中藥復(fù)方理囊散對(duì)奶牛子宮復(fù)舊期間生殖激素的影響

王銀龍　谷新利　木爾扎提·阿勒騰別克　吳學(xué)林　伍輝　賽務(wù)加甫

摘要：為探討中藥理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛生殖激素的影響，使20頭荷斯坦奶牛于產(chǎn)后0、15 d口服中藥理囊散，統(tǒng)計(jì)受胎率，通過酶聯(lián)免疫法（ELISA）分析理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛血清中促黃體素（LH）、促卵泡素（FSH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）含量的影響。結(jié)果顯示，試驗(yàn)組（A組）45 d內(nèi)的受胎率為70%，顯著高于對(duì)照組（B組）。血清中FSH含量于產(chǎn)后15、30 d達(dá)到最大值，LH含量于產(chǎn)后20 d達(dá)到最大值，E2含量于產(chǎn)后20、30 d達(dá)到最大值，均極顯著高于對(duì)照組同時(shí)期FSH、LH、E2的含量（P<0.01）。P4含量從產(chǎn)后15 d開始上升，于產(chǎn)后20 d達(dá)到最大值，極顯著高于對(duì)照組（P<001），并于產(chǎn)后30 d下降，極顯著低于對(duì)照組（P>0.05）。理囊散能刺激卵巢活動(dòng)，提高產(chǎn)后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2分泌水平，提升早期受胎率，縮短產(chǎn)犢間隔，對(duì)產(chǎn)后奶牛子宮機(jī)能的恢復(fù)具有顯著作用。

關(guān)鍵詞：理囊散；子宮復(fù)舊；奶牛；生殖激素

中圖分類號(hào)： S858.237.2+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0203-03

奶牛子宮復(fù)舊是指產(chǎn)后子宮恢復(fù)到未孕時(shí)形態(tài)和功能的生理過程[1]，子宮復(fù)舊的過程和狀態(tài)決定著奶牛產(chǎn)后首次發(fā)情的受胎率，若產(chǎn)后發(fā)情時(shí)間推遲，產(chǎn)犢間隔就會(huì)延長。我國僅有小部分中、小型奶牛場(chǎng)的產(chǎn)犢間隔天數(shù)可達(dá)365～380 d，90%的母牛產(chǎn)犢間隔在400 d以上，有的甚至達(dá)到455 d，有半數(shù)產(chǎn)后母牛的空懷時(shí)間在90～120 d，嚴(yán)重影響奶牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，制約著我國奶牛業(yè)的健康發(fā)展[2，5]。為縮短奶牛的產(chǎn)犢間隔，不僅要對(duì)產(chǎn)后母牛進(jìn)行科學(xué)的飼養(yǎng)管理，還應(yīng)進(jìn)行產(chǎn)后早期的相應(yīng)處理。中藥具有療效確切、無殘留、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，因此開發(fā)利用中草藥促進(jìn)產(chǎn)后奶牛子宮恢復(fù)具有重要意義。本試驗(yàn)通過理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛的處理，加快子宮恢復(fù)時(shí)間，提高早期受胎率，縮短產(chǎn)犢間隔，檢測(cè)理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛子宮復(fù)舊期間生殖激素的影響，為中獸藥治療產(chǎn)后疾病提供一定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 于2013年4—11月在新疆志翔牧業(yè)奶牛場(chǎng)、西部牧業(yè)奶牛場(chǎng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。在排除傳染病、寄生蟲病、肉眼可見的生殖道疾病、先天性因素的基礎(chǔ)上，選擇產(chǎn)犢胎次不同的荷斯坦奶牛40頭并分為2組，每組各20頭。A組為試驗(yàn)組，即灌服理囊散治療組；B組為對(duì)照組，即自然恢復(fù)健康組。

1.1.2 儀器與設(shè)備 PowerWave XS2 BioTek型酶標(biāo)儀；-80 ℃ 超低溫冰箱；Eppendorf Research型移液器（艾本德中國有限公司）。

