對葉百部中非生物堿化學成分的研究

張麗勤

[摘要] 目的 研究對葉百部中非生物堿的化學成分，并明確其結構。 方法 采用滲漉、提取等操作，提取對葉百部中的非生物堿，經核磁和薄層色譜對其結構進行確證。 結果 從對葉百部中提取出3個化合物，結構確證為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。 結論 對葉百部中非生物堿的化學成分主要為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。

[關鍵詞] 對葉百部；非生物堿；化學成分

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）08（c）-0091-04

[Abstract] Objective To study the chemical components of non-alkaloids in Stemonaceae Stemona tuberosa and clarify their structures. Methods By operations of percolation and extraction，non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa were extracted and their structures were confirmed by nuclear magnetism and thin-layer chromatography. Results There were 3 chemical compounds extracted from Stemonaceae Stemona tuberosa and their structures were confirmed as β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol. Conclusion The chemical components of non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa mainly include β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol.

[Key words] Stemonaceae Stemona tuberosa；Non-alkaloid；Chemical component

百部為常用中藥，又名百部貨、婆婦草、百條根、百部草、鬧虱藥等，性味甘、苦，微溫，歸肺經，具有潤肺止咳、殺蟲滅虱的功效[1]，臨床應用比較廣泛，具有廣闊的市場應用前景。百部的主要化學成分和主要活性成分是生物堿，其殺蟲和止咳效果也是生物堿藥理活性的集中體現[2]。國內外對于百部類生物堿的化學成分研究較多，但是對非生物堿類成分尚無系統的研究[3-4]。百部的藥理作用研究也較多，但大都限于百部不同濃度水提物和醇提物制劑[5]。化學成分的系統研究對于百部藥理作用機制的闡明是必需的，同時也是發現有生物活性的新化合物的基礎和前提。本研究中就對葉百部中非生化堿的化學成分進行研究。

1材料與方法

1.1 材料

核磁共振光譜儀為Bruker DRX-300/600型核磁共振儀測定型（TMS為內標）；恒溫水浴鍋為國華電器有限公司生產。

薄層硅膠GF254、薄層硅膠H、100～200目及200～300目柱硅膠均購自青島海洋化工廠；常規用試劑均為AR級，水為重蒸水；10%硫酸乙醇溶液、溴甲酚綠乙醇溶液等顯色劑均按《中草藥有效成分提取分離》參考書中方法配制[6]。

百部藥材購自河北安國（大百部）Stemona Tuberosa Lour.。

1.2 方法

1.2.1 藥材的提取與分離 對葉百部藥材52 kg經95%乙醇滲漉提取，滲漉液經濃縮后，加入5%稀鹽酸，將pH調解至1～2，過濾，濾液用濃氨水堿化至pH=10，用氯仿萃取至濾液無碘化鉍鉀反應，回收氯仿，得總生物堿部分。將氯仿萃取后堿液（約50 L）用旋轉蒸發器旋干，用pH試紙檢測，基本為中性。稠膏用水稀釋后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取物420 g，正丁醇萃取物600 g。將乙酸乙酯萃取物420 g進行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統進行梯度洗脫。薄層色譜檢測，合并相同流分，共分成11組分（Ⅰ～Ⅺ）。組分Ⅰ經硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從石油醚-醋酸乙酯流份中得到化合物1。組分Ⅲ經硅膠柱色譜，二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶1）梯度洗脫，其中從二氯甲烷-乙酸乙酯流份中得到化合物3。另外組分Ⅲ的二氯甲烷-乙酸乙酯（50∶1和25∶1）流份合并后再經硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶1）梯度洗脫，從二氯甲烷-甲醇流份中得到化合物2。提取分離流程見圖1。

1.2.2 成分的提取 為進一步明確對葉百部的化學成分和今后探討對葉百部治療疾病的藥效物質基礎以及更好地控制該藥的質量，本研究開展對葉百部的生物堿化學成分研究的同時開展了非生物堿部分的化學成分研究。通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結晶等方法從中分離。

2 結果

2.1 成分提取的結果

通過硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和重結晶等方法從中分離得到了3個化合物，根據其波譜數據并結合文獻，確定這3個化合物的結構分別鑒定為β-谷甾醇棕櫚酸酯、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇（表1）。

