HCV—RNA與HCV—Ab、ALT、TP相關性研究

李昕++管世鶴

摘要：探討丙型肝炎患者體內HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP間的相互關系。采用ELISA檢測708例HCV-Ab陽性的丙型肝炎疑似患者，以RT-PCR檢測血清HCV-RNA載量，全自動生化儀定量檢測ALT和TP。HCV-Ab表達水平與HCV-RNA載量有關，HCV-RNA載量與ALT異常率呈正相關性，但HCV-RNA載量與ALT含量無相關性，與TP含量亦無相關性。708例HCV-Ab陽性患者中男性多于女性，差異無統計學意義（P>0.05）；40歲以上患者比例多于40歲以下患者比例，差異有統計學意義（P<0.05）。HCV-RNA與HCV-Ab、ALT具有一定相關性，丙型肝炎以40歲以上男性患者多見，應引起臨床重視。

關鍵詞：HCV-RNA；HCV-Ab；ALT；TP；相關性

中圖分類號：R51263文獻標志碼：A

文章編號：1672-1098（2015）01-0078-05

丙型病毒性肝炎，是一種由丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染引起的病毒性肝炎。據世界衛生組織統計，全球HCV的感染率約為3%，約18億人感染HCV，每年新發丙型肝炎病例約35萬例，呈現全球流行趨勢。其中50%～85%感染者發展為慢性丙型肝炎，lO%～30%發展為肝硬化，肝硬化患者中約3%～10%可演變為肝細胞癌[1]。近年來HCV感染人數持續上升，成為日趨嚴重的社會和公共衛生問題。臨床實驗室多采用實時熒光（RT-PCR）法檢測血液中的HCV-RNA用于HCV感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物療效監測及血液篩查[2]。本研究對本院2011～2013年疑似丙肝患者的HCV-RNA、HCV-Ab、ALT及TP監測指標進行分析，對其相關性進行研究，探討其在丙型肝炎診斷和治療療效方面的臨床意義。

1對象及方法

1.1對象

選取本院2011～2013年度共708例住院及門診患者HCV-Ab陽性、伴隨典型臨床表現并已排除其他肝炎的可疑丙型肝炎患者血樣。其中男444例、女264例，男性年齡1～95歲，平均年齡455歲，女性年齡10～73歲，平均年齡451歲。

1.2試劑與儀器

1） 丙型肝炎病毒核酸擴增（PCR）熒光定量檢測試劑：上海科華生物工程有限公司生產，批號分別為20121206、20131201。 儀器采用羅氏Light Cycler480熒光定量PCR儀，Agilent Technologies擴增儀。

2） 丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（ELISA）：廣州中山生物工程有限公司生產，批號分別為20121205、20131203。儀器采用科華KHB ST-360酶標儀。

3） 谷丙轉氨酶（ALT）和總蛋白（TP）試劑：SIEMENS有限公司生產，批號分別為20121117、20131201。儀器采用德國SIEMENS Dimension RxL Max全自動生化分析儀。

1.3方法

1） HCV-RNA檢測。采用實時熒光RT-PCR法，由PCR實驗室人員嚴格按照試劑盒說明書進行熒光定量檢測，在實驗中設置陰性對照、強陽性對照、弱陽性對照以及4個不同濃度的標準品（2×104～2×107），HCV-RNA值<10×103 IU/mL為檢測下限（不同HCV-RNA檢測方法可用IU/mL和copy/mL兩種單位，換算公式：IU/mL=0854×copy/mL+0538）。本實驗選用試劑盒采用定量單位為IU/mL。

2） HCV-Ab檢測。采用ELISA法，由實驗室人員嚴格按照試劑盒說明書進行定性檢測，實驗中設置一孔陰性對照、一孔空白對照及一孔陽性對照。酶標儀采用450 nm/630 nm雙波長檢測吸光度（A）。試劑盒陰性對照A值≤01，陽性對照A值≥06，臨界值（Cut-off值）計算：Cut-off值=015+陰性對照A值均值。通過與陰性對照、空白對照、陽性對照的Cutoff值比較判斷樣本A值

3） ALT檢測。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自動生化分析儀的酶速率法， ALT<40U/L為正常合格。

