苦酸通調方對2型糖尿病大鼠胰島素敏感性及糖脂代謝的影響*

米 佳 樸春麗陳 曦高勝男閆 靜

（1.長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130021）

苦酸通調方對2型糖尿病大鼠胰島素敏感性及糖脂代謝的影響*

米 佳1△樸春麗1陳 曦1高勝男2閆 靜2

（1.長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130021）

目的 觀察苦酸通調方對2型胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性及糖脂代謝的影響。方法 將高脂飼料喂養的雄性SPF級ZDF大鼠30只，隨機分為模型組、苦酸通調組、吡格列酮組3組，普通飼料喂養的雄性SPF級ZL大鼠為正常對照組，每組各10只。苦酸通調方組按照3.29 g/（kg·d）灌胃，吡格列酮組按照1.07mg/（kg·d）灌胃，模型組和正常對照組灌胃等體積蒸餾水，每日給藥1次，連續給藥12周。檢測血糖（FBG）、糖化血紅蛋白（HbA1C）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血清胰島素（INS）等。結果 與空白組ZL大鼠比較，模型組ZDF大鼠糖尿病狀態明顯，血清FBG、INS、HbA1C、TC、TG、LDL-C、HDL-C水平升高（P＜0.05）。與模型組比較，苦酸通調組血清FBG、INS、HbA1C、TG、TC、LDL-C水平明顯降低（P＜0.05），但INS接近吡格列酮組（P>0.05）。結論 苦酸通調方可以有效改善ZDF大鼠糖脂代謝及胰島素抵抗，其改善2型糖尿病胰島素抵抗可能是其防治糖尿病的機制之一。

苦酸通調方 ZDF大鼠 胰島素抵抗 糖脂代謝

糖尿病是一種由多種原因引起的糖、脂肪、蛋白質代謝紊亂綜合征［1］。近年來，糖尿病已經成為世界范圍內日益嚴重的公共健康問題，中國成人糖尿病總數已超過9200萬，并且糖尿病前期患者約有1.48億［2］。預測到2025年患病率將達到5.4%［3］。胰島素抵抗及胰島功能受損是2型糖尿病發病的兩個基本環節［4］。而糖尿病所引起的心、腦等組織的大血管病變是糖尿病患者致死、致殘的主要原因［5］。因此，深入研究能夠改善胰島素抵抗及胰島功能受損的藥物，對于防治糖尿病及心腦血管等并發癥具有重要意義。苦酸通調方由黃連、烏梅、大黃、干姜組成，為《溫病條辨》連梅湯加大黃、干姜而成。多年來應用苦酸通調方加減治療肥胖2型糖尿病，療效顯著［6］，臨床研究證實具有抑制血清C反應蛋白和單核細胞趨化蛋白-1等炎癥標志物的作用［7］。此次動物實驗旨在結合中醫古今文獻，在已有的前期研究基礎上，進一步深入探討該方對ZDF大鼠2型糖尿病的影響，探討本方治療2型糖尿病的作用機制，為糖尿病的中醫治療提供新的思路和方法。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 苦酸通調方由黃連、烏梅、大黃、干姜組成，由長春中醫藥大學附屬醫院顆粒藥房提供。吡格列酮由江蘇恒瑞醫藥股份有限公司生產 （批號國藥準字H20040631）。雄性SPF級ZDF大鼠、雄性SPF級ZL大鼠，購自北京維通利華動物有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001。血清胰島素放免試劑盒購自北京翔集科技發展有限公司。實驗所需全自動生化分析儀由長春中醫藥大學附屬醫院檢驗科提供。

1.2 模型制備 雄性ZL大鼠10只，8～9周齡，體質量253～296 g，予以普通飼料喂養，自由攝食、飲水；雄性ZDF大鼠30只，8～9周齡，體質量359～439 g，予以高脂高糖飼料喂養。12周后，取大鼠尾靜脈血微量，用強生血糖儀檢測血糖，血糖達到16.7mmol/L以上者，造模成功。將造模成功的ZDF大鼠隨機分為模型組、苦酸通調組、吡格列酮組3組，ZL大鼠為正常對照組，每組10只。

