健心顆粒的質量標準研究

林雋丹

（福建省立醫院藥劑科，福建　福州　350001）

?基礎研究?

健心顆粒的質量標準研究

林雋丹

（福建省立醫院藥劑科，福建福州350001）

目的 建立健心顆粒顆粒質量標準，有效控制健心顆粒的質量。方法 用薄層色譜法對該處方中的丹參藥材進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定丹參酮ⅡA的含量。結果 薄層色譜鑒別斑點清晰；HPLC法測定靈敏度高，進樣量在13.93～198.38 μg，范圍內與峰面積值呈良好的線性關系（r2=0.9997），陰性對照無干擾。結論 該法操作簡便，測定結果準確，專屬性強，可作為該制劑的質量控制方法。

健心顆粒；質量標準；薄層色譜法；高效液相色譜法；阿魏酸

慢性心力衰竭在中醫診斷學中稱“心悸”、“水腫”、“喘證”等，常見的標實多為血瘀、痰濁、水飲［1］。本次試驗的健心顆粒為自制，主要由丹參、桂枝、豬苓、蒲黃、黃芪、紅參、白術、葶藶子幾種中藥構成。為控制該藥品的質量，本研究對該方劑中的君藥丹參進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相法測定丹參中丹參酮ⅡA的含量，同時進行方法學考察，結果顯示：此方法準確度高，可靠性高，可用于健心顆粒的質量控制。

1　儀器與試藥

1.1 儀器

KQ3200DE型醫用數控超聲儀（昆山市超聲儀有限公司）；RE-51BA旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試藥

丹參對照藥材（批號110766-200628）、丹參酮ⅡA標準品（批號130937-200632）均購自中國藥品生物制品檢定所，健心顆粒（自制），缺丹參陰性樣品。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2　薄層色譜鑒別

2.1 供試品溶液的制備

取本品約6 g，仔細研磨，加乙酸9 mL，時時振搖，靜置1 h，濾過，旋干濾液，殘渣加醋酸乙酯2 mL使之溶解，作為供試品溶液。

2.2 對照藥材溶液制備

取丹參對照藥材0.2 g，同法制成對照藥材溶液。

2.3 陰性供試品溶液制備

按處方項取各味藥材（除丹參外），取陰性藥品顆粒10 g按2.1項目下方法制備即可。

2.4 測定方法

依據TLC（藥典2010年版一部附錄VI B）進行操作，吸取上述溶液各10 μL，分別點于相同硅膠G薄層板上，將石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8:2）作為展開劑，展開，取出，吹干。在供試品的色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。陰性樣品色譜在與對照品色譜相應的位置上，不顯斑點。見圖1。

圖　1

3　丹參酮ⅡA含量測定

3.1 樣品溶液制備

3.1.1健心顆粒的制備

單取紅參粉碎成細粉，備用。取丹參，加70%乙醇提取2次，1 h/次，過濾，合并濾液；取黃芪、豬苓、白術、桂枝、蒲黃、葶房子和丹參藥渣混合，加適量水煎煮2次，1 h/次，過濾，合并濾液。合并醇提濾液和水提濾液，濃縮，將得到浸膏按處方比例加入紅參細粉和適量糊精與混合，制粒，即為本品［2］。

3.1.2陰性顆粒的制備

按3.1.1項目下方法制備，不加入丹參藥材，即可。

3.1.3對照品溶液的制備

精密稱取丹參酮ⅡA對照品適量，加色譜甲醇制成每1 mL含丹參酮ⅡA20.3 μg的溶液，即得。

3.1.4供試品品溶液的制備

取本品顆粒15 g，精密稱定置具圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，密閉，稱定重量，回流加熱20 min，放冷。稱重，加適當的70%甲醇至與原重相同，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續濾液，即得［3］。

3.2 實驗方法與結果

3.2.1色譜條件

色譜柱為C18柱（上海月旭科技股份有限公司，250 mm×4.5 mm，5 μm）；以甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流動相；測試得到的λm為287 nm；柱溫35℃；流速為1 mL/min，進樣量為15 μL，理論板數按丹參酮ⅡA計算應不低于2000。

3.2.2線性關系的考察

在上述色譜條件下分別進樣2、4、6、10、20、30 μL對照品溶液，記錄色譜圖，以進樣量為橫坐標，以峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=2.2759X-0.2442。r2=0.9997，線性范圍13.93～198.38 μg范圍內，呈現良好的線性關系。見圖2。

圖　2

3.2.3精密度實驗

精密量取對照品溶液進樣6次，10 μl/次，注入液相色譜儀，峰面積的RSD=0.87%。見表1。

表 1

3.2.4穩定性實驗

取健心顆粒供試品溶液分別在0、2、4、6、8、12、24、48 h進樣7次，15 μl/次，記錄丹參酮ⅡA的峰面積，RSD=1.02%，說明樣品在48 h內的供試品溶液較為穩定。

3.2.5重復性試驗

稱取本品顆粒6份按照3.1.1項下操作制備6份樣品溶液進行測定，平均峰面積為21.30496，RSD=0.88%。

3.2.6供試品含量測定

分別精密吸取供試品與對照品溶液各10 μL，進樣，測定，峰面積代入回歸方程求得含量為7.236 μg/g。

4　討 論

4.1 指標成分選擇

丹參所含有的有機酸具有抗心肌缺血作用。有學者研究發現丹參具有增加心臟供血、改善、保護心肌細胞的作用［4-5］。丹參酮ⅡA具有多重藥理活性，能對抗急性心肌缺氧損傷、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，對缺血/再灌注引起的組織損傷具有保護作用，丹參酮ⅡA通過對腫瘤細胞的殺傷、誘導分化和凋亡、抑制侵襲和轉移的機制發揮抗腫瘤作用，所以選擇丹參酮ⅡA作為指標成分進行含量測定。

4.2 實驗方法考察

通過TLC檢視對該復方制劑進行定性鑒別，結果各薄層斑點無陰性對照干擾，斑點清晰。因為丹參在該復方中為君藥，故以丹參酮ⅡA含量含丹參的健心顆粒制劑質量控制指標，丹參酮ⅡA進樣量在13.93～198.38 μg范圍內具有良好的線性關系，r2=0.9997。在287 nm波長處丹參酮ⅡA有最大吸收，且干擾峰較少。選擇甲醇-乙腈-甲酸-水（20:10:1:69）流動相，柱溫35℃，理論塔板數2000，分離度較好。

［1］ 周 瑜，方 銳，王國佐，等.活血化瘀方藥對血瘀證模型的作用機制的研究進展［J］.中醫藥導報，2015，21（12）:87-91.

［2］ 程 沛，韓東岐，胡偉慧，等.高效液相色譜法同時測定丹參中10種水溶性和4種脂溶性成分的含量［J］.藥物分析雜志，2015，35（6）:991-996.

［3］ 佟志軍，楊 磊，王安波，等.用薄層方法系統鑒別復方虎眼萬年青膠囊中丹參藥材［J］.內蒙古中醫藥，2015，2（4）:114-119.

［4］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京:中國醫藥科技出版社，2010.

［5］ 孫毅坤，邸 峰，周富榮.復方丹參片質量標準的研究及其質量考察［J］.中國藥事，2000，14（6）:383-385.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-6681.2015.21.193.02