4） TP檢測。采用SIEMENS Dimension RxL Max全自動生化分析儀的雙縮脲比色法，TP<80g/L為正常合格。

1.4統計學方法

應用SPSS130統計軟件包分析，均值比較用t檢驗，以P<005為差異有統計學意義。

2結果

1） 708例HCV-Ab陽性患者HCV-RNA 的檢測結果：708例HCV-Ab陽性患者中，HCV-RNA值10×103者為504例，HCV-RNA陽性率為712%。HCV-RNA值<10×103者為204例。504例HCV-RNA值10×103者中數量級107為42例、106為174例、105為156例、104為90例、103為42例，經統計計算兩種檢測方法的差異有統計學意義（χ2=39723，P=0005<005）。

2） 708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA含量與ALT、TP平均值之間的關系如表1～表2所示，在708例HCV-Ab陽性患者中ALT異常人數所占百分比隨著HCV-RNA載量的增加呈依次遞增的趨勢，與HCV-RNA成正相關性（r=0837，P=001<005）， 但HCV-RNA載量與ALT平均值不構成正相關性（r=0112， P=060>005）。708例HCV-Ab陽性患者中HCV-RNA載量與TP異常的人數所占百分比未有相關性（r=-0233，P=173>005），且隨著HCV-RNA載量的增加，相應的TP平均值呈在正常范圍值內的負相關（r=-0827，P=000），不同HCV-RNA載量的標本的TP平均值變化較平穩。

表1708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA載量與ALT、TP的平均值

HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT平均值/（U/L）TP平均值/（g/L）

107陽性56505762

106陽性69736022

105陽性49816382

104陽性55446409

103陽性49436631

<103陽性67916576

注：應用SPSS130統計軟件統計分析，HCV-RNA載量與ALT平均值比較，r=0112， P=060>005； HCV-RNA載量與TP平均值比較，r=-0827， P=000。

3） 708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA載量與性別、年齡之間的相關性分析如表3所示，708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA載量與平均年齡之間并無明顯關系，且隨著HCV-RNA載量的增加，男性所占比例、女性所占比例及40歲以上患者所占比例、40歲以下患者所占比例未呈規律性變化。但在總體HCV-Ab陽性患者中，男性患者的比例627%要大于女性患者的比例373%，但差異無統計學意義（P>005）；40歲以上患者的比例為692%高于40歲以下患者的比例308%，差異有統計學意義（P<005）。其中40歲以上男性患者人數為392人，所占比例為5537%。

表2708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA載量與ALT、TP異常人數百分率

HCV-RNA/（IU/mL）HCV-AbALT異常/例ALT正常/例TP異常/例TP正常/例

107陽性30（71.4%）12（28.6%）0（0.00%）42（100.0%）

106陽性102（58.6%）72（41.4%）0（0.00%）174（100.0%）

105陽性75（48.1%）81（51.9%）15（9.60%）141（90.4%）

104陽性43（47.8%）47（52.2%）12（13.3%）78（86.7%）

103陽性12（28.6%）30（71.4%）6（14.3%）36（85.7%）

<103陽性42（20.6%）162（79.4%）12（5.90%）192（94.1%）

合計陽性304（42.9%）404（57.1%）45（6.35%）663（93.7%）

注：應用SPSS130統計軟件兩分量間的關聯統計分析，HCV-RNA載量與ALT異常的人數所占百分比比較，r=0837，P=001<005；HCV-RNA載量與TP異常的人數所占百分比比較，r=-0233，P=173>005。

表3236例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA載量與性別、年齡之間的關系

HCV-RNA/（IU/mL）平均年齡/歲男性/例女性/例≥40歲/例<40歲/例

10735.0024（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）

10646.50132（75.9%）42（24.1%）125（71.8%）49（28.2%）

10548.3184（53.9%）72（46.1%）116（74.4%）40（25.6%）

10438.3154（60.0%）36（40.0%）51（56.7%）39（43.3%）

10343.1424（57.1%）18（42.9%）30（71.4%）12（28.6%）

<10342.77126（61.8%）78（38.2%）138（67.6%）66（32.4%）

合計45.29444（62.7%）264（37.3%）490（69.2%）218（30.8%）

注： 應用SPSS130統計軟件兩分量間的關聯統計分析， 男性患者比例與女性患者比例比較， r=-0986，P=050>005； 40歲以上患者比例與40歲以下患者比例比較，r=0493，P=003<005。