1.3 給藥方法 將苦酸通調方和吡格列酮分別配置成混懸液，造模成功后，苦酸通調方使用時按照3.29 g/kg體質量（前期工作已確定的最佳劑量）混懸液灌胃，吡格列酮組按照1.07mg/kg體質量灌胃，正常對照組和模型組均予等體積蒸餾水灌胃，各組大鼠分別連續灌胃12周。用藥治療期間，正常對照組大鼠飼以普通飼料，其他組飼以高糖高脂飼料，自由進食、飲水，每周稱體質量，根據體質量調整灌胃劑量。

1.4 標本采集及檢測 在給藥的第12周末，禁食12 h，水合氯醛麻醉后，腹主動脈采血，靜置2 h，3000 r/min，4℃離心10min，分離血清。使用全自動生化分析儀測定血糖 （FBG）、糖化血紅蛋白 （HbA1C）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量，放射免疫法測定血清胰島素（INS）水平。

1.5 統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件。計量資料均以（±s）表示，前后比較則用配對t檢驗，多組間差異的顯著性檢驗采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠一般狀態的比較 在喂養期間，ZL組大鼠均較活躍，對抓取抵抗明顯，正常進食飲水，毛色亮澤。ZDF大鼠較ZF大鼠肥胖，體質量增長迅速，活動遲緩、反應有鈍，毛色干枯而無光澤。

2.2 各組大鼠FBG、HbA1C及INS水平比較 見表1。給藥12周后，與正常對照組相比，模型組FBG、HbA1C、INS均明顯升高（均P＜0.05）。與模型組相比，吡格列酮組INS明顯降低 （P＜0.05），FBG、HbA1C雖有降低，但無統計學意義（P＞0.05）；苦酸通調組FBG、HbA1C、INS均顯著降低，優于模型組（均P＜0.05），但INS水平與吡格列酮組相當（P＞0.05）。

表1 各組大鼠FBG、HbAlC、INS比較（±s）

表1 各組大鼠FBG、HbAlC、INS比較（±s）

與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。下同。

組 別 n FBG（mmol/L）INS（mU/L）HbA1C（%）正常對照組 10 12.10±3.74 24.13±4.666.77±0.55模型組 10 26.43±4.12* 39.64±11.08*12.07±1.86*吡格列酮組 10 23.82±1.82* 32.13±1.88*△11.88±1.95*苦酸通調組 10 17.82±2.42*△ 31.75±1.18*△9.39±0.76*△

2.3 各組大鼠血脂水平比較 見表2。給藥12周后，與正常組對照相比，模型組血清TG、TC、LDL-C、HDLC水平均明顯升高（P＜0.01）。與模型組相比，吡格列酮組TG、TC明顯降低（P＜0.01），LDL-C、HDL-C雖有降低，但差異無統計學意義 （P＞0.05）。苦酸通調組TG、TC、HDL-C、LDL-C水平與模型組相比均下降，差異均有統計學意義（P＜0.05）。

表2 各組大鼠血脂水平比較（mmol/L，±s）

表2 各組大鼠血脂水平比較（mmol/L，±s）

組別 n TC TG LDL-C HDL-C正常對照組 101.70±0.41 0.74±0.13 0.63±0.16 1.12±0.39模型組 103.72±0.41* 4.22±1.48* 1.58±0.29* 2.02±0.33*吡格列酮組 103.31±0.46*△3.30±1.15*△1.48±0.14* 1.86±0.24*苦酸通調組 102.25±0.33*△2.43±0.31*△0.99±0.12*△ 1.21±0.20△

