烏骨藤提取物抑制人胃癌卵巢癌裸鼠荷瘤效果的實驗觀察

禇　芳， 李玉云，費　健，黎硯書

（江西省藥物研究所， 南昌 330029）

烏骨藤提取物抑制人胃癌卵巢癌裸鼠荷瘤效果的實驗觀察

禇芳， 李玉云，費健，黎硯書

（江西省藥物研究所， 南昌 330029）

目的觀察烏骨藤提取物對人胃癌、卵巢癌裸鼠模型腫瘤的抑制作用。方法采用人胃癌細胞MKN45接種裸鼠待長出實體瘤，用實體瘤移植裸鼠皮下建立人胃癌裸鼠模型；人卵巢癌移植裸鼠建立實體瘤模型，再通過裸鼠皮下移植實體瘤，建立人卵巢癌裸鼠模型；之后用烏骨藤提取物分別給實驗組灌胃0.5 mL/只，對照組給飲用水，每日1次，連續30 d。每周連續測量體質量和腫瘤大小2次，30 d給藥后處死小鼠，解剖稱腫瘤重量，計算抑瘤率，評價烏骨藤提取物對裸鼠荷瘤的抑制作用。結果烏骨藤提取物對胃癌裸鼠荷瘤和卵巢癌裸鼠荷瘤均有抑制作用，其中烏骨藤組對人胃癌裸鼠荷瘤有明顯的抑制作用。結論烏骨藤提取物對人胃癌、卵巢癌裸鼠荷瘤生長有一定抑制作用。

烏骨藤提取物； 胃癌模型； 卵巢癌模型； 抑制腫瘤作用

烏骨藤是蘿藦科牛奶菜屬植物通光藤Marsdenia tenacissim a （Roxb.） Wight et Am 的藤莖， 始載于《滇南本草》［1］。含有多種甾體酯苷、生物堿、有機酸、多糖、樹脂及色素等多種化學成分［2］。烏骨藤臨床主要用于治療肝癌、肺癌、胃癌。本實驗通過胃癌裸鼠模型和卵巢癌裸鼠模型觀察烏骨藤提取物對人胃癌和卵巢癌裸鼠模型荷瘤的抑制作用， 為應用烏骨藤提取物治療人胃癌、卵巢癌提供依據。

1　材料與方法

1.1受試物

烏骨藤提取物: 用烏骨藤藥材水提醇沉后，采用硅膠柱層析，高速逆流色譜對烏骨藤有效提取部位中的成分進行分離的單體，由本所天然室提供。

1.2實驗動物

BALB/c裸小鼠32只，8～10周齡，體質量18～24 g，由國家嚙齒類種子中心-中國食品藥品檢定研究院實驗動物中心提供［SCXK（京）2009-0017］。實驗動物飼養在江西省藥物研究所IVC籠具內［SYXK（贛）2013-0004］。

1.3人胃癌細胞MKN45株

人胃癌細胞MKN45株由南昌大學第一附屬醫院消化研究所提供。

1.4人卵巢癌

人卵巢癌來源于江西省婦幼保健院診治47歲卵巢癌患者1 例，臨床分期為Ⅲ c 期，病理診斷：卵巢漿液性乳頭狀腺癌（低分化型），卵巢癌組織移植裸鼠，建立人卵巢癌裸鼠原代移植實體瘤模型的基礎上，傳代第十六代實體瘤。

1.5荷瘤鼠模型的建立

人卵巢癌裸鼠模型: 采用人卵巢癌裸鼠移植實體瘤模型［3，4］的方法，將人卵巢癌荷瘤裸鼠的實體瘤剪成直徑為1 mm大小的腫瘤組織，移植于裸鼠右側腋窩外部皮下，共移植16只。

胃癌裸鼠模型: 將人胃癌細胞MKN45 2×107細胞懸液接種裸鼠左側腋窩外側皮下，待裸小鼠皮下可觸及10 mm3大小為成瘤，成瘤后，用解放軍農牧大學軍事獸醫研究所提供的速眠新846合劑，按0.5 mg/kg劑量腹腔注射麻醉裸小鼠，將成瘤裸鼠處死，取腫瘤組織直徑為1 mm大小，移植于裸鼠右側腋窩外部皮下， 共移植16只。

響水澗抽水蓄能電站位于安徽省蕪湖市三山區峨橋鎮境內，距繁昌縣城約25 km，距蕪湖市約45 km。安裝4臺250 MW可逆式水泵水輪發電機組。為保證響水澗發電電動機各項性能指標，本文主要從電磁方案的選型和主要性能的分析計算出發，對該發電電動機的參數選擇的合理性和主要電磁性能指標進行分析。

