橫看成嶺側成峰

羅建義

酒精，學名乙醇，分子式為C2H5OH，無色透明、易揮發，沸點78.5℃，常溫下為液體。酒精在體積分數為70%～75%時，對細菌具有強烈的殺傷作用，是醫院常用的消毒劑、防腐劑、溶劑等。酒精能與水、甲醇、乙醚和氯仿等以任何比例混溶。在高中生物實驗中會多次用到酒精，每次使用的濃度（通常指體積百分比濃度）和作用有所不同。

1 關注“酒精”有無，判斷細胞呼吸方式

酵母菌在有氧條件下，呼吸作用產生H2O和CO2；無氧條件下，呼吸作用產生酒精和CO2。

人教版生物教材必修一中，“探究酵母菌細胞呼吸的方式”是很重要的課堂實驗。酵母菌是兼性厭氧型微生物，在適宜的通氣、溫度和pH等條件下，進行有氧呼吸并大量增殖；在無氧條件下進行酒精發酵。教材中通過鑒定有無酒精的產生，來確定細胞是有氧呼吸還是無氧呼吸。橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與酒精發生反應變成灰綠色。但在實際的教學中，若利用教材描述的方法進行探究實驗時，發現有氧無氧條件下均會出現灰綠色。

查閱文獻后，發現引起該現象的原因包括：（1） 有氧條件下培養的酵母菌，在代謝中會產生多種除酒精以為的多種還原性有機物，這些有機物同樣會使酸性重鉻酸鉀溶液變為灰綠色。（2） 酵母菌培養時間過短，無法完全消耗掉培養液中的還原性的葡萄糖，即使采用準確無誤的檢測流程，同樣會出現變為灰綠色的現象。（3） 若借助酵母菌清水活化實驗進行探究，雖然可以避免葡萄糖對檢測結果的干擾，但此培養液無法做到保證氧氣的充足供應，也會出現變為灰綠色的現象。

為了解決這個問題，筆者取圖1所示的蒸餾裝置兩套，并對有氧、無氧條件下的酵母菌培養液的濾液進行蒸餾，分別從兩組收集瓶中取等量的液體滴加到A、B兩試管中。在A、B試管中分別滴加等量的酸性重鉻酸鉀溶液，輕輕震蕩，觀察兩個試管中溶液顏色的變化。這樣，學生既熟悉了實驗的基本操作，又獲得了有氧條件下不變色，無氧條件下變成灰綠色的探究結果。

2 關注“酒精”濃度，注重實驗目標分析

2.1 12%酒精的使用：調味與滅菌

在“腐乳的制作”中，鹵湯中酒的含量應控制在12%左右。腐乳的風味與酒的種類有關。酒精含量過高使腐乳成熟時間延長，酒精含量過低不能抑制微生物生長，導致豆腐腐敗。

2.2 50%酒精的使用：良好的有機漂洗劑

“脂肪的鑒定”實驗中，蘇丹Ⅲ是弱酸性染料，易溶于體積分數為50%酒精中。花生子葉薄切片用蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ染液染色后，用50%的酒精洗去浮色，以便觀察。

2.3 70%～75%酒精的使用：滅菌消毒效果好

酒精是常用的外用消毒藥，常用于皮膚創傷清洗、注射、輸血、抽血及手術前皮膚的消毒等。體積分數為70%～75%的酒精殺菌作用最強。酒精有很強的吸水力，能使菌體蛋白質脫水、變性、沉淀。菌體蛋白質是細菌的主要成分，一旦被破壞，細菌就失去了活力，從而達到殺滅細菌的目的。酒精的濃度低于70%時，滲透性降低，達不到滅菌消毒的目的。高于體積分數為75%的酒精與細菌接觸時，就可能使得菌體表面迅速凝固，形成一層薄膜，阻止了酒精繼續向菌體內部滲透，等到條件適宜，薄膜內的細胞可能將薄膜沖破而重新復活，消毒殺菌的效果差。

必修三中“土壤中小動物類群豐富度的研究”，采集的小動物可以放在70%的酒精中保存，起防腐作用。選修一中“果酒和果醋的制作”，發酵瓶的消毒；“微生物的實驗室培養”操作者雙手的消毒，涂布器末端要浸在70%的酒精中；“菊花的組織培養”，外植體要放在70%的酒精中，搖動2～3次，持續6～7 s后，立即取出在無菌水中清洗，并且可用濃度酒精對工作臺進行消毒；“月季花的花藥培養”，先將花蕾用70%的酒精浸泡大約30 s，立即取出在無菌水中清洗。

2.4 95%酒精的使用：細胞固定劑或溶劑

該濃度的酒精主要用作溶劑及細胞的固定。“觀察根尖分生組織細胞的有絲分裂”實驗，解離液（質量分數15%的鹽酸和體積分數95%的酒精1∶1混合）中的鹽酸能夠使植物細胞壁軟化，并使細胞間的中膠層物質溶解，從而達到分離細胞的目的。酒精的作用是固定蛋白質，使細胞的原生質凝固，不發生變化，固定細胞的分裂相。酒精常常與其他試劑混合成復合固定劑。

2.5 無水酒精的使用：有機溶劑，側重溶解與萃取

無水酒精主要用作有機溶劑。“綠葉中色素的提取和分離”，用無水酒精提取綠葉中的色素；“植物芳香油的提取”中，用精制的無水酒精萃取芳香油；“低溫誘導植物染色體數目的變化”和“月季花的花藥培養”實驗，都用到卡諾氏固定液，其配方是：無水酒精3份、冰醋酸1份；或無水酒精6份、氯仿3份、冰醋酸1份。卡諾氏液適用于一般植物組織和細胞的固定，常用于根尖、花藥壓片及子房石蠟切片等，有極快的滲透力。根尖材料在卡諾氏液中固定15～20 min即可，花藥則需1 h左右，固定后用95%酒精沖洗至不含冰醋酸為止。如果材料立即使用，需轉入體積分數為70%酒精中保存。

固定液的重要特性是能迅速穿透細胞，將其固定并維持染色體結構的完整性，還要能夠增強染色體的嗜堿性，達到優良染色效果。實驗室若無無水酒精，可用95%的酒精加入適量無水碳酸鈣以除去酒精中的水。

酒精是生物實驗常見產物和常用試劑。只有全面理解其作用，才能在實驗中更好地發揮其效用。