高原臍貼軟膏對家兔皮膚急性毒性和刺激性的實驗研究*

江曉霽 方勇飛 馮曉楓 潘柏良 流 沙 陳筱珺 王 恒 劉曉飛

（1.解放軍第三二四醫院，重慶 400020；2.第三軍醫大學西南醫院，重慶 400038；3.重慶市中醫院，重慶 400021）

高原臍貼軟膏對家兔皮膚急性毒性和刺激性的實驗研究*

江曉霽1，2方勇飛2△馮曉楓1潘柏良3流 沙1陳筱珺1王 恒2劉曉飛2

（1.解放軍第三二四醫院，重慶 400020；2.第三軍醫大學西南醫院，重慶 400038；3.重慶市中醫院，重慶 400021）

目的 觀察高原臍貼軟膏對家兔皮膚是否有急性毒性及刺激性。方法 將16只家兔隨機分為4組，即完整皮膚實驗組、完整皮膚對照組、破損皮膚實驗組和破損皮膚對照組。在脫毛及破損皮膚造模24 h后，分別予試驗組和對照組家兔高原臍貼軟膏和空白基質軟膏。給藥24 h后，連續觀察14 d并稱量家兔體質量。家兔12只，隨機分為完整皮膚組和破損皮膚組。家兔背部兩側分別給予高原臍貼軟膏和空白基質軟膏，連續觀察72 h有無局部皮膚刺激反應。結果 試驗家兔無急性中毒表現，試驗組與對照組家兔體質量無明顯差異（P＞0.05）。家兔接觸高原臍貼軟膏后皮膚刺激分值為0，無皮膚刺激性。結論 高原臍貼軟膏經皮給藥對家兔無急性毒性，對家兔皮膚無刺激性，是一種安全性較好的外用制劑。

高原臍貼軟膏 皮膚急性毒性 皮膚刺激性

近年來，進入高原工作生活或旅游的人越來越多，而急性高原反應（AMS）是人們進入高原的重要障礙，其發病率可達50%至65%［1］。針對AMS，筆者在經方小柴胡湯的基礎上進行加減，研制出了高原臍貼軟膏，其藥物組成為柴胡、黨參、半夏、生姜、肉桂、胡椒、冰片、乳香、沒藥。筆者通過到高原實地進行隨機對照試驗，初步證實高原臍貼軟膏貼臍對AMS有明顯的預防效果［2］。現將前期高原臍貼軟膏對家兔皮膚急性毒性和刺激性的實驗研究結果進行報道，以說明其臨床實驗前安全性研究結果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康成年新西蘭兔，雌雄各半，體質量（2.0±0.5）kg，毛色純白。購自第三軍醫大學附屬大坪醫院野戰外科研究所實驗動物中心，分籠飼養于第三軍醫大學附屬西南醫院中心實驗室動物平臺，室溫20℃左右，相對濕度57%，飼養過程中自由進食和飲水。

1.2 藥物與試劑 高原臍貼軟膏每支20 g，生產批號120401；安慰劑軟膏為不含藥物成分的膏藥基質材料，每支20 g，生產批號120402，均由重慶市中醫院藥劑科生產。醫用消毒酒精，500mL/瓶，由第三軍醫大學藥劑科生產。

1.3 實驗儀器 體重計；科德士牌電推剪；醫用無菌刀片；醫用棉簽、軟尺等。

1.4 家兔皮膚急性毒性試驗 1）試驗方法。將16只家兔按體質量由低到高編號，然后用隨機數字表法將其分為4組，即完整皮膚實驗組、完整皮膚對照組、破損皮膚實驗組和破損皮膚對照組，每組4只。在給藥前24 h，用電推剪在所有實驗兔背部脫毛，脫毛面積約150 cm2，然后進行破損皮膚造模，將破損皮膚實驗組和破損皮膚對照組8只實驗兔背部脫毛區用75%酒精消毒，然后用無菌刀片在脫毛區劃“井”字，以滲血為度。脫毛造模24 h后，在完整皮膚實驗組和破損皮膚實驗組8只實驗兔背部脫毛區均勻涂抹高原臍貼軟膏5 g。在完整皮膚對照組和破損皮膚對照組8只實驗兔背部脫毛區均勻涂抹空白基質軟膏5 g。給藥24 h后，用溫水洗凈所有實驗兔背部脫毛區殘余藥物。洗脫藥物后即開始觀察，連續14 d，每日2次。2）觀察指標。依據藥物毒理研究方法［3］，擬定《實驗動物觀察指征表》進行觀察。表內項目包括實驗兔皮膚、毛發、飲食、二便、呼吸、眼和黏膜的變化、精神狀態、四肢活動及死亡情況。如遇死亡，及時進行尸檢和肉眼觀察，有肉眼可見病變時，進行病理組織學檢查。給藥后7 d、14 d稱量體質量。

