黃芪降濁顆粒質量標準研究

康新莉，宋英，譚睿

（1.西南交通大學生命科學與工程學院，四川成都610031；2.成都中醫藥大學附屬醫院，四川成都610075）

黃芪降濁顆粒質量標準研究

康新莉1，宋英2，譚睿1

（1.西南交通大學生命科學與工程學院，四川成都610031；2.成都中醫藥大學附屬醫院，四川成都610075）

目的建立黃芪降濁顆粒的質量標準。方法采用薄層色譜（TLC）法對黃芩、金櫻子、大黃進行定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中黃芩甲苷的含量。結果在選定的薄層色譜條件下，層析斑點清晰，分離效果較好，陰性對照無干擾；含量測定時，黃芪甲苷質量濃度在5.42～212.52 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好（r2=0.999 9，n=6），平均回收率為97.33%，RSD=1.85%（n=6）。結論該方法簡便、準確、專屬性強，可用于控制該制劑的質量。

黃芪降濁顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法；黃芩甲苷；質量標準

糖尿病腎病是糖尿病患者嚴重的并發癥［1-2］，其中瘀血與濁毒是其不愈或加重的癥結所在。黃芪降濁顆粒由黃芪、金櫻子、川芎等中藥組方，是成都中醫藥大學附屬醫院經過多年的臨床實踐總結出來的經驗方，用于糖尿病腎病患者的對癥治療，有活血化瘀、托毒排膿降濁功效［3］。根據臨床需要和劑型的選擇，醫院將原湯劑改進為顆粒劑，旨在提高患者的用藥依從性。筆者在劑型改進的基礎上對黃芪降濁顆粒進行了質量標準研究，為其醫院制劑注冊提供依據。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2424 ELSD型檢測器；Sartoius BS110型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；KQ5200DE型超聲波清洗儀（上海昆山超聲波儀器廠）。黃芪降濁顆粒（成都中醫藥大學附屬醫院制劑室自制，批號為20120923，20120924，20120925）；陰性對照樣品（自制）；黃芪甲苷對照品（批號為110781-200613）、金櫻子對照藥材（批號為110781-200613）、大黃對照藥材（批號為110781-200613），供含量測定用，均由中國藥品生物制品檢定所提供；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別［4］

黃芪：取本品8 g，加60℃水20 mL，超聲30 min，濾過，濾液用水飽和的正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺黃芪的陰性對照樣品，同法制得陰性對照品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G板，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（10∶1∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點，見圖1A。

金櫻子：取本品4 g，加乙醇30 mL，超聲30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL，乙酸乙酯振搖提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。取金櫻子對照藥材及缺金櫻子的陰性對照樣品，同法制得對照藥材溶液和陰性對照品溶液。照薄層色譜法［2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠板G板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（5∶5∶1.5∶0.5∶2）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點，見圖1B。

金櫻子：取本品2 g，加甲醇40 mL，浸泡1 h，濾過，取濾液10 mL，蒸干，殘渣加10 mL水溶解，再加1 mL鹽酸，加熱回流30 min，冷卻，乙醚分2次振搖，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL溶解，作為供試品溶液。取缺金櫻子的陰性對照樣品，同法制得陰性對照品溶液。取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠H板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點，見圖1C。

2.2 黃芪甲苷含量測定［5-11］

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（36∶64）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；ELSD參數：漂移管60℃，氣體壓力30 Psi，噴霧器加熱60%模式、增益20；進樣量：10 μL。理論板數按黃芪甲苷計算不低于4 000。

圖1 薄層色譜圖

2.2.2 溶液制備

稱取黃芪甲苷對照品17.71 mg，精密穩定，置25 mL容量瓶，加入甲醇充分溶解并定容，得質量濃度為0.708 4 g/L的對照品貯備液，搖勻，待用。取顆粒5 g，研細，精密稱定，加甲醇150 mL，超聲1 h，濾過，蒸干加40 mL水溶解，水飽和的正丁醇振搖4次，每次40 mL，合并正丁醇液，氨試液洗滌3次，每次40 mL，棄去氨液，用正丁醇飽和的水溶液洗滌3次，每次40 mL，取正丁醇液，蒸干，加甲醇溶解，置5 mL容量瓶中定容，作為供試品溶液。取缺黃芪的陰性對照樣品，研細，按供試品溶液制備方法制備，得陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取2.2.2項下3種溶液，照2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜峰，見圖2。結果表明，黃芪甲苷色譜峰分離良好，且樣品中其他成分對黃芪甲苷的測定無干擾。

