果如表1結(jié)果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 樣品測定

精密量取樣品液l0μL進(jìn)樣，依照上述色譜條件進(jìn)行含量測定，結(jié)果見表2。

表2 綠原酸含量測定結(jié)果

結(jié)語

由本實(shí)驗(yàn)可以得知，在對小兒清熱口服液中的綠原酸含量進(jìn)行測定時，采用高效液相色譜法是非常可行的。而其測定效果與效率在很大程度上與流動相有較大關(guān)聯(lián)。在本試驗(yàn)中，最初使用的流動相：甲醇-水-乙腈-冰醋酸的比例為3：97：12：3，在測定期間發(fā)現(xiàn)在此流動相下樣品的分離效果不理想，很容易造成綠原酸峰拖尾問題，為此我們對流動相進(jìn)行了一定的變動，將乙腈換位了四氫呋喃。在經(jīng)過調(diào)整后，樣品的分離達(dá)到了理想效果。并為之后的綠原酸含量測定提供了良好條件。在對綠原酸進(jìn)行含量測定時采用高效液相色譜法不但操作簡便，且檢測效果好，能夠使綠原酸和其他成分實(shí)現(xiàn)基線分離，保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

事實(shí)上，綠原酸含量檢測不但對小兒清熱口服液的生產(chǎn)質(zhì)量保證有很大意義，其在其他請熱類藥物的生產(chǎn)中也往往需要進(jìn)行要有效檢測。因?yàn)榫G原酸本身存在于金銀花中，所以只要藥物成分中有金銀花都會有綠原酸，綠原酸的殺菌功能較為顯著，在多種感冒清熱藥物中發(fā)揮積極作用，為此必須要確保這類藥物中綠原酸的含量符合相關(guān)要求。而高效液相色譜法完全可以作為一種檢測方法應(yīng)用在這些藥物的綠原酸含量檢測中。

參考文獻(xiàn)

[1]崔嵐，祝德秋，王曉珉，羅啟劍，曹惠明.反相高效液相色譜法測定清炎顆粒中綠原酸的含量[J].中國藥房，2004（06）.

[2]趙霞，楊麗.HPLC法測定雙黃連顆粒中綠原酸的含量[J]. 中國藥事，2012（01）.

中圖分類號：R286

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A