3個(gè)蕎麥品種黃酮含量及清除自由基活性比較

李兆君

摘要：采用紫外-可見分光光度法測定了北海道、美國甜蕎、北早生3個(gè)蕎麥品種中黃酮含量及清除自由基活性。結(jié)果表明，北海道黃酮含量（0.652%）略高于美國甜蕎（0.626%），北早生黃酮含量最低（0.568%）。DPPH是常用的檢測清除自由基活性的方法，3種蕎麥提取液對(duì)DPPH自由基均有一定的清除能力，北海道清除率最高（54.7%），其次是美國甜蕎（52.6%），最低的是北早生（41.6%）。

關(guān)鍵詞：蕎麥；黃酮；自由基清除率

中圖分類號(hào)： S517.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2015）07-0355-02

蕎麥別稱烏麥、三角麥，我國是其生產(chǎn)大國[1]。1984年，寧夏回族自治區(qū)開展了蕎麥引種觀察、品種鑒定、品種比較試驗(yàn)，截至2004年已進(jìn)行了6輪，確定了一批蕎麥新品種，北海道、美國甜蕎、北早生就是其中的選種作物[2]。蕎麥?zhǔn)撬幨惩吹奈锓N，富含黃酮類化合物，尤其富含蕓香苷。黃酮類化合物具有降低血糖、血脂等功能，對(duì)于治療糖尿病、高血壓、心臟病有輔助療效，同時(shí)還是天然抗氧化劑，具有清除自由基的作用[3]。本研究對(duì)比3種蕎麥黃酮含量以及清除自由基的作用，旨在為開發(fā)利用天然蕎麥保健產(chǎn)品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗(yàn)中蕎麥品種為北海道、美國甜蕎、北早生，均產(chǎn)自寧夏回族自治區(qū)固原市，由固原市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所鑒定并提供。蕓香苷對(duì)照品（92.5%）由中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100080-200707，DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，C18H12N5O6）純度>95%。Al（NO3）3、NaNO2、NaOH、無水乙醇（天津科密歐化學(xué)試劑）為分析純；水為蒸餾水。主要儀器：萬分之一AEU-210電子天平（日本島津公司）；UV-1600紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；瑞爾回流提取裝置。

1.2 方法

1.2.1 3種蕎麥樣品溶液的制備

取3個(gè)蕎麥品種洗凈、烘干、粉碎，過40目篩，精密稱取5.0 g置于索氏提取器中，在料液比1 g ∶30 mL、乙醇濃度75%、80 ℃下提取4 h，將提取液濃縮至100 mL[4]。

1.2.2 蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用30%乙醇稍微加熱使其完全溶解，轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，用30%乙醇定容，搖勻，得到0.2 mg/mL蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置于25 mL容量瓶中，加入5% NaNO2 0.7 mL，靜置5 min，加入10% Al（NO3）3 0.7 mL，搖勻，靜置6 min，加入1 mol/L NaOH 溶液5 mL，用30%乙醇定容，靜置10 min，以未加蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的顯色試劑乙醇溶液作為空白對(duì)照，在510 nm處測定吸光度，繪制曲線。

1.2.3 總黃酮含量的測定

準(zhǔn)確吸取2 mL 3種蕎麥的樣品溶液置于25 mL容量瓶中，按“1.2.2”節(jié)所述方法用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法操作，在510 nm處測定吸光度，測定黃酮類物質(zhì)含量，對(duì)3種蕎麥樣品溶液黃酮含量進(jìn)行比較。平行測定3次，按以下公式計(jì)算黃酮含量：

R=C×12.5×0.15.0×100%。（1）

式中：R代表黃酮含量，%；C代表由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的黃酮含量，mg/mL。

1.2.4 對(duì)DPPH自由基清除率的測定

準(zhǔn)確稱取DPPH 20 mg，用無水乙醇溶解，定容于100 mL容量瓶中，配制成 0.2 mg/mL DPPH標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光保存。取2 mL DPPH標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入無水乙醇，定容于10 mL容量瓶中，配制成0.02 mg/mL DPPH工作液，避光保存。取2 mL DPPH工作液，加2 mL溶劑，在515 nm處測定其吸光度Dd。取2 mL DPPH工作液加2 mL蕎麥樣品液，在515 nm處測其吸光度Di。取2 mL蕎麥樣品溶液加2 mL溶劑，在515 nm處測其吸光度Dj。蕎麥樣品溶液對(duì)DPPH自由基的清除率（K）計(jì)算公式[5-6]如下：

K=[1-（Di-Dj）/Dd]×100%。（2）

2 結(jié)果與分析

2.1 蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度為縱坐標(biāo)、蕓香苷濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，回歸方程為y=11.848x+0.003 5，r2=0.999 1（圖1）。

2.2 3種蕎麥總黃酮含量

由吸光度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出3種蕎麥樣品中黃酮的含量，蕎麥樣品中總黃酮含量以蕓香苷相對(duì)量表示（表1至表4）。

2.3 3個(gè)蕎麥品種對(duì)DPPH自由基的清除作用

按照“1.2.4”節(jié)中測得的吸光度，Dd（即2 mL DPPH+2 mL溶劑）值為0.490，根據(jù)公式，計(jì)算DPPH自由基清除率（表5）。

3 結(jié)論

本研究對(duì)3個(gè)蕎麥品種的黃酮含量進(jìn)行了測定，結(jié)果表明，北海道黃酮含量（0.652%）略高于美國甜蕎（0.626%），北早生黃酮含量最低（0.568%）。DPPH是常用的檢測清除自由基活性的方法，3種蕎麥提取液對(duì)DPPH自由基均有一定的清除能力，北海道清除率最高（54.7%），其次是美國甜蕎（52.6%），最低的是北早生（41.6%），表明DPPH自由基清除率和黃酮含量有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1]賈瑋瑋，劉敦化. 寧夏蕎麥開發(fā)利用研究進(jìn)展[J]. 保鮮與加工，2009，9（1）：1-4.

[2]馬均伊，趙佰圖. 寧夏蕎麥品種選育的回顧與思考[J]. 寧夏農(nóng)林科技，2005（5）：62-64.

[3]張素斌，廖燕婷. 4種甜蕎麥黃酮提取方法的比較研究[J]. 食品與機(jī)械，2012，28（6）：150-153.

[4]姜忠麗，王俊偉. 苦蕎麥中總黃酮提取工藝的研究[J]. 農(nóng)業(yè)機(jī)械，2011（20）：166-168.

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