Galectin-3和β-catenin在子宮內膜異位癥中的表達及二者的相關性

石亞楠，黃河玲，郭瑞峰，劉藝

臨床研究

Galectin-3和β-catenin在子宮內膜異位癥中的表達及二者的相關性

石亞楠1，黃河玲2△，郭瑞峰2，劉藝2

目的探討半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和β連環素（β-catenin）在子宮內膜異位癥（EMs）患者的異位內膜和在位內膜中的表達及其在EMs發病中的作用及關系。方法應用免疫組織化學法檢測34例EMs患者（EMs組）的異位內膜和在位內膜及30例非子宮內膜異位癥（正常對照組）的在位子宮內膜中的半乳糖凝集素-3和β連環素的表達情況，并分析二者的相關性。結果半乳糖凝集素-3在EMs組異位內膜、在位內膜及正常對照組在位內膜的陽性表達率分別為88.2%、85.3%、50.0%；β連環素在上述3組的異常表達率分別為55.9%、52.9%、26.7%。EMs異位內膜組、在位內膜組的半乳糖凝集素-3的陽性表達率和β連環素的異常表達率均高于正常對照組（P＜0.05）。EMs組異位內膜、在位內膜中的半乳糖凝集素-3的陽性表達和β連環素的異常表達呈正相關（rs分別為0.512、0.428，P＜0.01）。結論半乳糖凝集素-3和β連環素可能在EMs的發病中共同起著重要作用。

半乳糖凝集素3；β連環素；子宮內膜異位癥；免疫組織化學

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMs）是育齡期婦女的多發病、常見病，近年來其發病率呈現上升趨勢，但其發生發展機制尚無定論。半乳糖凝集素-3（Galectin-3）是半乳糖凝集素家族中唯一的嵌合型成員，具有參與細胞的增殖、分化、凋亡，介導細胞黏附及免疫調節等多種生物學作用，近年來研究表明其與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關［1］。Wnt/β連環素（β-catenin）信號通路是調控細胞生長、發育和分化的關鍵途徑，β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路的關鍵成員，其異常改變在腫瘤的發生、轉移和浸潤過程中起重要作用［2］。近年來研究發現Galec?tin-3是β-catenin的一種新的結合蛋白配偶體，目前關于其二者在腫瘤中的表達的文獻較多，但二者在具有類似腫瘤生物學行為的EMs中的表達及其關系尚鮮見報道。本研究應用免疫組織化學方法檢測Galectin-3與β-catenin在EMs患者在位及異位內膜組織中的表達情況，并探討其二者在EMs發生、侵襲、轉移中的作用及二者之間的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象（1）選取2013年1月—2014年3月在解放軍二五二醫院因卵巢囊腫行開腹及腹腔鏡手術，術后病理證實為EMs的患者34例作為研究組。年齡22～47歲，平均（34.21±5.79）歲。取其異位內膜及在位內膜，在位內膜為診斷刮宮或同時切除子宮所得的內膜。（2）選擇同期因不孕癥（輸卵管因素）、卵巢良性病變、宮頸病變（CINⅡ～Ⅲ）等行腹腔鏡或開腹手術治療并排除EMs的正常子宮內膜標本30例作為對照組。年齡26～43歲，平均（36.77±4.97）歲。所有患者均月經周期規則，無長期用藥史，術前3個月未經任何內分泌藥物治療，無惡性腫瘤史。所有診斷均經術后病理證實。

1.2 主要試劑鼠抗人Galectin-3單克隆抗體及鼠抗人βcatenin單克隆抗體均購自福州邁新生物技術有限公司，SP試劑盒及DAB試劑盒均購自北京西雅金橋生物技術有限公司。

1.3 方法將蠟塊標本連續4 μm切片，分別進行HE染色及免疫組化染色，采用免疫組織化學SP法進行Galectin-3和β-catenin檢測，實驗操作嚴格按照說明書進行，以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性片作為陽性對照。