3討論

1） HCV是丙型肝炎的病因，目前所用實驗室診斷方法主要為病原抗原檢測、病原抗體檢測和HCV-RNA檢測。由于采用實時熒光RT-PCR方法檢測HCV-RNA可以縮短檢測窗口期（最少可至22天）[3]，所以血液中HCV-RNA的實時熒光RT-PCR檢測，已成為HCV感染診斷、丙型肝炎患者抗病毒藥物治療療效監測及血液篩查的重要手段。本研究708例HCV-Ab陽性患者中有204例HCV-RNA值為陰性，分析原因如下：①HCV-Ab假陽性，可能與高球蛋白血癥[4]或試劑盒包被抗原不純[5]等因素導致；②HCV感染后的病毒血癥分為持續、一過和間隙三種時間模式[6]。故HCV-RNA出現間隙陰性，或是患者處于疾病恢復期，病毒量下降導致HCV-RNA陰性，而HCV-Ab陽性持續存在；③因實時熒光RT-PCR法提取HCV-RNA過程較復雜，易被RNA酶降解，從而影響低載量的HCV-RNA的檢測[7]；④因核酸的穩定性較抗體低，故HCV-RNA不穩定，導致HCV-RNA檢出值不穩定[8]，影響實驗結果；⑤抗病毒治療導致干擾和抑制了患者體內HCV-RNA的復制，使得血清中HCV-RNA的載量低于檢測下限[9]。

2） 由表1、表2看出，隨著HCV-RNA值的升高ALT的平均值未呈比例升高，但ALT異常人數所占百分比升高，與HCV-RNA值呈正相關（r=0837，P<005），提示肝細胞發生損傷，但不能反映肝臟的損傷程度[10]。但據澳大利亞的一項實驗調查研究證明HCV-RNA和ALT的水平動態變化在感染的前三至五個月有相互影響作用，在感染的早期治療有重要的作用[11]。故在以后的研究中需進一步收集臨床資料驗證丙型肝炎早期感染階段的指標動態變化的影響意義。endprint

3） 急慢性肝病會造成總蛋白偏高，但在708例HCV-Ab陽性患者中，TP平均值變化較平穩，且都在正常范圍內，TP異常較集中在HCV-RNA值為103～105范圍內，說明TP異常常伴隨低HCV-RNA含量時存在，可能與丙型肝炎早期肝細胞纖維化、炎癥和代謝失常有關。

4） 在本研究中，708例HCV-Ab陽性患者的HCV-RNA的含量與平均年齡、性別之間有一定聯系。在總體HCV-Ab陽性患者中，男性患者的比例要大于女性患者，差異無統計學意義（P>005）。據國外報道稱女性獻血者的丙肝感染率遠低于男性獻血者[12]，故考慮在以后的研究中增大標本量進行統計研究；40歲以上患者的比例要大于40歲以下患者的比例，差異有統計學意義（P<005）。本研究數據表明，丙型肝炎患者以40歲以上男性居多，可能由于年齡大機體老化導致機體免疫力下降或因40歲以上男性社會壓力大及飲酒、吸煙等不良生活習慣或合并其他疾病并發癥致使機體抵抗力下降易受病毒侵害[13]。據美國全國健康和營養檢查調查顯示：40歲以上成年人的丙型感染率明顯增高，且273%的40歲以上丙肝患者中有過量飲酒史，酒精對于HCV感染具有乘法效應[14]。

綜上所述，RT-PCR檢測血液中的HCV-RNA由于其窗口期短、定量監測病毒復制量，較好地應用于HCV的診斷，藥物治療療效監測，但不能確切反映病理性肝損傷。ELISA法檢測HCV-Ab由于其操作簡單、成本經濟、檢出率高等特點用于大規模的人群篩查指標，但其窗口期長且易出現假陽性。ALT和TP在丙肝感染的過程中一定程度上反映了肝臟的損傷情況，與丙肝的感染階段有一定關聯。因此需結合HCV-RNA、HCV-Ab、ALT和TP對丙型肝炎患者進行病情的診斷、檢測和治療。本研究中丙型肝炎以40歲以上男性患者多見，故應增加臨床重視度。

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（責任編輯：何學華）endprint