硝酸咪康唑乳膏中防腐劑測(cè)定方法的建立

劉燕

（陜西省榆林市藥品檢驗(yàn)所，陜西榆林719000）

硝酸咪康唑乳膏中防腐劑測(cè)定方法的建立

劉燕

（陜西省榆林市藥品檢驗(yàn)所，陜西榆林719000）

目的建立測(cè)定硝酸咪康唑乳膏中防腐劑含量的高效液相色譜法。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（72∶28）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm。結(jié)果苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯的檢出限分別為4.77，5.26，10.24 ng，進(jìn)樣量線性范圍分別12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 96，0.999 97，0.999 91（n=6）。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，能更好地檢測(cè)硝酸咪康唑乳膏中防腐劑的含量。

硝酸咪康唑；防腐劑；高效液相色譜法；含量

硝酸咪康唑?yàn)檫溥蝾悘V譜抗真菌藥，對(duì)許多臨床致病真菌如白色念珠菌、新生隱球菌、芽生菌、球孢子菌、擬酵母菌等深部真菌和一些表皮真菌及酵母菌等均有良好的抗菌作用，還對(duì)葡萄球菌、鏈球菌和炭疽桿菌等革蘭陽性菌有抑菌作用［1-3］。硝酸咪康唑乳膏作為外用多劑量制劑，生產(chǎn)廠家為確保產(chǎn)品的穩(wěn)定性，往往會(huì)添加不同種類和劑量的防腐劑。本研究中收集了市場(chǎng)上37家生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品，建立了能同時(shí)測(cè)定硝酸咪康唑乳膏中可能添加的3種防腐劑的高效液相色譜（HPLC）法，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了有效的檢測(cè)方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀；Empower工作軟件；賽多利斯BP211D型電子分析天平（精度0.01 mg）。硝酸咪康唑乳膏（37家生產(chǎn)企業(yè)市售樣品共146批）；苯甲酸對(duì)照品（批號(hào)為100870-200801），山梨酸對(duì)照品（批號(hào)為100870-200801），羥苯乙酯對(duì)照品（批號(hào)為100870-200801），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純（Merck公司），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果［4-5］

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈（72∶28）；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；流速：1.0 mL/min。理論板數(shù)按苯甲酸峰計(jì)算不低于5 000，苯甲酸峰與山梨酸峰分離度不低于2.0。精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯對(duì)照品適量，加乙醇溶解并稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.05，0.02，0.1 g/L的溶液，作為混合對(duì)照品溶液，精密吸取10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果色譜圖中苯甲酸峰與山梨酸峰的分離度為4.7（見圖1）。

2.2 溶液制備

取供試品內(nèi)容物約2.5 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振搖至完全溶解，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯各適量，用乙醇稀釋成含苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯0.05，0.02，0.10 g/L的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方量精密稱取不含防腐劑的樣品2.5 g，置具塞三角瓶中，精密加入乙醇20 mL，振搖至完全溶解，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為空白溶液。

2.3 測(cè)定方法

精密吸取空白溶液、混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、對(duì)照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。按自身對(duì)照外標(biāo)法計(jì)算各防腐劑含量，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取苯甲酸對(duì)照品、山梨酸對(duì)照品、羥苯乙酯對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1 mL含苯甲酸12.5，25.0，50.0，100.0，200.0 μg，含山梨酸5，10，20，40，80 μg，含羥苯乙酯25，50，100，200，400 μg的溶液，分別取10 μL，注入高效液相色譜儀，以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積的對(duì)數(shù)（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=5）

檢出限和定量限確定：將對(duì)照品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，制得一系列不同質(zhì)量濃度的溶液，依法進(jìn)行分析，以S/N=3為檢測(cè)限，S/N=10為定量限。結(jié)果苯甲酸檢測(cè)限為4.77 ng，定量限為9.54 ng；山梨酸檢測(cè)限為5.26 ng，定量限為10.52 ng；羥苯乙酯檢測(cè)限為10.24 ng，定量限為20.48 ng。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定色譜主峰峰面積。結(jié)果峰面積的RSD苯甲酸為0.36%，山梨酸為0.74%，羥苯乙酯為1.41%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一混合對(duì)照品溶液，測(cè)定其室溫放置0，0.5，1，2，4，8，12，24 h時(shí)的主峰峰面積。結(jié)果苯甲酸、山梨酸及羥苯乙酯的RSD分別為0.51%， 0.49%，0.91%（n=8），表明溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