1.4 結果判斷Galectin-3主要定位于細胞質，但在胞核也有少量表達，結果判定采用半定量積分法［3］，高倍鏡下在每一切片角及中央取5個高倍視野，各計算100個細胞中陽性細胞所占百分比，取平均值。根據陽性細胞數和染色強度共同判定。首先根據陽性細胞所占百分比定為0～3分：沒有為0分，＜10%為1分，10%～50%為2分，＞50%為3分。再根據染色深淺定為0～3分：0分為無著色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。兩項評分相加判定結果分為4級：0～1分為（-），2分為（+），3～4分為（++），5～6分為（+++）。

β-catenin結果判斷參照Maruyama等［4］的方法，分別從細胞膜、細胞質和細胞核判斷β-catenin在細胞內的表達特征：細胞膜β-catenin表達陽性的細胞數＞70%判定為正常表達，反之為表達缺失；細胞質或細胞核β-catenin表達陽性的細胞數＞10%（包括同時細胞膜表達＞70%者）判定為異位表達。膜表達缺失或異位表達均稱為表達異常。

1.5 統計學方法實驗數據用SPSS 17.0統計軟件分析，正態分布計量資料采用均數±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗。計數資料采用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman等級相關。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Galectin-3及β-catenin的表達Galectin-3在EMs異位內膜、在位內膜組的腺體上皮中陽性表達較強，表達以強陽性和中度陽性為主，在正常對照組中表達以弱陽性和陰性為主。Galectin-3在EMs異位內膜組和在位內膜組的陽性表達均較正常對照組高（P＜0.05），而異位內膜組與在位內膜組陽性表達率差異無統計學意義（P＞0.05）。β-catenin在EMs異位內膜組和在位內膜組的內膜腺體上皮中異常表達較強，在對照組中較弱。β-catenin在EMs異位內膜組和在位內膜組的異常表達較正常對照組高（P＜0.05），而異位內膜組與在位內膜組間異常表達率差異無統計學意義（P＞0.05）。見圖1、表1。

Tab.1Comparison of the expressions of Galectin-3 and β-catenin in ectopic endometrium，eutopic endometrium and normal endometrium groups表1 Galectin-3及β-catenin在EMs組異位、在位內膜及正常對照組內膜中的表達情況例（%）

2.2 Galectin-3與β-catenin的相關性結果表明在EMs異位內膜組和在位內膜組中Galectin-3的陽性表達與β-catenin的異常表達均呈正相關（rs分別為0.512、0.428，P＜0.01），見表2。

Tab.2The correlation of Galectin-3 and β-catenin expressions in ectopic endometrium and eutopic endometrium of EM patients表2 EMs異位內膜、在位內膜中Galectin-3與β-catenin的相關性例

3 討論

3.1 Galectin-3在EMs發病中的作用Galectin-3是一種分子質量為29～35 ku的β-半乳糖苷結合蛋白，可與細胞內糖蛋白、細胞表面分子和細胞外基質相互作用，與腫瘤細胞的黏附轉移、血管生成、免疫耐受、抗凋亡等有關［3］。近年來，關于其在甲狀腺癌［5］、結腸癌［6］等惡性腫瘤中的表達多有報道，但其在類似于惡性腫瘤生物學行為的EMs中的表達的文獻甚少。有研究報道其可能在EMs的發展中有潛在作用［7］。有文獻報道Galectin-3與EMs不孕的相關性，發現Galectin-3在EMs患者在位內膜的表達明顯降低，降低了子宮內膜的容受性，不利于胚胎的著床［8］；但No?l等［7］認為EMs在位內膜中Galectin-3的表達明顯高于正常婦女的子宮內膜，結論存在爭議。本研究顯示，Galectin-3在EMs異位內膜及在位內膜的表達均高于正常對照組，與No?l等的結果相符，提示其在EMs的發病中起著重要作用。