1.1.3 主要藥品與試劑 LH、FSH、E2、P4 ELISA試劑盒購于上海藍(lán)基生物科技有限公司，其中LH、FSH、P4的靈敏度為0.1 ng/mL，E2的靈敏度為1 pg/mL。理囊散由女貞子、熟地黃、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中藥組成。

1.2 方法

1.2.1 投藥及采血時(shí)間 試驗(yàn)組每頭奶牛于分娩完成4 h后灌服理囊散400 g，每天1次，連續(xù)1個(gè)療程（5 d），觀察 10 d 后繼續(xù)灌服1個(gè)療程。灌服理囊散前第1次采血，第1個(gè)療程結(jié)束后第2次采血，每隔5 d采血1次，共采血10次，采血時(shí)間為09：00—10：00。奶牛空腹時(shí)于尾靜脈采取血液10 mL，并于室溫下靜置，血清自然析出后分裝于1.5 mL離心管中，置于-80 ℃冰箱保存待檢。對(duì)照組每次灌服無菌生理鹽水400 g，灌服天數(shù)、采血時(shí)間均與試驗(yàn)組相同。

1.2.2 激素含量的測(cè)定 上述所采集血清中的LH、FSH、E2、P4含量均采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定，按試劑盒使用說明書操作。

1.2.3 療效判定 經(jīng)直腸檢查，子宮基本恢復(fù)正常大小且沒有惡露排出，可判定為有效。經(jīng)直腸檢查，子宮龐大或子宮壁腫脹，仍有惡露或膿性分泌物排出，子宮復(fù)原差且弛緩，含有大量液體，按摩子宮體、子宮頸、陰道前部會(huì)促使惡臭分泌物流出陰門，則判定為無效。用藥療程結(jié)束后，產(chǎn)后0～45 d內(nèi)未發(fā)情則判定為無效；產(chǎn)后0～60 d進(jìn)行人工授精，未受孕者則判定為無效。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛子宮復(fù)舊的治療效果

A組奶牛30、45 d內(nèi)的發(fā)情率高于B組奶牛，且45 d內(nèi)的受胎率、有效比均高于B組奶牛（表1）。經(jīng)產(chǎn)奶牛的產(chǎn)后恢復(fù)時(shí)間短于第1、2胎奶牛。

2.2 理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛血清中生殖激素的影響

根據(jù)表2、表3中數(shù)據(jù)繪制各激素的變化曲線（圖1至圖4）。A組中經(jīng)理囊散2個(gè)療程處理的產(chǎn)后奶牛，在產(chǎn)后15、30 d，血清中FSH、E2含量均出現(xiàn)2個(gè)高峰期，極顯著高于B組同時(shí)期FSH、E2的含量（P<0.01），B組奶牛血清中FSH含量在產(chǎn)后20、30 d出現(xiàn)2個(gè)高峰期，而E2含量在子宮復(fù)舊期間僅出現(xiàn)1個(gè)高峰期。A組奶牛血清中LH含量在產(chǎn)后 10 d 開始上升，并于產(chǎn)后20 d達(dá)到最大值，極顯著高于B組同時(shí)期LH的含量（P<0.01）。A組奶牛血清中P4含量在產(chǎn)后15 d開始升高，并于產(chǎn)后20 d達(dá)到最大值，產(chǎn)后35 d后持續(xù)高含量水平，極顯著高于B組同時(shí)期P4的含量（P<001）。可見，A組奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的含量比B組提前5 d達(dá)到最大值，總體變化規(guī)律基本與魏學(xué)良[6]、高樹等[7]的研究結(jié)論相符。

