三種雞馬立克氏病疫苗的攻毒保護試驗比較研究

孫玉章，代永聯，吳光玉，衣服德，王永玲

（1.中國動物衛生與流行病學中心，山東青島　 266032；2.青島市畜牧獸醫研究所，山東青島　266100；3.科爾沁右翼中旗動物衛生監督所，內蒙古興安盟　029400）

三種雞馬立克氏病疫苗的攻毒保護試驗比較研究

孫玉章1，代永聯2，吳光玉3，衣服德2，王永玲1

（1.中國動物衛生與流行病學中心，山東青島 266032；2.青島市畜牧獸醫研究所，山東青島266100；3.科爾沁右翼中旗動物衛生監督所，內蒙古興安盟029400）

為比較3種商品化馬立克氏病疫苗的免疫效果，本研究將150只1日齡AA+肉雞隨機分為攻毒對照組、乾元浩疫苗組、梅里亞疫苗組、瑞普疫苗組和空白對照組5組，并按廠家說明劑量進行馬立克氏病疫苗免疫。8日齡時進行馬立克氏病超強毒Md5株攻毒，每天觀察各組臨床癥狀，對病死雞進行剖檢和病理組織學觀察。根據免疫攻毒后的臨床觀察、剖檢病變和病理切片等綜合分析，梅里亞疫苗組的保護指數略高于乾元浩疫苗組和瑞普疫苗組，差異不顯著（P ＞ 0.05），說明不同廠家生產的雞馬立克氏病疫苗對Md5超強毒株的攻擊具有相似的保護效果。因此在生產中使用國產馬立克氏病疫苗或進口馬立克氏病疫苗均能對我國當前流行的馬立克氏病有較好的保護效果。

馬立克氏病；超強毒株；商品化疫苗；免疫效果；病理學觀察

馬立克氏病（Marek’s disease，MD）是由皰疹病毒科馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus，MDV）引起雞的一種高度接觸傳染性T淋巴細胞增生性腫瘤疾病，以內臟器官、外周神經、性腺、虹膜、肌肉和皮膚單獨或多發的淋巴樣細胞浸潤并形成大體腫瘤病變為特征［1-3］。該病存在于世界上所有養禽國家和地區，是一種嚴重危害集約化家禽養殖業的傳染病。雖然MD的疫苗接種是獸醫學成功控制家禽疫病的典型范例，但由于本病的意外暴發以及隨著MDV毒力的不斷增強可能導致的免疫失敗和免疫抑制所造成的嚴重經濟損失，本病仍然是全世界家禽養殖業關注的焦點［1］。

MDV是一群細胞結合性的α-皰疹病毒，但具有γ-皰疹病毒的嗜淋巴特性。根據免疫瓊脂擴散試驗、免疫熒光試驗和型特異單克隆抗體可將MDV分離株分成?、Ⅱ和Ⅲ 3種血清型［3］。?型MDV包括強毒MDV分離株及其人工或自然致弱毒株；Ⅱ型為從雞體分離的無致病性MDV毒株；Ⅲ型包括火雞皰疹病毒（HVT）及其變異株。根據免疫雞群攻毒保護試驗，又可將?型MDV分為四種不同毒力的類型：溫和型（mMDV）、強毒型（vMDV）、超強毒型（vvMDV）和特超強毒型（vv+MDV）。目前我國尚無vv+MDV的分離報道［4］。作為一種可用疫苗防治的腫瘤性疫病，1日齡接種疫苗是有效控制MD和減少經濟損失的主要手段。本研究通過對3種商品化MD疫苗進行的免疫效力比較試驗，旨在比較不同商品化MD疫苗的免疫效果，為當前我國MD的防控提供有益的借鑒。

1　材料與方法

1.1試驗動物、疫苗和病毒株

1日齡AA+肉雞由諸城外貿有限責任公司提供種蛋并孵化。雞馬立克氏病活疫苗（CV?988/ Rispens株）分別由梅里亞動物保健有限公司和乾元浩生物股份有限公司生產；雞馬立克氏病Ⅰ、Ⅲ型二價活疫苗（CV?988+FC126株）由天津瑞普生物技術股份有限公司生產；雞馬立克氏病超強毒Md5株由山東農業大學動物醫學院提供，液氮保存。

1.2試驗分組與攻毒

將150只1日齡AA+肉雞隨機分為5個組，分別為攻毒對照組、乾元浩疫苗組、梅里亞疫苗組、瑞普疫苗組和空白對照組，每組30只，分別隔離飼養。3種疫苗同時按廠家說明劑量接種免疫1日齡AA+肉雞，8日齡時以1 500 PFU/只的劑量分別對試驗組的AA+肉雞腹腔注射馬立克氏病超強毒Md5株，空白對照組腹腔注射等量生理鹽水。所有AA+肉雞分別在隔離器中飼養至67 d，分別于1 d、7 d、15 d和67 d稱量體重并記錄。攻毒后每天觀察所有試驗組雞的精神狀態，記錄其發病和死亡情況。