2.2 化合物的結構鑒定

2.2.1 化合物1 白色粉末，易溶于二氯甲烷、氯仿，10%H2SO4顯紫色，初步推測該化合物為甾醇或三萜類成分。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）譜顯示δH5.3（1H，d，J=4.4 Hz）為典型的烯氫信號，δH 4.61（1H，m）為連氧次甲基質子信號，δH1.25[brs，（CH2）n]為一組長鏈脂肪烴的強強偶合峰，δH1.02（3H，s）、δH 0.78～0.94（m，5×CH3）和δH0.68（3H，s）顯示有7個甲基氫信號，這些信號進一步證明了該化合物為一甾醇類成分。將該化合物的譜學數據與文獻β-谷甾醇棕櫚酸酯數據[7]對照一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇棕櫚酸酯（圖2）。

2.2.2 化合物2 白色針晶，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇，溴甲酚綠反應和三氯化鐵-鐵氰化鉀反應均為陽性，表示結構中含有羧基和酚羥基。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）譜顯示芳香區存在兩組氫信號δH6.83（1H，d，J=9.0Hz），δH7.43～7.45（2H，m），說明該化合物可能存在三取代苯環，且存在鄰位取代氫；δH12.43（1H，s）為羧基質子信號，δH9.78（1H，s）為酚羥基質子信號，δH3.80（3H，s）為甲氧基上的氫信號。經與文獻[8]3-羥基-4-甲氧基苯甲酸數據對照一致，故鑒定該化合物為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（圖3）。

2.2.3 化合物3 無色針晶，10%硫酸乙醇顯紫紅色，與對照品β-谷甾醇共薄層，經3種不同的溶劑系統展開，Rf值均一致，故鑒定化合物3為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3 討論

百部作為我國的傳統中藥，具有很好的止咳、殺蟲效果，在臨床上一直有著廣泛的應用。在對葉百部的有效成分中，對葉百部中的生物堿是發揮殺蟲和止咳效果的核心成分，也是既往研究的重點[9]。目前國內已有大量文獻報道，對葉百部中生物堿的殺蟲效果是市面上最強效殺蟲劑的10倍左右，其止咳效果也遠遠優于常規藥物[10-11]。鑒于對葉百部的藥用價值，近年來關于其化學成分的研究不斷增多，其藥理作用也從傳統的止咳、殺蟲逐漸擴展至抗菌、鎮痛、止咳、殺蟲等諸多方面，針對對葉百部藥理活性成分的研究也不斷豐富。目前學者對百部化學成分的研究報道主要集中在生物堿類和二苯乙烯類成分，而其他成分較少報道[12-13]。隨著百部藥理作用、臨床應用研究的不斷深入，人們發現百部除具有殺蟲、鎮咳祛痰作用外，尚具有抗菌和抗病毒、松弛支氣管平滑肌、中樞鎮靜、鎮痛等多方面的作用，這是生物堿類成分遠不能包羅的[14]。根據中藥整體作用的特點，百部這些功效可能是其在生物體內通過多種類型的化學成分發揮協同作用而表現出的綜合效應[10]。鑒于此，有必要對百部的非生物堿類化學成分也進行深入研究，為百部進一步研究、開發提供科學依據。在本次研究中，筆者通過反復硅膠柱色譜，從對葉百部的85%乙醇提取物中共分離得到3個化合物。通過光譜數據分析等手段，鑒定其結構分別為：β-谷甾醇棕櫚酸酯（化合物1）、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸（化合物2）、β-谷甾醇（化合物3）。在既往的臨床研究中，對葉百部的生物堿成分一直被認為是該中藥材活性成分研究的重點，截至到目前，約有11個藥理活性較好生物堿完成了結構確證和藥理活性評價[15]。但是關于對葉百部中非生物堿的研究，僅在近幾年內才逐漸得到重視，越來越多的非生物堿化合物被發現。王珺等[16]對對葉百部中的非生物堿進行了研究，提取出的11個化合物中9個為新型化合物，大大豐富了對葉百部非生物堿成分研究的內容。在本次研究中發現的3個化合物，均為對葉百部中含量較高的非生物堿，與既往的相關研究有著諸多相互佐證之處，提取和結構確證手段也較為可靠。通過本次的研究，使我們對對葉百部的非生物堿成分有了更為清晰的認識，為將來實現這些化合物的合成和分子水平的結構研究提供了堅實的基礎。

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（收稿日期：2015-02-02 本文編輯：衛 軻）