高效液相色譜法測定清淋片中苦參堿含量

賈永亮，李曉燕，李成，盧燕

（1.河北省鹽山縣人民醫院藥劑科，河北滄州061300；2.河北以嶺醫藥研究院，河北石家莊050035）

高效液相色譜法測定清淋片中苦參堿含量

賈永亮1，李曉燕2，李成2，盧燕2

（1.河北省鹽山縣人民醫院藥劑科，河北滄州061300；2.河北以嶺醫藥研究院，河北石家莊050035）

目的建立測定清淋片中苦參堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為NH2氨基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9），流速1 mL/min，檢測波長為210 nm。結果苦參堿進樣量在86.697 6～1 812.000 0 ng范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0.999 99），平均加樣回收率為99.74%，RSD為1.57%（n=9）。結論該法簡便、準確、重復性好，可用于清淋片中苦參堿的含量測定。

清淋片；苦參堿；高效液相色譜法

清淋片由柴胡、黃芩、大黃、苦參等7味中藥材組方，具有疏解肝經氣滯、清化下焦濕熱的功效，臨床主要用于治療急性下尿路感染，療效顯著。苦參為臣藥，其主要活性成分為生物堿和黃酮類［1］，其中苦參堿具有很好的抗炎作用［2-3］。為全面控制清淋片的質量，對苦參中苦參堿進行了定量研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器；KQ-250B型超聲波清洗器；AT201型Mettler-Toledo電子天平。苦參堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110805-200306）；清淋片（石家莊以嶺藥業股份有限公司，批號為130101，130102，130103）；乙腈、無水乙醇為色譜純，其余均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Waters Spherisorb NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9）；流速：1 mL/min；檢測波長：210 nm。理論板數按苦參堿峰計應不低于2 000。

2.2 溶液制備

取苦參堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含苦參堿0.3 mg的溶液，用鹽酸-甲醇（1∶25）溶液稀釋成每1 mL含苦參堿30 μg的溶液，作為對照品溶液。取樣品研細，取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加80%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）20 min，放冷，密塞，再稱定質量，用80%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液3mL，加在中性氧化鋁柱（120～150目，4 g，內徑1 cm）上，用甲醇洗脫至10 mL的容量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。另取方中除苦參的其他藥材，按制備工藝制得陰性樣品，按供試品溶液的處理方法，得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取2.2項下3種溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，依法測定。可見，對照品溶液與供試品溶液色譜峰保留時間一致，陰性樣品無干擾，見圖1。

線性關系考察：分別精密吸取質量濃度為8.697 6，17.395 2，28.992 0，90.600 0，144.960 0，181.200 0 μg/mL的苦參堿對照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標、苦參堿進樣量（X）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=1.493 5 X+1.196 6，r=0.999 99（n=6）。結果表明，苦參堿進樣量在86.697 6～1 812.000 0 ng范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液各10 μL，在擬訂色譜條件下連續進樣5次，測定峰面積。結果的RSD為0.90%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液各10 μL，分別于0，2，5，8，10，13，24 h進樣測定峰面積。結果的RSD為1.71%（n=7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

圖2 高效液相色譜色譜圖

重復性試驗：取同一批樣品9份，分別取高（0.6 g）、中（0.5 g）、低（0.4 g）3個劑量，依法測定。結果的RSD為1.02%（n=9），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批已知含量的樣品9份，分為3組，分別精密加入25 mL高、中、低3種不同質量濃度的苦參堿對照品80%甲醇溶液，超聲提取，依法測定結果，計算回收率。見表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗結果（n=9）

耐用性試驗：取同一份樣品，分別在不同的測定波長、柱溫及色譜柱的條件下檢測苦參堿的含量，結果在210，208，212 nm波長下檢測，苦參堿的RSD為0.88%；20，25，30℃的柱溫下檢測，苦參堿的RSD為0.36%。所考察的兩種色譜柱對樣品的分離無影響，因此測定條件的微小變動對檢測結果無影響。