實體瘤移植后的第4日按體質量分為胃癌模型:對照組，烏骨藤組； 卵巢癌模型: 對照組，烏骨藤組； 每組8只雌性裸鼠。模型對照組每日灌胃給予動物飲用水，實驗組每日灌胃給予烏骨藤提取物，每日1次，0.5 mL/只，連續給藥30 d。

1.6觀測指標

1.6.1測定體質量與腫瘤大小 每周稱量荷瘤鼠體質量，并用游標卡尺測量腫瘤大小兩次，計算瘤體的體積。腫瘤體積: V=π/6×a×b×c （a、b、c為腫瘤的長、寬、高）

1.6.2計算抑瘤率給藥30 d后解剖動物，完整取出瘤塊，用電子天平稱量瘤塊的重量，再根據以下公式計算抑瘤率。

抑瘤率=（對照組平均瘤重—給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%

1.6.3病理學檢查處死后解剖取肝、脾、腫瘤，HE法染色后進行病理學檢查。

1.7統計學方法

2　結果

2.1烏骨藤提取物對荷瘤裸鼠體質量的影響

兩種模型組中烏骨藤組與對照組裸鼠體質量比較均無明顯差異（P＞0.05）（表1、表2）。

2.2烏骨藤提取物對裸小鼠腫瘤體積的影響

兩種裸鼠腫瘤隨時間的增長而增大，且烏骨藤組腫瘤比對照組小。胃癌裸鼠模型: 烏骨藤組腫瘤的增長明顯小于對照組（表3）。卵巢癌裸鼠模型：烏骨藤組腫瘤比對照組小，但與對照組比較差異無統計學意義（表4）。

表1　烏骨藤對胃癌裸小鼠體質量的影響　　　　　　　　　　　　　　　　　g

表2　烏骨藤對卵巢癌裸鼠體質量的影響　　　　　　　　　　　　　　　　　g

表3　烏骨藤對胃癌裸鼠腫瘤生長的影響　　　　　　　　　　　　　　　 mm3

表4　烏骨藤對卵巢癌裸鼠腫瘤生長的影響　　　　　　　　　　　　　　　　mm3

2.3烏骨藤提取物對腫瘤重量的影響

烏骨藤提取物對胃癌荷瘤裸鼠腫瘤具有明顯的抑制作用，烏骨藤組裸鼠的腫瘤重量明顯小于對照組，抑瘤率54.73%，具有顯著性差異（P≤0.01），烏骨藤提取物組卵巢癌裸鼠腫瘤重量小于對照組腫瘤重量，抑瘤率7.59%，無顯著性差異（表5）。

表5　烏骨藤提取物對胃癌卵巢癌裸鼠腫瘤重量的影響及抑瘤率

2.4病理學檢查

人卵巢癌荷瘤裸鼠腫瘤生長速度高于胃癌裸鼠腫瘤生長速度（圖1、圖2）。兩種腫瘤組織結構各有不同，卵巢癌: 皮下移植瘤見癌細胞核大漿小，呈密集片狀排列，浸潤性生長，部分區尚可見腫瘤壞死（圖3）； 胃癌: 皮下移植瘤見大量形態不規則的細胞，少部分排列成腺樣，細胞核深染，異型性明顯， 細胞間結締組織少， 有明顯壞死組織（圖4）。

3　討論

胃癌在全世界范圍內是發病率最高的癌癥之一，是中國的第二大常見腫瘤［5］。據世界衛生組織癌控項目的統計數據，全球每年死于癌癥的患者高達700萬，其中死于胃癌的患者占了70萬例。卵巢癌也是最常見的一種惡性腫瘤，嚴重威脅婦女健康，其發病率在婦科惡性腫瘤中占第三位，死亡率居首位。近年來兩種腫瘤發病率呈上升趨勢，雖然新的治療方法、手段不斷出現，但目前治療方法（包括手術、化療、放療）難以提高其5年生存率。為進一步研究治療胃癌、卵巢癌，尋找新的更有效的治療藥物，從大自然中尋找有效的天然藥物提高其生存率，減小放化療副作用，中醫中藥是最佳選擇。

圖 1 卵巢癌裸小鼠模型

圖 2 胃癌裸小鼠模型

圖 4 裸小鼠移植胃癌組織（HE×10）

烏骨藤，性味苦，微寒，具有消炎、清熱解毒、止咳平喘、散結止痛等功效，可治療肺炎、慢性支氣管炎、咳喘，曾收載于《云南省藥品標準》（1974版）和《中國藥典》（1977版），含有多種甾體酯苷、生物堿、有機酸、多糖、樹脂及色素等多種化學成分，傳統用于咳嗽哮喘、痰咳嗽喘主治氣管炎支氣管哮喘，以單味烏骨藤制備而成的中藥“消癌平片”、“消癌平糖漿”對胃癌、肝癌等多種腫瘤具有確切的抗腫瘤療效，是一種很有前途的抗腫瘤中藥。