3 討 論

3.1 動物模型特點 在糖尿病中，2型糖尿病是發病的主體，約占90%［8］。不同品種大鼠都有著其各自不同的特點，部分研究發現普通大鼠長期高脂飼料喂養后，可具有胰島素抵抗的特征，但血糖升高不明顯［9］。本實驗選用自發形成的2型糖尿病模型——ZDF（Zucker Diabetic Fatty rat）大鼠模型。ZDF大鼠是自發性的糖尿病模型，是由高血糖的Zucker（fa/fa）大鼠近交繁殖得到的亞系，與Zucker（fa/fa）大鼠相比，ZDF（fa/fa）大鼠肥胖較輕但胰島素抵抗更嚴重，但該大鼠須經特殊飼料誘導后才出現高脂血癥和高血糖癥。在這種模型大鼠中，被正式確認的生理異常有：肥胖、胰島素抵抗、高血糖、高胰島素血癥、高脂血癥等［10-11］。而ZL大鼠被用來作為ZDF大鼠的正常對照組模型動物。

3.2 苦酸通調方對ZDF大鼠糖脂代謝的影響 中醫學認為消渴病以陰虛為本，燥熱為標，尚未囊括肥胖2型糖尿病早期無明顯“三多一少”癥狀的情況，導致中醫辨證似是“無癥可辨”，追其緣由，中醫對2型糖尿病早期的認識存在巨大的盲區。本課題組經10余年的臨床和動物實驗驗證，肥胖2型糖尿病的核心病機是六郁和絡滯并存。六郁是指以食郁為先導而形成的氣郁、血郁、熱郁、痰郁、濕郁的病理狀態；絡滯是由六郁交互作用而形成絡脈郁滯的病理狀態［12］。本課題組在大量的前期試驗中，認為各種炎癥因子即為毒，并先后證實了“毒損肝絡”與肝內炎癥的相關性，以及“毒損腎絡”與糖尿病腎病炎癥機制的相關性。由此可見，由于過食肥甘，所引發的肥胖2型糖尿病，根據其“六郁和絡滯”的病機關鍵所產生的病理產物，與現代醫學2型糖尿病的炎癥學說的發病機制是有一定相關性的。

苦酸通調法是對 “苦酸制甜”、“辛開苦降”、“活血通絡”、“解毒通絡”單一治法的高度概括，主要針對肥胖2型糖尿病的核心病機“六郁和絡滯”。苦味中藥在臟屬心，心者生之本，主血脈，與絡病相關，具有瀉火解毒、燥濕堅陰之功。酸味中藥在臟屬肝，且酸能克甘，具有化陰生津之功，還可調節肝的氣機，其用于治療糖尿病一則可以固護氣陰，一則可與苦辛搭配調節氣機的升降。苦酸相伍可達到養陰清熱，燥濕解毒，瀉壅之效，切中消渴病機，此為“苦酸通調”的理論依據。本方為《溫病條辨》連梅湯加大黃、干姜而成，君用黃連，其性味大苦大寒，《本草備要》曰其功能“入心瀉火……燥濕開郁，解渴除煩。益肝膽，厚腸胃，消心瘀，酒毒胎毒……解毒”。其是針對消渴早期六郁化火病機而設，故為君藥。臣用烏梅，大黃。烏梅其性味酸溫，主要有收斂生津的作用，《本草拾遺》曰 “去痰……止渴調中”，《本經》謂之能“除熱煩滿，死肌……惡肉”。其是針對消渴六郁化火傷陰而設。大黃其性味苦寒，主要有瀉熱毒，破積滯，行瘀血的作用，《日華子本草》謂其“通宣一切氣，調血脈，利關節，瀉壅滯”。《別錄》謂其“平胃，下氣，祛痰實，腸間結熱，心腹脹滿……諸老血留結”。本方是針對消渴六郁化火而設。蓋以黃連瀉壯火，使不爍津；以烏梅之酸以生津，合黃連酸苦為陰，苦酸相伍以制甜。佐使干姜，以其性味辛苦大熱，《本草備要》言其功能“生用辛溫，逐寒邪而發表，炮則辛苦大熱，除胃冷而守中。溫經止血，定嘔消痰，去臟腑沉寒痼冷。能去惡生新，使陽生陰長……有陰無陽者宜之……燥脾濕而補脾，通心助陽而補心氣。開五臟六腑，通四肢關節，宣諸絡脈”，以辛性溫之干姜為辛通入絡，合黃連辛開苦降，斡旋中焦氣機，調暢氣機，使清升濁降，陰陽樞機調暢，郁滯得除，臟腑氣化功能正常，庶消渴可止也。且干姜之溫可反佐黃連、大黃苦寒之偏弊，故為佐使。本方是針對消渴“六郁和絡滯”的病機理論，以苦酸通調為治療法則建立的經驗方，體現了針對早期消渴郁、熱為主，虛、損兼而有之特點，諸藥合用，酸苦同用，辛苦并施，寒溫相佐，達到了苦酸制甜，辛開苦降，通達絡脈，治療早期消渴“糖絡并治”的目的。

