礞石滾痰片質量標準研究

袁春筱

（重慶醫科大學附屬第二醫院，重慶400010）

礞石滾痰片質量標準研究

袁春筱

（重慶醫科大學附屬第二醫院，重慶400010）

目的建立礞石滾痰片的定性鑒別和含量測定方法。方法用薄層色譜（TLC）法定性鑒別礞石滾痰片中大黃素，用高效液相色譜（HPLC）法測定黃芩中黃芩苷含量。色譜柱為迪馬C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55），流速為1.0 mL/min；檢測波長為280 nm。結果TLC斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾；黃芩苷進樣量在0.193 6～1.936 0 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系（r=0.999 9）；平均回收率為98.70%，RSD為0.56%（n=6）。結論該方法可用于礞石滾痰片的質量控制。

礞石滾痰片；質量標準；大黃素；黃芩苷

礞石滾痰片是由金礞石、沉香、大黃等的提取物制成的中藥制劑，具有降火逐痰的功效，用于濕熱頑痰、癲狂驚悸或咳嗽喘痰稠、大便秘結，臨床療效顯著。其質量標準僅收載顯微鑒別項目，未建立專屬控制指標。李卿等［1］等采用高效液相色譜（HPLC）法測定礞石滾痰片中黃芩苷的含量［1］。為有效監測該制劑的產品質量，本研究中用薄層色譜（TLC）法對制劑中的大黃素進行定性鑒別，采用HPLC法測定黃芩中黃芩苷含量，為完善產品的質量控制體系提供了理論依據。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；薄層成像色譜儀（瑞士卡瑪公司）；AE-240S型電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海＞有限公司）；KQ-400DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。黃芩苷對照品（批號為110715-200514，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；硅膠G預制薄層板（青島海洋化工有限公司）；礞石滾痰片樣品（市售）；缺大黃陰性樣品（本院提供）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 大黃薄層色譜鑒別

取本品10片，研細，稱取0.5 g，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%鹽酸溶液15 mL使溶解，加熱回流1 h，冷卻，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液；再稱取缺大黃的陰性樣品0.5 g，同法制成缺大黃的陰性對照品溶液。照薄層色譜法［（2010年版中國藥典（一部）附錄ⅥB］試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏15 min后，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的紅色斑點，陰性無干擾（見圖1）。

圖1 大黃薄層色譜鑒別圖

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：迪馬C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm。理論板數以黃芩苷計算不低于3 000。精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL，進樣測定。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應保留時間處有相應色譜峰，目標峰與相鄰色譜峰分離度均大于1.5，見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

取本品10片，研細，取約0.1 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理（功率100 W，頻率40 kHz）30 min，放冷至室溫，加70%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。稱取黃芩苷對照品2.42mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加70%乙醇使溶解，并用70%乙醇定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取不含黃芩的陰性樣品適量，照供試品溶液制備方法，制備缺黃芩的陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取對照品溶液2，4，8，12，16，20 μL，注入液相色譜儀，以峰面積積分值（A）為縱坐標、進樣量（C，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程A=3 049 533 C-156 477，r=0.999 9（n=6）。結果黃芩苷進樣量在0.193 6～1.936 0 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，重復進樣5次，進樣量10 μL，測定峰面積。結果，黃芩苷峰面積的RSD為0.63%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，1，3，6，12 h時注入高效液相色譜儀，測定黃芩苷峰面積。結果的RSD為0.71%（n=5），表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品，按擬訂方法平行制備供試品溶液5份，進樣測定黃芩苷含量。結果的RSD為1.08%（n=5），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：取本品內容物適量，研細，精密稱定6份，分別加入黃芩苷對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備待測溶液，依法進樣，測定黃芩苷含量，計算回收率。結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取不同批號樣品，依法制備供試品溶液，進樣測定，計算黃芩苷的含量。結果批號為140405，140501，140604的樣品中分別含黃芩苷每片23.12，23.07，22.80 mg。

3 討論

本試驗中選用甲醇-水系統作流動相，參照2010年版《中國藥典（一部）》［2］黃芩藥材項下黃芩苷含量測定項下色譜條件，用甲醇-0.2%磷酸水溶液（45∶55）為流動相，能使樣品中黃芩苷與相鄰色譜峰達到基線分離，峰形對稱，陰性對照無干擾。

黃芩苷在甲醇、乙醇中溶解性較好［3-9］，經多種溶劑試驗篩選，選用70%乙醇作提取溶劑，樣品超聲處理30 min，放冷至室溫，定容至100 mL，制得供試品溶液。按此方法制備的供試品溶液進行試驗，操作簡單，重復性好，回收率達到要求。

本試驗中建立的鑒別大黃的薄層色譜法，能鑒別出大黃素對照品的特征性斑點；建立的測定黃芩苷含量的HPLC法精密度、穩定性、重復性均符合要求。

［1］李卿，陳志新，秦劍，等.高效液相色譜法測定礞石滾痰片中黃芩苷含量［J］.中國藥業，2010，19（8）：38.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科科出版社，2010：282-283.

［3］宋鳳蘭，何洋，何琳.葛根芩連滴丸的質量標準研究［J］.廣東藥學院學報，2014，30（4）：439-443.

［4］敖立實，孫宇光，趙俊華.高效液相色譜法同時測定黃連解毒丸中黃芩和大黃的含量［J］.中國醫藥指南，2014，12（15）：71-72.

［5］王躍茹，王利，陳衛東.HPLC法測定清肺飲中黃芩苷的含量［J］.現代中藥研究與實踐，2009，23（4）：61-62.

［6］佟若菲，張囡，林宏.HPLC法測定病毒合劑中黃芩苷、綠原酸和連翹酯苷A［J］.現代藥物與臨床，2014，29（3）：259-261.

［7］范全民.HPLC測定小兒退熱口服液中綠原酸與黃芩苷含量［J］.現代中藥研究與實踐，2011，25（2）：72-74.

［8］劉金欣，孟繁蘊，張勝海.UPLC同時測定黃芩中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A［J］.中草藥，2014，45（10）：1 477-1 480.

［9］王璐.HPLC法進行芩霍雙清飲中黃芩苷的含量測定［J］.中國現代藥物應用，2014，8（18）：235-236.

Quality Standard of Mengshi Guntan Pills

Yuan Chunxiao
（The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，China400010）

ObjectiveTo establish the methods of qualitative identification and content determination in Mengshi Guntan Pills.Methods The TLC method was used to qualitatively identify emodin，and the content of baicalin was determined by HPLC.The chromatographic column was Dikma C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm），with methanol-0.2%phosphoric acid（45∶55）as the mobile phase and the detection wavelength was at 280 nm.ResultsThe TLC spots developed were fairy clear，and the blank test showed no interference.The linear ranges were 0.193 6-1.936 0 μg（r=0.999 9）.The average recavery rate was 98.70%,RSD was 0.56%（n=6）.Conclusion The established qualitative and quantitative analysis method is applicable for the quality control of Mengshi Guntan Pills.

Mengshi Guntan Pills；quality standard；emodin；baicalin

284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）20-0083-03

2014-10-27；

2015-04-21）