復方霍山石斛含片增強免疫力功能的試驗研究

吳文華 倪林英 陳鋒 鄭海磊 李濱

摘要 [目的]研究復方霍山石斛含片是否具有增強免疫力的作用。[方法]按《保健食品檢驗與評價技術規范》要求，分別對不同劑量組的小鼠進行細胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細胞功能、NK細胞活性的測定。[結果]細胞免疫功能和單核—巨噬細胞功能為陽性，體液免疫功能和NK細胞活性為陰性。[結論]復方霍山石斛含片具有增強免疫力的功能。

關鍵詞 霍山石斛;含片;小鼠;免疫力

中圖分類號 S567 ?文獻標識碼 A ?文章編號 0517-6611（2015）03-052-03

Research on Enhancing Immunity of the Tablet of Dendrobium huoshanense

WU Wenhua¹， NI Linying²， CHEN Feng²， LI Bin2* et al

（1. Anhui Center for Food and Drug Evaluation & Certification， Hefei， Anhui 230051; 2.Jiuxianzun Huoshan Dendrobium huoshanense Co. Ltd.， Luan， Anhui 237000）

Abstract [Objective] To study the effect of the tablet of Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng on the immune function of mice. [Method] According to demands of Technical Standards for Testing and Assessment of Health Food， cellular immune function， humoral immune function， mononuclear macrophage function and NK cell activity of mice in different dosage group were determined. [Result] The cellular immune function and mononuclear macrophage function is positive， humoral immune function and NK cell activity were negative. [Conclusion] The tablet could enhance immune function of mice.

Key words Dendrobium huoshanense; Tablet; Mice; Immunity

作者簡介 吳文華（1984- ），男，安徽巢湖人，主管藥師，碩士，從事食品監督管理工作。*通訊作者，主管藥師，在讀碩士，從事制藥工程研究。

收稿日期 20141211

復方霍山石斛含片是以中藥霍山石斛、百合、玉竹三者提取物為主要原料，同時添加相關輔料制成的保健食品，所含生物活性物質尤以石斛多糖、玉竹多糖、百合多糖具有抗氧化、免疫調節等作用。將三者進行科學配伍后制成的復方霍山石斛含片，根據《保健食品檢驗與評價技術規范》^[1]之增強免疫力功能試驗的要求，筆者在此對試驗動物小鼠進行細胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細胞功能及NK細胞活性測定，研究復方霍山石斛含片是否具有增強小鼠免疫力的功能，為復方霍山石斛含片的推廣使用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 樣品 復方霍山石斛含片，規格0.8 g/片×40片/瓶，批號130208，由九仙尊霍山石斛股份有限公司提供，樣品形態為黃棕色至棕褐色片劑，密封置陰涼干燥處保存。樣品人體推薦劑量為3.2 g/（人·d）。

1.2 動物來源及分組 選擇購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司繁殖的SPF級CI/F1代200只健康雌性小鼠，體重為19.0～21.9 g，試驗小鼠生產許可證號為SCXK（滬）20080016，合格證號為2008001634291。試驗動物房溫度為21～25 ℃、相對濕度為45%～70%，使用許可證號為SYXK（蘇）20120041。輻照滅菌飼料由蘇州雙獅實驗動物飼料科技有限公司提供，批準文號為蘇飼審（2009）05032。

試驗動物按體重隨機分為5個大組，每大組40只且分成4個劑量組，每個劑量組10只小鼠，其中第一大組動物測定ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化和利用乳酸脫氫酶法測定NK細胞活性;第二大組動物利用耳廓腫脹法進行DNFB誘導小鼠遲發型變態反應;第三大組動物進行體液免疫功能檢測（抗體生成細胞檢測和血清溶血素測定）;第四大組動物進行單核—巨噬細胞功能之碳廓清試驗;第五大組動物進行單核—巨噬細胞功能之利用半體內法進行腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。

1.3 劑量選擇與受試物給予方式 受試樣品的人體推薦劑量為3.2 g/（人·d）（以60 kg體重計），設分別相當于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍的3個劑量組，即027、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）。另設對照組以無菌水代替受試物，即0 g/（kg·bw·d）。采用無菌水配制受試樣品，按高、中、低劑量分別配制濃度為160、53、27 mg/ml，每日一次經口給予受試動物相應劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1 ml/（10g·bw）。連續給藥一個月后按照參考文獻[1]檢測各項功能指標。

