高效液相色譜法快速測定化妝品及藥品中4種防腐劑

劉素娟 邵艷秋 崔術(shù)新 盛琦

摘要：建立了靈敏、快速的高效液相色譜法測定化妝品及藥品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯這4種常見防腐劑含量的方法。采用Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為分離柱，以甲醇/水（80∶20，V/V）為流動(dòng)相，流速為1.5 mL/min，紫外檢測器檢測波長為254 nm，柱溫為30 ℃，在4 min內(nèi)可將4種防腐劑基線分離，方法快速準(zhǔn)確，可用于實(shí)際樣品測定，結(jié)果滿意。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；防腐劑；快速測定；化妝品；藥品

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）11-2735-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.046

Rapid Determination of Four Preservatives in Cosmetic and Medicine Using HPLC

LIU Su-juan， SHAO Yan-qiu， CUI Shu-xin， SHENG Qi

（Department of Chemistry and Industry， Mudanjiang Normal University， Mudanjiang 157011， Heilongjiang， China）

Abstract： A high performance liquid chromatography method （HPLC） was developed for the determination of methyl p-hydroxybenzoate，ethyl p-hydroxybenzoate， propyl p-hydroxybenzoate and butyl p-hydroxybenzoate in cosmetic. A ultimate XB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm） was used as separation column with methanol and water （80∶20，V/V） as mobile phase， and flow rate was 1.5 mL/min， the UV-detection wavelength was 254 nm， the column temperature was 30 ℃. Four preservatives were separated within 4 min. The method was fast and accurate，which was available for practical samples with satisfactory results.

Key words： HPLC； preservatives； rapid determination； cosmetic； medicine

化妝品在日常清潔、美容、護(hù)膚中起重要作用。在化妝品中添加一定量的防腐劑能有效防止化妝品腐敗變質(zhì)，延長化妝品保存時(shí)間和保持化妝品原有的功效[1]。而藥品對(duì)人們的健康更是有著至關(guān)重要的作用。近年來，對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物被廣泛的用做化妝品及藥品的防腐劑，中國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對(duì)這類防腐劑的使用量有嚴(yán)格規(guī)定[2]。因此化妝品及藥品中防腐劑含量測定是重要的質(zhì)量保證。化妝品及藥品中常用防腐劑的同時(shí)測定有采用凝膠電泳法、毛細(xì)管電泳法、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法的報(bào)道[3]。這些方法都有一定的局限性，不能滿足現(xiàn)行檢測的要求，在防腐劑檢測中受到一定限制。防腐劑大多是大分子有機(jī)物，并且有紫外吸收特性，適于用高效液相色譜分析。因此高效液相色譜法是當(dāng)前使用最廣泛的方法[4-6]。

本研究采用高效液相色譜建立了對(duì)化妝品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯（Me-PHBA）、對(duì)羥基苯甲酸乙酯（Et-PHBA）、對(duì)羥基苯甲酸丙酯（Pr-PHBA）、對(duì)羥基苯甲酸丁酯（Bu-PHBA）4種常見防腐劑含量的測定方法。使用本方法檢測索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品，對(duì)實(shí)際樣品前處理進(jìn)行了改進(jìn)。結(jié)果表明，新方法簡便易行，縮短了分析時(shí)間，提高了靈敏度。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-15C型液相色譜儀（日本島津制作所），配備LC-15C型高壓泵、DGU-20A在線脫氣機(jī)、CTO-15C柱溫箱、SPD-15C型紫外-可見檢測器、LC Solution15C色譜工作站；KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；SBH-3型電動(dòng)離心機(jī)（山東菏澤南城益發(fā)儀器廠）；TB-214型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯標(biāo)準(zhǔn)品（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；甲醇（色譜純，J. T. Baker公司）；試驗(yàn)用水均為去離子水。

1.2 色譜條件

HPLC色譜柱為Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇/水（8∶2，V/V），流速為1.5 mL/min；檢測波長為254 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為6 μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯各0.100 0 g于100 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，搖勻，濃度均為1.000 mg/mL，作為混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品前處理方法

選擇具有代表性的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品進(jìn)行測定。分別準(zhǔn)確稱取0.500 0 g置于50 mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入無水乙醇50 mL，超聲30 min，4 000 r/min離心10 min后，取上清液進(jìn)行測定。以上所有樣品進(jìn)樣前均經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

2 結(jié)果與分析

2.1 進(jìn)樣量的確定

使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行進(jìn)樣量條件的優(yōu)化。通過從1～8 μL改變進(jìn)樣量，發(fā)現(xiàn)當(dāng)進(jìn)樣量為1～4 μL時(shí)基線噪聲較大，當(dāng)進(jìn)樣量為8 μL時(shí)出現(xiàn)平頭峰，當(dāng)進(jìn)樣量為6 μL時(shí)峰高較適宜，所以選擇進(jìn)樣量為6 μL，見圖1。