破壞性試驗(yàn)［5］：取混合對(duì)照品溶液10 mL，置強(qiáng)光下照射0，1，2，4，6，8，12，24 h，分別取各時(shí)間段破壞的溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定各主峰峰面積。結(jié)果苯甲酸、山梨酸及羥苯乙酯峰面積的RSD分別為1.24%，1.36%，1.89%（n=8），表明溶液在光照條件下24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取硝酸咪康唑乳膏原料及相關(guān)輔料，按處方量制成樣品，分別加適量苯甲酸、山梨酸、羥苯乙酯，測(cè)定其含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品含量測(cè)定

對(duì)全國(guó)37個(gè)生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的146批次硝酸咪康唑乳膏進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果有11個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品檢出苯甲酸，占29.73%；有1個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品檢出山梨酸，占2.70%；有22個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品檢出羥苯乙酯，占59.46%；有3個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品均未檢出上述3種防腐劑，占8.11%。

3 討論

由樣品檢測(cè)結(jié)果可見，各生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品添加防腐劑的種類不盡相同，表明各生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)工藝有一定差異，故產(chǎn)品質(zhì)量也存在差異；甚至有些企業(yè)不同批次間樣品防腐劑檢測(cè)結(jié)果相差4倍以上，說明部分生產(chǎn)企業(yè)在添加防腐劑量上有一定隨意性。該方法的建立，對(duì)于控制企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量、建立較合適的防腐劑限度標(biāo)準(zhǔn)具有很好的指導(dǎo)意義。

為得到較理想的分離條件，曾使用0.15%乙酸銨-甲醇（90∶10）為流動(dòng)相，結(jié)果羥苯乙酯相對(duì)保留時(shí)間為2.54 min，通過不斷改變流動(dòng)相比例，羥苯乙酯相對(duì)保留時(shí)間變化不大；最后嘗試使用0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈為流動(dòng)相，通過不斷改善兩相配比，最終得到較理想的分離條件。

本研究中所建立的色譜條件可同時(shí)對(duì)硝酸咪康唑乳膏中所添加的防腐劑進(jìn)行定量檢測(cè)，方法檢測(cè)靈敏度高、分析時(shí)間短、分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為有效控制硝酸咪康唑乳膏產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)，對(duì)其他外用多劑量制劑中防腐劑的檢測(cè)也具有很好的借鑒意義。

［1］劉海玲，吳燕，曹曉云.高效液相色譜法測(cè)定硝酸咪康唑栓中兩種雜質(zhì)的含量［J］.天津藥學(xué)，2002，14（1）：65-66.

［2］王小亮，劉雪峰，席志芳，等.硝酸咪康唑原料及其制劑有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法的建立［J］.藥物分析雜志，2012，32（11）：2 025-2 030.

［3］張秉華，宋莉，杜珊，等.HPLC法測(cè)定硝酸咪康唑原料有關(guān)物質(zhì)的研究［J］.藥物分析雜志，2013，33（4）：638-641.

［4］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：952.

［5］傅強(qiáng).藥物分析實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008 54.：

Construction of a Method to Determine the Antiseptics in Miconazole Nitrate Cream

Liu Yan
（Shaanxi Yulin Institute for Drug Control，Yulin，Shaanxi，China 719000）

ObjectiveTo establish a method to determine the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.MethodsThe HPLC analysis was performed on Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column；the mobile phase consisted of 0.05 mol/L monopotassium phosphate and acetonitrile（72∶28）；the detective wavelength was 235 nm.ResultsThe limit of detection was 4.77，5.26 and 10.24 ng for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.It had good linear relationship at the range of 12.5～200 μg，5～80 μg，25～400 μg respectively and the correlation coefficient was 0.999 96，0.999 97 and 0.999 91（n=6）for benzoic，sorbic acid and ethylhydroxybenzoate respectively.ConclusionThe method is simple，good in repeatability，accurate for quantitation and can be used for determining the antiseptics in Miconazole Nitrate Cream.

Miconazole Nitrate；antiseptic；HPLC；content

R927.11；R978.5

A

1006-4931（2015）20-0085-02

2014-12-11）