2.3.1 復方霍山石斛含片對小鼠碳廓清能力的影響。

經口給予小鼠不同劑量的復方霍山石斛含片一個月后，進行小鼠碳廓清試驗^[6]，計算吞噬指數a，并進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表5可知，1.60 g/（kg·bw·d）組小鼠吞噬指數高于0 g/（kg·bw·d）組，差異有統計學意義（P<0.05）。

表5 復方霍山石斛含片對小鼠碳廓清能力的影響

劑量∥ g/（kg·bw·d）動物數∥只胸腺/體重∥%脾臟/體重

∥%吞噬指數aP值

0100.249±0.0430.447±0.0465.68±0.76

0.27100.258±0.0290.452±0.0516.05±0.890.631

0.53100.246±0.0200.411±0.0536.45±0.910.112

1.60100.251±0.0330.410±0.0556.71±0.730.023

2.3.2 復方霍山石斛含片對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的影響。

經口給予小鼠不同劑量的復方霍山石斛含片30 d后，用半體內法進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗，計算吞噬指數及吞噬百分率，并將吞噬百分率經sin-1P1/2（P為吞噬百分率，用小數表示）轉化后進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求后，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表6可知，1.60 g/（kg·bw·d）組吞噬百分率及吞噬指數高于0 g/（kg·bw·d）組，差異有統計學意義（P<0.05）。

表6 復方霍山石斛含片對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞吞噬率及吞噬指數的影響

劑量

g/（kg·bw·d）動物數

只吞噬百分率

%P值吞噬指數P值

01021.3±2.30.25±0.03

0.271022.4±2.40.5820.25±0.040.932

0.531023.5±2.80.1040.27±0.040.427

1.601026.1±1.90.0000.29±0.020.010

2.4 NK細胞活性測定

經口給予小鼠不同劑量的復方霍山石斛含片30 d后，用乳酸脫氫酶測定法進行小鼠NK細胞活性測定，將其經sin-1P1/2（P為NK細胞活性，用小數表示）轉化后進行方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。由表7可見，0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）組NK細胞活性與0 g/（kg·bw·d）組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

表7 復方霍山石斛含片對小鼠NK細胞活性的影響

劑量

g/（kg·bw·d）動物數

只NK細胞活性

%P值

010 25.2±4.8

0.2710 25.4±6.81.000

0.5310 26.7±10.60.976

1.6010 28.0±8.40.789

3 小結

九仙尊牌清養含片以0.27、0.53、1.60 g/（kg·bw·d）連續給樣30 d，按《保健食品檢驗與評價技術規范》要求，分別對不同劑量組的小鼠進行細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性的測定。結果發現，復方霍山石斛含片增強免疫力功能之細胞免疫功能試驗為陽性、復方霍山石斛含片增強免疫力功能之體液免疫功能試驗為陰性、復方霍山石斛含片增強免疫力功能之單核-巨噬細胞功能試驗為陽性、復方霍山石斛含片增強免疫力功能之NK細胞活性測定試驗為陰性。

根據《保健食品檢驗與評價技術規范》之增強免疫力功能試驗的結果判定，在細胞免疫功能（ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化、DNFB誘導小鼠DTH）、體液免疫功能（抗體生成細胞檢測、血清溶血素測定）、單核-巨噬細胞功能（小鼠碳廓清、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞）、NK細胞活性4個方面任2個方面結果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力作用。在該試驗條件下復方霍山石斛含片具有增強免疫力功能。

參考文獻

[1] 衛生部.保健食品檢驗與評價技術規范[M].北京：清華同方電子出版社，2003.

[2] 程曉霞，陳少鶯，胡奇林，等.小鼠脾淋巴細胞轉化試驗最佳條件的測定[J].福建畜牧獸醫，2003，25（4）：7-9.

[3] 徐孝平，王輝，陳民利，等.鹽酸奧芬米洛對二硝基氟苯誘導小鼠遲發型變態反應的影響[J].浙江中醫藥大學學報，2006，30（6）：617-618.

[4] 張榮標，陳潤，陳冠敏，等.靈芝多糖對小鼠免疫功能影響的實驗研究[C].預防醫學論壇，2012.

[5] 鄭平原，易愛純，胡詠華.松黃顆粒對小鼠遲發型變態反應及血清半數溶血值影響的試驗研究[J].中南藥學，2009，7（8）：586-589.

[6] 秦光和，景簫，王偉，等.墨汁的注入途徑不同對小鼠碳廓清實驗的影響[J].毒理學雜志，2007，21（1）：77-78.