線性關系考察：精密量取黃芪甲苷對照品貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別定容于10 mL容量瓶中，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，以對照品質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=10 984X-40 140，r=0.999 9（n=6）。結果表明，黃芩苷質量濃度在35.42～212.52 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一黃芪甲苷對照品溶液，按2.2.1項下色譜條件重復進樣6次。結果峰面積的RSD=1.44%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20120923），精密稱定，依法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣測定。結果峰面積的RSD=1.86%（n=6），表明方法的重復性較好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時依法進樣測定。結果峰面積的RSD=1.14%（n=6），表明供試品溶液在制備后12 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的同一批樣品（批號為20120923），精密稱定，分別加入黃芪甲苷對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進樣測定含量，計算回收率。結果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣測定。結果批號為20120923，20120924，20120925的3批樣品中黃芪甲苷含量分別為0.1336，0.1374，0.1408 mg/g。根據含量測定結果，暫訂本品每1 g含黃芪以黃芪甲苷計不得少于0.12 mg。

圖2 高效液相色譜圖

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗結果（n=6）

3 討論

根據該制劑處方組成，黃芪為主藥，其主要藥效成分為黃芪甲苷，故選擇黃芪甲苷作為含量測定指標。曾試用色譜柱為Phenomenex C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）及Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），結果黃芪甲苷色譜峰分離度均良好，故選用后者。參考相關文獻并考慮到蒸發光檢測器的特點，溫度太低不利于檢測，采用柱溫分別為25，30，40℃進行試驗，結果柱溫為30℃時分離相對較好，樣品穩定，故選用柱溫為30℃。

參考2010年版《中國藥典（一部）》，在流速為1.0 mL/min條件下，試用乙腈-水（32∶68）、乙腈-水（36∶64）、乙腈-水（40∶60）為流動相，結果乙腈-水（36∶64）為流動相時黃芪甲苷色譜峰峰形和保留時間較好，故選用乙腈-水（36∶64）為流動相。

［1］孫勝男，趙維剛，董穎越，等.糖尿病患者自我管理現狀及影響因素分析［J］.中華護理雜志，2011，46（3）：229.

［2］翁建平.糖尿病腎病的診斷與治療［J］.臨床內科雜志，2005，22（3）：150.

［3］劉儀紅，田浩明.黃芪治療糖尿病腎病的系統評價［J］.中國循診醫學雜志，2007，7（10）：715.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄XD.

［5］段立軍，孫博航.黃芪甲苷研究進展［J］.沈陽藥科大學學報，2011，28（5）：410-414.

［6］江清林，李延軍，辛華，等.黃芪甲苷對胰島素C肽分泌作用研究［J］.黑龍江醫藥科學，1999，22（3）：4.

［7］江清林，姜吉文，呂學詵，等.黃芪甲苷對類胰升血糖素肽-1作用的研究［J］.中國老年學雜志，2003，23（1）：52.

［8］南克祎，邢淵.胰升血糖素樣肽1對胰島β細胞的調控作用［J］.甘肅醫藥，2011（7）：405-407.

［9］劉浩文，劉嘉儀，楊妙榮，等.黃芪藥材中黃芪甲苷含量測定的兩種方法的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22（6）：659-662.

［10］翟海云，吳燕紅，黃慶華，等.RP-HPLC法測定復方補氣養血口服液中黃芪甲苷的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2006，17（2）：130-131.

［11］李翔，朱臻宇，朱東亮，等.高效液相色譜法-蒸發光散射檢測梯度洗脫法測定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量［J］.第二軍醫學報，2006，27（3）：331-333.

Quality Standard of Huangqijiangzhuo Granules

Kang Xinli1，Song Ying2，Tan Rui1
（1.College of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu，Sichuan China610031；2.Teaching Hospital of Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan China610075）

ObjectiveTo establish the quality standard for Huangqijiangzhuo Granules.MethodsTheRadix Astragali，Rosalaevigata Mickx，Rheum Palmatum were identified by TCL and the content of astragalosideⅣwas determined by HPLC.ResultsThe dapples in the TLC plate are clean and the result of Separation is good.and the negative control showed no interference.The mass concentration of astragalosideⅣhas a good linear relationship with the peak area in the range of 5.42-212.52 μg/mL（r2=0.999 9，n=6），the average recovery of astralosideⅣwas 97.33%，RSD=1.85%（n=6）.ConclusionThe method is simple，accurate and specific，and can be used to control the quality of the preparation.

Huangqijiangzhuo granules；TCL；HPLC；astragalosideⅣ；quality standard

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0077-03

康新莉，女，在讀碩士研究生，藥師，研究方向為民族藥物資源評價，（電子信箱）1315356502@qq.com；譚睿，女，博士研究生，教授，研究方向為中藥質量標準規范化和新制劑研發，本文通訊作者，（電話）028-8734667（電子信箱）tanrui@swjtu.edu.cn。

2015-04-13）