3 討論

3.1 理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛血清中FSH、LH水平的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，A、B組奶牛子宮復(fù)舊期間血清中FSH、LH均處于較低水平。魏學(xué)良、高樹等研究發(fā)現(xiàn)，奶牛產(chǎn)后2周內(nèi)血清中LH濃度水平較低，于3周后上升，呈劇烈的活動(dòng)變化，而FSH在產(chǎn)后12 d內(nèi)均處于較低水平[6-7]，本試驗(yàn)結(jié)論與之基本一致。可能的原因?yàn)楫a(chǎn)后2周內(nèi)促性腺激素釋放激素（GnRH）的釋放脈沖頻率尚未恢復(fù)，致使FSH、LH的水平較低，并由于FSH、LH對(duì)GnRH的分泌反應(yīng)不同所致。低頻率的GnRH可引起FSH的釋放，而僅當(dāng)GnRH脈沖頻率高達(dá)1次/h才可釋放LH[8]。經(jīng)理囊散處理后，A組奶牛產(chǎn)后15、30 d發(fā)情頭數(shù)明顯多于B組，直腸檢查發(fā)現(xiàn)卵巢上卵泡活動(dòng)頻繁，檢測(cè)結(jié)果顯示血清中FSH含量在產(chǎn)后15、30 d達(dá)到最大值。血清中LH的含量在產(chǎn)后15 d開始逐漸上升，并于產(chǎn)后20 d達(dá)到最大值，表明卵巢上的卵泡退化后形成正常黃體。現(xiàn)代中獸醫(yī)理論認(rèn)為，理囊散可使產(chǎn)后奶牛卵巢提前活動(dòng)，并提高奶牛機(jī)體內(nèi)FSH、LH的分泌水平，是由于母畜的性周期變化受下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)節(jié)[9]。據(jù)報(bào)道，補(bǔ)腎中藥可降低促乳素分泌水平[10-11]，而理囊散中的熟地黃、女貞子、附子、甘草均屬于補(bǔ)腎、益精、填髓的藥物，可使產(chǎn)后奶牛的促乳素水平下降，解除高水平促乳素對(duì)下丘腦-垂體-卵巢軸的抑制作用，從而刺激卵巢活動(dòng)。

3.2 理囊散對(duì)產(chǎn)后奶牛血清中P4、E2水平的影響

P4在產(chǎn)后15 d內(nèi)處于較低水平，從產(chǎn)后20 d開始逐漸上升，于產(chǎn)后25 d達(dá)到最大值，并于產(chǎn)后30 d達(dá)到最小值，產(chǎn)后35 d后趨于平穩(wěn)上升（圖3）。P4由黃體與胎盤產(chǎn)生，P4含量隨分娩后妊娠黃體的退化而急劇下降，產(chǎn)后0 d左右降到基礎(chǔ)水平，并維持在較低水平直至產(chǎn)后第1次排卵，從產(chǎn)后15 d開始明顯上升，并于產(chǎn)后25 d達(dá)到峰值，其原因是第1次排卵結(jié)束后形成黃體并出現(xiàn)短暫的周期，產(chǎn)后35 d后A組明顯趨于平穩(wěn)上升，經(jīng)直腸檢查部分奶牛已受孕，卵巢上形成妊娠黃體，分泌P4水平增加，促使整體水平提高。經(jīng)理囊散處理后，A組奶牛血清中E2含量不僅顯著高于同時(shí)期B組，且分泌時(shí)間提前5 d（圖4）。據(jù)報(bào)道，切除卵巢的動(dòng)物，其子宮對(duì)催產(chǎn)素的敏感性很低，而經(jīng)E2處理的子宮敏感性則很高，微量催產(chǎn)素即可引起子宮肌的有力收縮，從而加強(qiáng)子宮的早期恢復(fù)[12]。E2可增強(qiáng)子宮的收縮能力，有促進(jìn)子宮復(fù)舊的作用，E2還可刺激子宮黏膜產(chǎn)生大量催產(chǎn)素受體，利于催產(chǎn)素對(duì)子宮的收縮作用，加快產(chǎn)后奶牛子宮內(nèi)惡露的排放，減少子宮炎癥等疾病的發(fā)生，為人工授精提供良好的子宮環(huán)境。影響產(chǎn)后奶牛子宮機(jī)能恢復(fù)的因素較為復(fù)雜，其中卵巢是影響E2分泌水平最主要的因素之一。母畜性周期變化受下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)節(jié)，E2是此調(diào)節(jié)系統(tǒng)中的關(guān)鍵激素[13]，而理囊散中的熟地黃可上調(diào)雌性小鼠老化進(jìn)程中E2的含量[14]，且理囊散中的醇溶性成分可促進(jìn)小鼠子宮發(fā)育，具有明顯的促孕活性[15]。