現代藥理研究表明，烏骨藤含有的獨特化學成分具有免疫調節、保肝利尿、敗毒抗癌等作用；以制備而成的中藥消癌平，對胃癌、肝癌等消化道腫瘤具有良好的療效，是一種很有前途的抗腫瘤中藥。在動物實驗中，周丹等［6］發現消癌平片灌胃對小鼠移植胃癌、P388 移植性腫瘤抑制作用，且能延長生存。張開通等［7］的研究發現消癌平注射液可以減少H22 肝癌腹水瘤小鼠的腹圍增長率、腹水量、腹水瘤細胞計數，與P53 腺病毒注射液聯合應用上述指標更優，瘤細胞G0/G1 期比例增多，提示兩藥有協同作用。邢旺興等［8］采用MTT法和稻瘟霉法雙重體外篩選模型，并且通過采用雙抗夾心ELISA法檢測腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細胞介素2（IL-2）的表達，來驗證通光藤總苷提取物調節機體免疫的機理。倪沖等實驗表明烏骨藤提取物對多種癌細胞起到抑制作用［9］。

本實驗研究顯示: 烏骨藤提取物對胃癌、卵巢癌荷瘤裸鼠腫瘤生長均有抑制作用，其中對胃癌生長抑制作用更明顯，抑瘤率達54.73%。烏骨藤屬高效低毒天然藥物，值得深入開發研究。

［1］陳奇. 中藥藥理實驗方法學［M ］. 北京: 人民衛生出版社，1993:113 -115.

［2］司徒鎮強， 吳軍正. 細胞培養［M ］. 西安: 世界圖書出版西安公司， 1996:186 - 187.

［3］褚芳， 何國平， 李啟富， 等. 人卵巢癌裸鼠移植實體瘤模型的建立［J］.中國比較醫學雜志， 2008， 18（8）:33-36.

［4］褚芳， 何國平， 余立群， 等.人卵巢癌組織移植裸鼠實體瘤肝脾轉移癌模型的建立［J］.中國比較醫學雜志， 2008， 18 （8）:37-39.

［5］Parkin DM， Bray F， Ferlay J， et al.Global Cancer Statios，2002， CA Cancer J Clin， 2005， 55:74-108.

［6］周 丹， 韓大慶， 劉 偉， 等. 消癌平片抗腫瘤作用研究［J］. 吉林中醫藥， 2002， 22（1）:57.

［7］張開通， 戚曉東， 黃靈， 等. 重組P53 腺病毒聯合中藥治療小鼠腹水瘤的療效［J］. 中國腫瘤生物治療雜志， 2006， 13 （6）:466.

［8］邢旺興， 唐婷， 谷娜， 等. 抗腫瘤中藥通光藤的藥理作用及其作用機理初步研究［J］. 健康研究， 2011， 31（1）:12.

［9］倪沖， 裴志東， 張鎵小， 等. 烏骨藤中白樺酯酸的提取分離及抗腫瘤活性［J］. 中國實驗方劑學雜志， 2012， 18（9）:172-175.

Effect of Extractive from Glaucescent Fissistigma Root on Inhibiting Human Gastric Cancer and Ovarian Cancer in Nude Mice

CHU Fang， LI Yu-yun， FEI Jian， LI Yan-shu
（Institute of Materia Medica of Jiangxi province， Nanchang， 30029， China）

ObjectiveTo observe the effect of the extractive of Glaucescent Fissistigma Root on inhibiting human gastric cancer and ovarian cancer in nude mice. MethodsThe nude mice human gastric cancer model was established by hypodermic inoculation with solid tumors which inoculated with MKN45 cells. The nude mice human ovarian cancer model was established by hypodermic inoculation with solid ovarian tumors from human. Mouse in experimental or control groups were respectively treated by extractive of Glaucescent Fissistigma Root or drinking water for 30 days and 0.5 mL per day. Body weight and the size of tumor was measured twice a week. At 30 days， the inhibitive rate of tumor treated by the extractive of Glaucescent Fissistigma Root was observed to estimateits effect. ResultsThe inhibitive rate in human gastric cancer and ovarian cancer groups were both inhibited by the extractive of Glaucescent Fissistigma Root compared to control， but it significantly inhibited in human gastric cancer group. ConclusionHuman gastric cancer and ovarian cancer groups were both inhibited by Glaucescent Fissistigma Root， and the inhibitive effect was significantly to human gastric cancer group.

Extractive of Glaucescent Fissistigma Root； Gastric cancer； Ovarian cancer；Inhibitive effect to tumor

Q95-33

A

1674-5817（2015）01-0023-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2015.01.005

2014-06-30

江西省自然科學基金項目（編號: 2010GZY0116）

褚芳（1947-）， 研究員， 研究方向: 實驗動物與動物實驗研究與管理， E-mail: chufang0791@163.com