近年來研究表明，糖尿病患者不僅血糖高于正常人水平，血漿TC、TG、LDL-C等血脂水平亦明顯高于正常人，而糖脂代謝的障礙是導致糖尿病及其心腦血管等并發癥的危險因素，并且2型糖尿病患者胰島β細胞功能的逐漸衰退也與此有關。本研究顯示，與正常組相比，模型組大鼠FBG、INS、HbA1C、TG、TC、HDLC、LDL-C水平明顯升高，提示模型組大鼠存在明顯的高糖、高脂及嚴重的胰島素抵抗。經苦酸通調方治療后，可降低糖尿病大鼠TG、TC、LDL水平，說明其具有調節脂代謝作用；并且可顯著降低2型胰島素抵抗大鼠FBG、INS、HbA1C、INS水平，與其能夠增加胰島素敏感性、調節脂代謝相關。

總之，苦酸通調方可以有效改善ZDF大鼠糖脂代謝及胰島素抵抗，其改善2型糖尿病胰島素抵抗可能是其防治糖尿病的機制之一。

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Effect of Kusuan Tongtiao Decoction on Insulin Sensitibity and Glucolipid Metabolism in Type 2 Diabetes Rats

MI Jia，PIAO Chunli，CHEN Xi，et al. 1 The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine，Jilin，Changchun 130021，China；2 Changchun University of Chinese Medicine，Jilin，Changchun 130021，China

Objective：To investigate the effect of Kusuan Tongtiao Decoction on insulin sensitibity and glucolipid metabolism in type 2 diabetes rats.Methods：30male Zucker rats（Zucker Diabetic Fatty rats）were induced by feeding of high-fat and high-carbohydrate diet were randomly divided into the model group（MD），the Pioglitazone group（PG）and the Kusuan Tongtiao Decoction group（KG）.A normal control group（NG）was also set up by male Zucker Lean（ZL）rats which were feeding of normal diet.There were 10 rats in each group.The Kusuan Tongtiao Decoction group and the Pioglitazone group were given Kusuan Tongtiao Decoction 3.29g/（kg·d）and Pioglitazone suspension 1.07 mg/（kg·d）gavage respectively，while the normal group and model group were given the same amount of normal saline.After 12 weeks，all rats were weighed and fasting blood glucose（FBG），fasting serum insulin（INS），glycosylated hemoglobin（HbA1c），total cholesterol（TC），triglyceride（TG），low-density lipotrotein cholesterol（LDL-C）and high-density lipotrotein cholesterol（HDL-C）levels were compared between each group.Results：Compared with NG，there were obvious symptoms of diabetes in MG，levels of FBG，INS，HbA1C，TC，TG，LDL-C，HDL-Cwere significantly increased（P＜0.05）.Compared with MG，levels of FBG，INS，HbA1C，TG，TC，LDL-C were significantl decreased（P＜0.05），but INS closed to PG.Conclusion：Kusuan Tongtiao Decoction can improve glucose and lipid metabolism and pancreatic islet function in type 2 diabetic rats.It can relieve insulin resistance that may be the possible mechanism of Kusuan Tongtiao Decoction preventing and controlling type 2 diabetes.

Kusuan Tongtiao Decoction；Zucker Diabetic Fatty rats；Insulin resistance；Glucolipid metabolism

R285.5

A

1004-745X（2015）05-0797-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.015

2015-02-20）

吉林省自然科學基金項目（201115169）

△通信作者（電子郵箱：mijia8201@126.com）