2.2 檢測波長的確定

將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在波長220～300 nm作紫外掃描，發(fā)現(xiàn)在254 nm波長下帶寬最小，且有最大吸收，為保證較好的靈敏度及最小的干擾，選擇254 nm為檢測波長。

2.3 流動(dòng)相的選擇

2.3.1 流動(dòng)相對(duì)分離效果的影響 文獻(xiàn)多采用了緩沖鹽體系作為流動(dòng)相，本工作則采用甲醇與水體系作為流動(dòng)相。一方面用甲醇和水可以達(dá)到很好的分離效果，另一方面避開緩沖鹽，沖洗色譜柱比較方便，對(duì)整個(gè)儀器管路的維護(hù)也有好處。考察了甲醇與水多種配比作為流動(dòng)相，優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)品分離效果。包括純甲醇、甲醇/水（9∶1，V/V）、甲醇/水（8∶2，V/V）、甲醇/水（7∶3，V/V）、甲醇/水（6：4，V/V）、甲醇/水（5∶5，V/V），結(jié)果發(fā)現(xiàn)使用甲醇/水（8∶2，V/V）作為流動(dòng)相時(shí)，對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯混合液能達(dá)到基線分離，峰寬較窄，且保留時(shí)間較短，見圖2。

2.3.2 分離性能 根據(jù)《中華人民共和國藥典》中規(guī)定，當(dāng)分離度大于1.5時(shí)可以認(rèn)為兩種組分已經(jīng)完全分離。選擇甲醇/水（6∶4，V/V），出峰時(shí)間太長，需要25 min，不利于試驗(yàn)的進(jìn)行。選擇甲醇/水（9∶1，V/V），雖然出峰時(shí)間縮短了，但對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸乙酯的峰重疊，無法做出區(qū)分。甲醇/水（8∶2，V/V）時(shí)分離效果最好（圖2）。

2.4 流速的確定

考察了流速為0.5～2.0 mL/min時(shí)4種防腐劑混合液分離情況。結(jié)果表明，隨著流速增大，保留時(shí)間縮短。但是當(dāng)流速大于1.6 mL/min時(shí)前兩個(gè)峰會(huì)出現(xiàn)明顯重疊，另外，高流速下泵壓力增大，會(huì)降低儀器的使用壽命，并且不能明顯縮短保留時(shí)間。綜合考慮以上因素，選擇流速為1.5 mL/min。

2.5 柱溫的確定

考察了柱溫為20～40 ℃時(shí)4種防腐劑標(biāo)準(zhǔn)混合液分離情況。結(jié)果表明，柱溫為20 ℃時(shí)，對(duì)羥基苯甲酸丁酯在4 min以后出現(xiàn)，而柱溫為30 ℃時(shí)，對(duì)羥基苯甲酸丁酯在4 min之前就出現(xiàn)了，當(dāng)柱溫為40 ℃時(shí)，峰強(qiáng)度降低較大。綜合而言，30 ℃是最佳柱溫，見圖3。

2.6 工作曲線、相關(guān)系數(shù)及檢出限

以甲醇/水（8∶2，V/V）為流動(dòng)相，流速為1.5 mL/min，紫外檢測器檢測波長為254 nm，柱溫為30 ℃，分別進(jìn)不同體積的上述標(biāo)準(zhǔn)溶液。以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。

2.7 回收率及精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取已檢測過的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏各0.500 0 g，分別加入一定量的防腐劑混合標(biāo)準(zhǔn)品，按優(yōu)化的色譜條件進(jìn)行6次分析，考察本方法的回收率和精密度，結(jié)果見表2。

2.8 實(shí)際樣品分析

采用優(yōu)化后的最佳色譜條件，選擇市售的具有代表性的索芙特男士保濕乳液、曲咪新乳膏兩種樣品，分別測定了其中所含防腐劑的種類，測定結(jié)果見圖4、圖5。

通過樣品色譜圖（圖4、圖5）與標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（圖3）的比對(duì)，結(jié)果表明，在索芙特男士保濕乳液中檢測出了對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯，且對(duì)羥基苯甲酸甲酯的峰面積比對(duì)羥基苯甲酸丙酯大，而在曲咪新乳膏中則檢測出了對(duì)羥基苯甲酸乙酯。

3 小結(jié)與討論

采用MICROSORB-MV C18為分離柱，以乙醇超聲提取樣品中防腐劑，高效液相色譜法同時(shí)測定化妝品中對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯，4 min內(nèi)即可同時(shí)完成4種防腐劑的色譜分離，分離速度快、前處理簡單、靈敏度高，可滿足實(shí)際樣品測定需要。

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