1.5 家兔皮膚刺激性試驗 1）試驗方法。將12只新西蘭兔用隨機數字表法分為完整皮膚組和破損皮膚組，各6只。在給藥前24 h，用電推剪在所有實驗兔背部脊柱兩側脫毛，脫毛面積左右各3 cm×3 cm。將破損皮膚組6只實驗兔背部脫毛區用75%酒精消毒，然后用無菌刀片在脫毛區劃“井”字，以滲血為度。給藥采用左右側自身對照。脫毛及破損皮膚造模24 h后，兩組12只實驗兔均在背部左側脫毛區均勻涂抹高原臍貼軟膏1.5 g；在右側脫毛區均勻涂抹空白基質軟膏1.5 g。給藥24 h后，用溫水洗凈所有實驗兔背部脫毛區殘余藥物。洗脫藥物后1、24、48、72h，連續肉眼觀察實驗兔脫毛區皮膚有無紅斑及水腫。2）評價標準。依據藥物毒理學標準［3］，用《皮膚刺激反應評分標準》進行評分，并以公式“刺激平均分值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/動物總數”計算刺激平均分，按照《皮膚刺激強度評價標準》確定高原臍貼軟膏皮膚刺激性。

1.6 統計學處理 應用SPSS18.0統計軟件。實驗兔體質量以（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 家兔皮膚急性毒性實驗 見表1。4組實驗兔皮膚、毛發、飲食、二便、呼吸、眼和黏膜、精神狀態、四肢活動均正常，實驗期內無死亡。給藥后7、14 d稱量體質量，完整皮膚實驗組和完整皮膚對照組，破損皮膚實驗組和破損皮膚對照組比較，體質量無明顯差異（P＞0.05）。

表1 各組實驗兔給藥前后體質量比較（kg，±s）

表1 各組實驗兔給藥前后體質量比較（kg，±s）

組別 n 給藥后14 d給藥前 給藥后7 d完整皮膚實驗組 4 2.36±0.13完整皮膚對照組 4 2.36±0.22破損皮膚實驗組 4 2.46±0.12 1.92±0.15 2.15±0.17 1.92±0.09 2.22±0.19 1.90±0.15 2.21±0.14破損皮膚對照組 4 2.44±0.17 1.97±0.25 2.24±0.22

2.2 家兔皮膚刺激性實驗 完整皮膚組和破損皮膚組12只實驗兔在藥物去除1、24、48、72 h后均無皮膚紅斑、水腫（如圖1，圖2），皮膚刺激分值為0，皮膚刺激強度評價為無刺激性。見表2。

圖1 洗脫藥物1 h后實驗兔皮膚

圖2 洗脫藥物72 h后實驗兔皮膚

表2 各組實驗兔皮膚刺激性試驗結果比較（分）

3 討 論

人體進入高原后，高原缺氧可以引起消化分泌功能障礙和胃腸運動異常，并導致胃腸黏膜損傷，直接影響機體營養吸收和能量供給，使發生AMS的危險性增高［4］。同時，胃腸黏膜損傷也會影響口服藥物的吸收，影響療效。目前，經皮給藥系統由于可以避免胃腸道吸收困難、避免首過效應、延長單次給藥療效、減少給藥次數以及減少毒副作用等優點，已成為現代藥劑研究的熱點之一［5］。由此，筆者考慮改變給藥途徑，由口服給藥改為經皮給藥。研究發現［6］，藥物經臍部給藥的生物利用度是前臂給藥的1～6倍。這與中醫的臍療法不謀而合。研究證實［7］，中藥貼臍可以有效改善血氧分壓、呼吸頻率、心率等指標。