1.3剖檢和病理組織學檢測

對試驗期間死亡的雞只逐只剖檢，觀察并記錄心、肝、脾、肺、腎、法氏囊、腺胃和肌胃等組織器官的大體病變。試驗期結束后（67日齡），對所有實驗組的雞只分別取血并進行常規血相觀察。將所有試驗組的雞只全部剖殺后，取疑似病變組織器官經甲醛溶液固定、常規法石蠟包埋制片、HE染色后光鏡下觀察各組織器官的病理組織學變化。

2　結果

2.1試驗組的臨床癥狀

攻毒對照組的雞只在攻毒后第2周開始出現厭食、精神萎頓、羽毛蓬亂和體型消瘦，攻毒對照組攻毒后第67天的平均體重相比空白對照組體重平均減少10%～20%，比免疫攻毒組平均減少7%～15%（數據未發表）。攻毒對照組的雞只眼觀可見關節腫大，后期可觀察到馬立克氏病比較典型的劈叉癥狀（圖1A）。攻毒對照組的雞只最早于攻毒后第21天發生死亡，死亡高峰期集中出現在攻毒后第32～50天，病死率為86.67%（26/30）。免疫攻毒組的雞只均有不同程度的出現關節腫大和體型消瘦，在攻毒后第6周開始出現零星死亡的雞只，其中梅里亞疫苗組的病死率（6.67%）略低于乾元浩疫苗組（13.33%）和瑞普疫苗組（10.00%），差異不顯著（P ＞ 0.05）。

圖1 攻毒對照組的臨床癥狀和病理剖檢

2.2病理解剖

攻毒對照組在攻毒后第3周開始出現死亡病例，剖檢未見明顯的眼觀腫瘤病變，可見肝、腎、脾和法氏囊等不同程度的腫大，肺輕度淤血，腺胃黏膜腫脹，輕微出血。攻毒后第6～7周出現的死亡病例剖檢可見肝、脾、腎等腫大，肝臟出現多個白色結節狀腫瘤（圖1B），腺胃腫脹出血，肌胃角質膜易剝離。免疫攻毒組在攻毒后出現的死亡病例剖檢雖可見肝、脾、腎等輕度腫大，腺胃壁增厚，但大體病變輕微，均未出現壞死和腫瘤。

2.3血相與病理組織學觀察

攻毒對照組的雞只血細胞中淋巴細胞數量明顯增多；免疫攻毒組的血細胞中嗜酸性粒細胞也較空白對照組多（圖2）。免疫攻毒組肝臟切片均可見較小的炎性灶，攻毒對照組肝細胞變性、壞死，淋巴細胞大量集聚，出現較多的炎性灶（圖3A）。免疫攻毒組腎臟均出現零星的炎性灶，攻毒對照組可見腎小管局部壞死，梅里亞疫苗組有輕微的淤血和炎性細胞浸潤（圖4C）；免疫攻毒組肺臟均有炎性浸潤，梅里亞疫苗組有輕微淤血，瑞普疫苗組炎性灶最少（圖5D）。

圖2 攻毒各組雞的血液學檢驗

圖3 攻毒各組雞的肝組織的病理學特征（HE，200 ×）

圖4 攻毒各組雞的腎組織的病理學特征（HE，200 ×）

圖5 攻毒各組雞的腎組織的病理學特征（HE，200 ×）

3　討論與分析

由于3種血清型的MDV之間具有一定的交叉保護，因此從上世紀70年代以來，火雞皰疹病毒（herpes virus of turkey，HVT）、HVT+SB-1雙價疫苗和CV?988/Rispens株弱毒活疫苗等都曾先后成為有效預防MD的疫苗。但廣泛使用疫苗也促進了MDV的進化，從上世紀90年代開始歐美地區陸續出現CV?988/Rispens株弱毒活疫苗都不能完全保護的超強毒株和特超強毒株［5］，給世界養禽業造成巨大損失。由于我國的養禽情況更為復雜，如MDV野毒株毒力的不斷增強、幼仔雞的早期感染、MD疫苗的使用不當以及大環境生物安全措施的缺位等，MD的流行每年給中國的養禽業造成的損失數以百億計。