2.4 樣品含量測定

用所制訂的含量測定方法，對3批清淋片進行了苦參堿的含量測定。結果批號為130101，130102，130103的3批樣品中苦參堿的含量分別為每片1.967，1.985，1.972 mg。

3 討論

本研究中曾采用2010年版《中國藥典（一部）》苦參項下苦參堿含量測定的流動相［4］，但苦參堿的保留時間較短，不利于樣品分析，特別是對處方藥味較多的制劑色譜峰分離較差。經反復調整流動相比例，確定流動相為乙腈-無水乙醇-2%磷酸溶液（84∶7∶9），色譜峰分離良好。

對苦參堿對照品溶液進行光譜掃描，結果苦參堿在200 nm處有最大吸收，其他成分無干擾，因此選擇210 nm為檢測波長。

曾選擇70%，80%，90%及甲醇進行提取，結果以甲醇作為提取溶劑時苦參堿的含量較低，而含水甲醇提取時苦參堿的含量較高，且不同含水甲醇苦參堿的含量相差不大。當選擇80%甲醇，雜質峰較多，不利于苦參堿的測定，以甲醇作洗脫劑色譜峰分離良好，且10 mL即可洗脫完全。考慮到氧化鋁的質量會影響含量測定，因此選擇不同廠家及不同批號氧化鋁進行試驗，結果顯示，市場上常用的氧化鋁均可用于苦參堿的含量測定。

文獻［5-8］均采用氯仿萃取或上氧化鋁柱、氯仿洗脫，亦有采用緩沖鹽作流動相、氯仿提取的處理方法［9-10］。本研究中供試品溶液制備方法采用常規的含水甲醇作提取溶劑及用甲醇作洗脫劑，與采用三氯甲烷相比，降低了有毒試劑的危害，利于環保，且方法簡便，重復性好，易操作。

［1］苗抗立，張建中，董穎，等.苦參的化學成分及藥理研究進展［J］.天然產物研究與開發，2001，13（2）：69-73.

［2］焦霞，沈其昀.苦參生物堿的臨床及藥理研究進展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2002，13（3）：192-194.

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［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：188-189.

［5］周世玉，周曉英，唐婧坤.高效液相色譜法測定苦參片中苦參堿的含量［J］.中國藥業，2011，20（7）：27-28.

［6］葉秀金，宋粉云.HPLC法測定清肺抑火丸中苦參堿和氧化苦參堿的含量［J］.中國藥房，2011，22（12）：1 127-1 129.

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Determination of Matrine in Qinglin Tablets by HPLC

Jia Yongliang1,Li Xiaoyan2,Li Cheng2,Lu yan2
（1.Hebei province Yanshan County People′s Hospital Department of Pharmacy,Cangzhou,Hebei,China061300；2.Hebei Yiling Medicine Institute,Shijiazhuang,Hebei,China050035）

ObjectiveTo establish a method for content determination of matrine in Qinglin Tablets.MethodThe NH2column（250 mm× 4.6 mm，5 μm）was used.Mobile phase：acetonitrile-ethanol absolute-2%phosphoric acid solution（84∶7∶9）.Flow rate：1 mL/min.The detection wavelength：210 nm.ResultsThe calibration curve of matrine showed a good linearity within the range of 86.697 6-1 812.000 0 ng（r=0.999 99）.The average recovery was 99.74%and RSD was 1.57%（n=9）.ConclusionThe method is convenient,accurate and reproducible to operate and suitable for the quality control of Qinglin tablets.

Qinglin Tablets；matrine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0073-02

賈永亮（1975-），男，主管藥師，研究方向為醫院制劑質量檢測，（電子信箱）872416195@qq.com；李曉燕（1974-），女，滿族，高級工程師，主要從事中藥新藥開發及質量標準研究，本文通訊作者，（電話）0311-85901590（電子信箱）sjzyllxy@163.com。

2014-10-27；

2015-04-02）