因此，筆者開發高原臍貼軟膏以中藥外敷的方式防治AMS。高原臍貼軟膏是重點針對AMS胃腸道癥狀研制的以小柴胡湯化裁而成的純中藥制劑。小柴胡湯能提高人體血漿胃動素水平，降低血管活性腸肽的表達，進而促進胃部平滑肌收縮，改善胃腸道功能［8］。現代藥理研究表明，柴胡可以解熱、鎮痛、鎮靜、抗炎、抗病毒和調節免疫［9］，黨參具有抗缺氧、耐疲勞、增強免疫力、調節胃收縮及保護胃黏膜的作用［10］。兩味主藥合用，既可以增強自身免疫力，又具有抗炎、抗病毒的功效，共同起到預防作用。

高原臍貼軟膏研制完成后，需要先觀察其外用的安全性。在新西蘭兔皮膚急性毒性實驗中，完整皮膚和破損皮膚的實驗兔一次性接觸高原臍貼軟膏后，均未在短期內出現急性毒性反應，且其體質量和接觸基質軟膏的實驗兔無差別，說明高原臍貼軟膏經皮膚給藥并無急性毒性反應。而在皮膚刺激性實驗中，無論完整皮膚還是破損皮膚組的實驗兔在接觸高原臍貼軟膏后均未出現皮膚紅斑或水腫。而兔的皮膚敏感性比人更強，還有可能產生皮膚假陽性反應［11］。因此，本實驗結果能夠較好說明高原臍貼軟膏并無皮膚刺激性。

［1］Hackett P，Roach RC.High-altitude illness［J］.N Engl J Med，2001，345：107-114.

［2］江曉霽，王志中，潘柏良，等.高原臍貼軟膏貼臍預防急性高原反應的效果觀察［J］.第三軍醫大學學報，2013，35（3）：251-254.

［3］袁伯俊，廖明陽，李波，等.藥物毒理學實驗方法與技術［M］.北京：化學工業出版社，2007：212-238.

［4］李素芝，鄭必海，閆春城，等.急進高原個體胃腸型高原反應發生情況及其原因［J］.職業與健康，2011，27（4）：427-429.

［5］Samad A，Ullah Z，Alam MI，et al.Transdermal drug delivery system：patent review［J］.Recent Pat Drug Deliv Formul，2009，3（2）：143-152.

［6］田明，周忠光，范越，等.貼臍療法藥劑學研究進展［J］.中醫藥信息，2008，25（4）：9.

［7］周洵，畢璠.貼臍療法防治機械通氣治療慢性阻塞性肺疾病急性發作期中胃腸脹氣的療效分析［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（3）：197-200.

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［11］李鵬，方劍喬，周亞峰.雷馬Ⅱ型貼膏皮膚給藥毒性實驗研究［J］.浙江中醫藥大學學報，2011，35（1）：72-78.

Study of Transdermal Drug Delivery of A ltiplano Navel Balm on Acute Toxicity and Irritation in Experimental Rabbits

JIANG Xiaoji1，2，FANG Yongfeng1，FENG Xiaofeng1，et al. 1 No.324 Hospital of PLA，Chongqing 400020，China；2 Southwest Hospital，Third Military Medical University，Chongqing 400038，China

Objective：To observe the acute toxicity and dermal irritation of transdermal drug delivery（TDD）of altiplano navel balm on experimental rabbit.Methods：1）Skin acute toxicity test：16 healthy New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups including the experimental group with integral skin，the control group with integral skin，the experimental group with damaged skin and control group with damaged skin.Altiplano navel balm and placebo balm were applied to the skin of rabbits respectively，and were removed after 24 hours.The observations were continued for 14 days.All rabbits were weighed at 7th day and 14th day.2）Skin irritation test：12 New Zealand rabbits were randomly divided into integral skin group and damaged skin group.Atiplano navel balm and placebo balm were applied to the right or left back skin of those rabbits respectively，and removed after 24 hours.Observations were continued for 72 hours to evaluate skin irritation.Results：None of experimental rabbits was dead and poisoned.There was no significant difference between the weight of experimental groups with those of control groups in 7th day and 14th day（P>0.05）.At 1，24，48，72 hours after removed drug，neither erythema nor edema occurred on the integral skin or damaged skin.Conclusion：Altiplano navel balm is safe.It is nontoxic to apply skin without excitant.

Altiplano navel balm；Acute dermal toxicity；Dermal irritation

R285.5

A

1004-745X（2015）05-0769-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.006

2015-02-26）

軍隊中醫藥科研專項重點課題（2010ZYZ134）

△通信作者（電子郵箱：fangyongfei@qq.com）