過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面信號淋巴細胞激活分子的表達

楊珺，耿麗娜，彭輝勇，馬永明，許化溪，王勝軍

（1.江蘇大學附屬人民醫院檢驗科，江蘇鎮江212002；2.江蘇大學醫學院檢驗醫學研究所，江蘇鎮江212013）

過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面信號淋巴細胞激活分子的表達

楊珺1，2，耿麗娜1，2，彭輝勇1，2，馬永明1，許化溪2，王勝軍1，2

（1.江蘇大學附屬人民醫院檢驗科，江蘇鎮江212002；2.江蘇大學醫學院檢驗醫學研究所，江蘇鎮江212013）

目的：探討信號淋巴細胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）在過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面的表達及意義。方法：選擇18例過敏性鼻炎患者和16例健康體檢者，淋巴細胞分離液分離提取外周血單個核細胞，流式細胞術檢測CD4+T細胞表面SLAM的表達；同時，采用ELISA法檢測血漿中IgE的表達；分析CD4+T細胞表面SLAM表達與血漿中IgE表達的相關性。結果：過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面SLAM的表達水平明顯低于健康體檢者（t=2.29，P＜0.05），而IgE水平明顯高于健康體檢者（t=2.740，P＜0.01）；過敏性鼻炎患者血漿中IgE的表達與CD4+T表面SLAM的表達呈負相關（r=-0.484 8，P＜0.05）。結論：過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面SLAM表達降低，在一定程度上可反映疾病的嚴重程度。

過敏性鼻炎；CD4+T細胞；信號淋巴細胞激活分子

過敏性鼻炎患者機體接觸過敏原后，產生特異性IgE并介導Ⅰ型超敏反應引起一系列鼻炎癥狀，包括鼻塞、鼻癢、噴嚏、清涕，鼻黏膜蒼白等［1］，其外周血中CD4+T細胞亞群比例發生變化，細胞因子的產生發生紊亂，即Th1/Th2免疫失衡，Th2免疫反應占優勢，Th2類細胞因子IL-4、IL-5、IL-13等分泌增加，從而促進B細胞分泌IgE［2］。信號淋巴細胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）是一種細胞膜表面糖蛋白，屬SLAM家族的第1個成員，又稱CD150，表達于B細胞、T細胞、單核細胞等表面，參與免疫突觸形成，傳遞TCR共刺激信號［3］。體外SLAM單克隆抗體刺激可誘導外周血T細胞產生IFN-γ，進而使Th2克隆向以產生IFN-γ為特征的Th1克隆轉變［4］，不利于IgE的產生。因此，我們猜測過敏性鼻炎患者體內SLAM表達可能發生改變，從而影響Th1/Th2平衡及IgE的表達。本實驗擬采用流式細胞術檢測SLAM在過敏性鼻炎患者體內CD4+T細胞表面的表達變化并分析其與疾病狀態間的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2014年4月至7月江蘇大學附屬人民醫院確診的過敏性鼻炎患者18例，表現有鼻癢、噴嚏、大量清涕等過敏癥狀，可見鼻黏膜蒼白；年齡18～52歲，其中，男6例，女12例。另選健康體檢者16例作為對照組，無過敏性疾病史及癥狀。

1.2 材料與方法

1.2.1 外周血單個核細胞提取 采集肘靜脈血2 mL，K2EDTA抗凝，離心后移去上層血漿，PBS 1∶1稀釋血細胞，緩慢加入人淋巴細胞分離液（Ficoll分離液，天津灝洋生物技術有限公司），400×g離心20 min，吸取中間白膜層分離出外周血單個核細胞（PBMC），1 mL PBS洗滌2遍，棄上清液，加入100 μL PBS重懸細胞。

1.2.2 流式細胞術檢測CD4+T細胞表面SLAM的表達 表面染色采用PE-Cy5標記的抗人CD3抗體（eBioscience公司），APC標記的抗人CD4抗體（BioLegend公司），PE標記的抗人SLAM（CD150）抗體（eBioscience公司），同型抗體采用小鼠IgG1，κIso對照（eBioscience公司）。將抗體加入細胞懸液，4℃避光孵育30 min。1mL PBS洗滌2遍，棄上清液，加入300μL PBS重懸細胞。用流式細胞儀（FACSCalibur，BD公司）進行檢測分析。

1.2.3 ELISA檢測血漿IgE 采用IgE檢測試劑盒（eBioscience公司），按照說明書操作進行檢測。

1.3 統計學分析

采用GraphPad Prism 5軟件分析實驗數據，數據用均數±標準差表示，兩組間均數比較采用獨立樣本t檢驗，相關性分析采用Pearson相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 外周血中CD4+T細胞表面SLAM的表達