4 結(jié)論

理囊散具有添加小劑量外源E2的作用，通過下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)節(jié)促進(jìn)和提高產(chǎn)后奶牛血清中FSH、LH、P4、E2的分泌水平，進(jìn)而加快產(chǎn)后奶牛惡露的排放、發(fā)情時(shí)間及子宮形態(tài)的恢復(fù)，從而提高受胎率，縮短產(chǎn)犢間隔期。理囊散具有奶牛產(chǎn)后保健作用，可加快產(chǎn)后奶牛生殖機(jī)能的恢復(fù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ghanem M，Shalaby A H，Sharawy S，et al. Factors leading to endometritis in dairy cows in Egypt with special reference to re-productive performance[J]. The Journal of Reproduction and Development，2002，48（4）：371-375.

[2]呂新峰. 采取綜合措施縮短奶牛產(chǎn)犢間隔的研究[D]. 石河子：石河子大學(xué)，2008.

[3]何劍斌，從 霞，劉明春，等. 奶牛子宮復(fù)舊的掃描電鏡觀察[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2004，40（5）：15-17.

[4]田文儒，何劍斌，叢 霞，等. 產(chǎn)后奶牛子宮內(nèi)膜的掃描電鏡觀察[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2004，24（2）：183-186.

[5]李守軍，田文儒，范友勝，等. 奶牛子宮復(fù)舊的B-超影像學(xué)研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2001，10（1）：49.

[6]魏學(xué)良. 奶牛產(chǎn)后生殖機(jī)能恢復(fù)規(guī)律研究[D]. 重慶：西南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2001.

[7]高 樹，賽務(wù)加甫. 奶牛子宮復(fù)舊期間FSH和LH動(dòng)態(tài)變化規(guī)律研究[J]. 中國奶牛，2012（8）：30-32.

[8]Akbar H，Schams D. Prohctin release in cattle[J]. Reprod and Fert，2007，39：463-467.

[9]邵會(huì)娟，李炳奇，唐利容，等. 中藥復(fù)方“促孕散”中生物堿的提取方法及其促孕活性研究[J]. 石河子大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，28（2）：184-188.

[10]杜惠蘭，段彥蒼，宋翠淼. 補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方對(duì)雄激素誘導(dǎo)無排卵大鼠血清生殖激素及子宮、卵巢性激素受體水平的影響[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（4）：23-27.

[11]段彥蒼. 補(bǔ)腎中藥對(duì)無排卵大鼠模型生殖激素及其受體的影響[D]. 石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2002.

[12]Akbar A M，Reichert L E，Dunn T G，et al. Serum levels of follicle-stimulating hormone during the bovine estrous cycle[J]. Journal of Animal Science，1974，39（2）：360-365.

[13]胡元亮，王小龍. 中藥促孕液對(duì)小白鼠生殖器官發(fā)育和結(jié)構(gòu)的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2001，32（5）：426-433.

[14]高治平. 熟地黃對(duì)雌性小鼠老化進(jìn)程中雌、孕激素受體含量的上調(diào)作用[J]. 山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，1（4）：1-3.

[15]曾云軍，劉 紅，谷新利，等. “理囊散”中醇溶性成分的提取及促孕活性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（12）：224-226.