免疫攻毒試驗結果表明，超強MDV病毒株的感染可以造成嚴重的免疫器官衰竭和明顯的免疫抑制，通過反復發生溶細胞性感染引發淋巴器官受損，產生轉化感染并誘發腫瘤形成［6］。CV?988/ Rispens株疫苗仍是目前預防MD超強毒株感染效果最好的疫苗之一，能夠比其它MD疫苗提供更好的免疫保護力，有效地預防大多數MDV流行毒株的侵襲。本研究中不同廠家生產的雞馬立克氏病疫苗均能夠對MD超強毒Md5株的攻擊起到相近的保護效果。因此在生產中使用國產MD疫苗或進口MD疫苗均能對我國當前流行的MD有較好的保護效果。但也有研究指出，MDV強毒株感染和CV?988/Rispens株在雞體內的復制是相互獨立的［7］，使用CV?988/Rispens株疫苗也會造成機體免疫器官或非免疫器官出現不同程度的淋巴細胞浸潤，因此可能會對雞的生長和免疫產生一定的影響［8］。在本研究中，3組免疫攻毒組均出現了與攻毒對照組相似的病變，盡管剖檢未發現腫瘤病變，但疫苗的毒力效應不可忽視。因此有必要開發MD新型弱毒疫苗或基因缺失苗，對于我國預防和控制MD的發生和減少養禽業的損失具有重要意義。同時應該意識到，疫苗的使用不能從根本上阻斷MDV的感染和傳播，必須采取培育新型遺傳抗性品種［9］和加強養禽場的生物安全防控［10］等措施來控制MD的發生和流行。

［1］Saif Y M. 禽病學［M］. 蘇敬良，高福，索勛，譯. 12版. 北京： 中國農業出版社，2012： 522-599.

［2］白文彬，于康震. 動物傳染病診斷學［M］. 北京： 中國農業出版社，2002： 228-233.

［3］韋平，秦愛建. 重要動物病毒分子生物學［M］. 北京： 科學出版社，2008： 107-132.

［4］崔治中. 中國雞群病毒性腫瘤病及防控研究［M］. 北京：中國農業出版社，2012.

［5］Haq K，Fear T，?braheem A，et al. ?nfluence of vaccination with CV?988/Rispens on load and replication of a very virulent Marek's disease virus strain in feathers of chickens ［J］. Avian Pathol，2012，41（1）： 69-75.

［6］賀君君，滕麗瓊，韋平，等.馬立克氏病病毒體內復制動力學研究進展［J］. 中國家禽，2011，33（5）： 47-51.

［7］Davison F，Nair V. Use of Marek’s disease vaccines： could they be driving the virus to increasing virulence？ ［J］. Expert Rev Vaccines，2005，4（1）： 77-88.

［8］鄭永勝，張艷萍，李志杰，等. 雞馬立克氏病病毒疫苗株對強毒株的復制抑制作用［J］. 中國預防獸醫學報，2014，36（1）：7-10.

［9］ 金元昌，陳壯，李玉峰，等. 抗性選育協同疫苗免疫對雞羽囊馬立克病毒載量的影響［J］. 畜牧獸醫學報，2015，46（5）：836-840.

［10］ 周蛟. 我國當前禽病流行概況及防控對策［J］. 獸醫導刊，2014，（12）： 37-38.

（責任編輯：胡藕祥）

Comparison of Vaccine Eff cacy in Chickens Challenged with Very Virulent MDV Strain Md5

Sun Yuzhang1，Dai Yonglian2，Wu Guangyu3，Yi Fude2，Wang Yongling1
（1. China Animal Health & Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032；2. Qingdao ?nstitute of Animal Husbandry & Veterinary Science，Qingdao，Shandong 266100；3. Horqin Right Wing Middle Banner ?nstitute of Animal Health Supervision，Xing'an League，?nner Mongolia 029400）

The present study was conducted to compare the vaccine efficacy in AA+ chickens challenged with very virulent MDV strain Md5. 150 AA+ chickens were randomly divided into 5 groups： challenge control group，QYH vaccine group，Merial vaccine group，Ringpu vaccine group and unvaccinated control group. Chickens were vaccinated with each three types of MD vaccine at 1 day old，and were challenged with Md5 strain at 8 days old. During 60 days after challenge，all dead chickens were collected and dissected for histopathology examination. The result showed that there was no obvious difference in immune-protection among the three MD vaccines （P ＞ 0.05），and the domestic MD vaccine was as efficient as imported MD vaccine. Nevertheless，it is still necessary to develop novel non-toxicity vaccines or gene-deleted vaccines in the future.

Marek's disease；very virulent strain；commercial vaccine；vaccine efficacy；histopathology

S859.79+7

B

1005-944X（2015）11-0087-04

中央財政農業技術推廣項目（CA201403025）；山東省現代農業產業技術體系創新團隊建設專項資金（SDA?T-13-011-13）

王永玲