流式細胞術檢測結果顯示，與健康體檢者比較，過敏性鼻炎患者CD4+T表面SLAM的表達明顯降低（t=2.29，P＜0.05）。見圖1。

圖1 過敏性鼻炎患者CD4+T細胞表面SLAM的表達

2.2 血漿中總IgE的表達

ELISA檢測結果顯示，與健康體檢者比較，過敏性鼻炎患者血漿中總IgE的表達水平明顯上升（t= 2.740，P＜0.01）。見圖2。

2.3 血漿中IgE表達與CD4+T細胞表面SLAM表達的相關性

相關性分析結果顯示，過敏性鼻炎患者血漿中IgE的表達與外周血CD4+T細胞表面SLAM的表達呈負相關（r=-0.484 8，P＜0.05）。見圖3。

圖2 血漿總IgE的表達

圖3 過敏性鼻炎患者血漿IgE與SLAM表達的相關性

3 討論

SLAM是屬于免疫球蛋白超家族CD2亞型的一類表面受體［5］，通過SH2區域與銜接蛋白SAP相結合，招募活化PKC-θ和BCL10，從而增強NF-κB的活化并影響下游分子的表達；SLAM可通過共刺激信號引起T細胞增殖，并根據不同的刺激調節CD4+T淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞相關的細胞因子的分泌；此外，SLAM還與生發中心的形成和免疫球蛋白的產生有關［6］。研究發現，在一些自身免疫性疾病中SLAM表達升高，如實驗性狼瘡小鼠以及人多發性硬化癥［7］。在類風濕關節炎患者的滑膜液中也發現表達升高的可溶性SLAM［8］。上述研究提示SLAM分子在免疫失調性疾病的發生發展中起重要作用。

本研究結果表明，與健康體檢者相比，過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面SLAM的表達明顯降低。研究表明，初始T細胞、TCRγδ+T細胞和B細胞經激活后，細胞表面SLAM表達迅速增加；采用SLAM單克隆抗體體外刺激可引起T細胞增殖，并促進活化的T細胞分泌IFN-γ，且在SLAM特異性單克隆抗體刺激下，即使是抗原特異的Th2也會發生該改變［4］。研究發現，從特應性皮炎患者皮損組織中分離出的呈高度極化狀態的抗原特異性Th2細胞在接受體外SLAM刺激后可轉變成高表達IFN-γ的細胞群，并且該細胞群在與純化的B細胞進行共培養時無法誘導B細胞分泌IgE［9］。以上研究提示SLAM刺激可使Th2向Th1發生轉變，從而抑制IgE的產生。由此我們猜測，過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面SLAM表達降低導致IFN-γ產生減少，從而使CD4+T細胞向Th1細胞分化的能力降低，而向Th2細胞分化增強，最終促進IgE產生。本研究ELISA結果表明，過敏性鼻炎患者血漿中IgE呈高表達，且IgE表達與CD4+T細胞表面SLAM表達呈負相關。這一結論支持了上述CD4+T細胞表面SLAM表達降低可促進IgE產生的猜測；同時IgE作為評價過敏性疾病的指標之一，可反映疾病的嚴重程度，SLAM與IgE之間明顯的相關性提示SLAM在一定程度上反映過敏性疾病的狀態。

但目前關于SLAM的研究仍然存在大量爭議。有研究發現，在SLAM基因缺陷的小鼠中，其CD4+T細胞分泌IL-4和IL-13水平下降，IFN-γ水平上升［10］，在其下游信號SAP、Fyn基因缺陷的小鼠中也發現了類似現象，說明SLAM及其相關信號通路與Th2細胞釋放因子有關。我們猜測這一差異可能是由于動物與人類之間種屬不同或基因缺陷小鼠并不能完全模擬人體內SLAM降低的內環境引起。

本研究證實過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細胞表面SLAM表達降低，SLAM是否通過調節IFN-γ的表達來發揮作用以及具體機制尚待進一步研究與證實。

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Signaling lym phocytic activation molecule expression on CD4+T cells surface in patients w ith allergic rhinitis

YANG Jun1，2，GENG Li-na1，2，PENG Hui-yong1，2，MA Yong-ming1，XU Hua-xi2，WANG Sheng-jun1，2
（1.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated People′s Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212002；2.Institute of Laboratory Medcine，School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013，China）

Objective：To explore the changes of signaling lymphocytic activationmolecule（SLAM）expression on CD4+T cells surface in patientswith allergic rhinitis and the relationship between SLAM expression and the disease state.M ethods：Eighteen patients with allergic rhinitis and sixteen healthy controls were enrolled in the study.PBMCwere isolated from the whole blood by Ficoll gradient centrifugation.The expression of SLAM on CD4+T cell surfacewas assessed by using flow cytometry，the expression of plasma IgE was tested by ELISA.Then we analyzed the correlation between SLAM expression and plasma IgE level.Results：Compared with the healthy controls，the expression of SLAM on CD4+T cell surface was significantly decreased in allergic rhinitis patients（t=2.29，P＜0.05），but the plasma IgE level was significantly increased（t=2.740，P＜0.01）；and therewas a negative correlation between SLAM expression and plasma IgE level（r=-0.484 8，P＜0.05）.Conclusion：Patientswith allergic rhinitis showed low expression of SLAM in CD4+T cells in peripheral blood，which might reflect the disease severity to some extent.

allergic rhinitis；CD4+T cells；signaling lymphocytic activation molecule

R392.8

A

1671-7783（2015）04-0346-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150120

國家自然科學基金資助項目（31470881）；教育部高等學校博士學科點專項科研基金資助項目（20133227110008）

楊珺（1988—），女，碩士研究生；王勝軍（通訊作者），教授，博士生導師，E-mail：sjwjsu@aliyun.com

2015-06-01 ［編輯］ 劉星星