3.2 β-catenin對EMs的細胞黏附及侵襲增殖的影響Wnt/β-catenin信號通路是胚胎發育分化中重要的信號通路，與腫瘤的發生、浸潤和轉移密切相關［9］。β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路的關鍵成員，通路中任一信號分子發生改變均可引起細胞內游離β-catenin的積累，并進入胞核與淋巴增強因子/T細胞因子（lymphoid enhancer factor/T cell factor，LEF/TCF）轉錄復合物結合，激活相應下游靶基因進行非正常轉錄，從而使細胞的增殖、分化失控，導致腫瘤發生。周琦等［10］研究表明Wnt/β-catenin信號通路可能參與了EMs的發生。許金榜等［11］研究也表明β-catenin的高表達可能在EMs的發病過程中起重要作用。本研究顯示異位內膜及在位內膜βcatenin的異常表達率增高，細胞膜表達減少或缺失，這很可能導致同型細胞間黏附功能下降，從而導致內膜細胞脫離原位，并發生異位種植；而胞漿及胞核表達增強導致Wnt/β-catenin信號通路的激活，下游相應靶基因（cyclin D1和c-myc）非正常轉錄，從而參與了EMs的侵襲和增殖。因此β-catenin可能在EMs的細胞黏附及侵襲增殖中發揮了重要作用。

3.3 EMs中Galectin-3的陽性表達與β-catenin異常表達的關系近年來研究發現Galectin-3是Wnt/ β-catenin信號途徑的關鍵調節因子，其與βcatenin、TCF-4組成三元復合物，共同啟動下游靶基因（如Cyclin D1，C-myc）的轉錄，從而促進細胞增殖［12］。Wang等［13］研究表明Galectin-3通過Wnt/βcatenin信號通路激活在舌癌進展中起著重要作用。楊春蓉等［14］研究顯示Galectin-3可能與Wnt/βcatenin信號通路密切相關。雖然在多種惡性腫瘤的發生中二者的密切關系已被證實，但在類似于腫瘤生物學行為的EMs中二者的關系尚鮮見報道，本研究表明Galectin-3的陽性表達與β-catenin的異常表達呈正相關，提示在EMs中，Galectin-3確有可能參與了Wnt/β-catenin信號通路，二者共同促進EMs的發生發展，Galectin-3可能通過與β-catenin特異性結合，促進下游信號的轉錄，從而促進了內膜細胞侵襲增殖。

綜上所述，Galectin-3與β-catenin可能共同在EMs的發生發展中發揮著重要作用，高Galectin-3陽性表達、高β-catenin異常表達的在位內膜可能是發生EMs的高危人群，診刮篩選出此類內膜有望成為診斷預測EMs的新方法。對高危人群實行在位內膜干預可能將為EMs的治療開辟新途徑，其能否作為分子靶向治療靶點尚有待進一步研究。

（圖1見插頁）

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（2014-12-15收稿2015-03-09修回）

（本文編輯李鵬）

The expressions of Galectin-3 and β-catenin and their correlation studies in endometriosis

SHI Ya'nan1，HUANG Heling2△，GUO Ruifeng2，LIU Yi2
1 HeBei North University，Zhangjiakou 075000，China；2 The People′s Liberation Army 252 Hospital△

ObjectiveTo investigate the expressions and mutual relationship of Galectin-3 and β-catenin in endome?triosis（EM）.MethodsImmunohistochemistry was used to detect expression levels of Galectin-3 and β-catenin and their mutual relationship in expression was also examined.Samples were collected from ectopic endometrium of patients with en?dometriosis（ectopic endometrium group，n=34），eutopic endometrium of patients with endometriosis（eutopic endometrium group，n=34）and normal endometrium from people without endometriosis（control group，n=30）.ResultsThe expressions of Galectin-3 were seen in 88.2%，85.3%，50.0%of cases in ectopic endometrium group，eutopic endometrium group and control group respectively.On the other hand，the expression of β-catenin were seen in 55.9%，52.9%，26.7%of cases in ecto?pic endometrium group，eutopic endometrium group and control group respectively.In EMs patients，the expression of Galec?tin-3 and β-catenin were significantly higher in ectopic endometrium and eutopic endometrium than those in normal endome?trium group（P＜0.05）.Expression of Galectin-3 was positive correlated with expression of β-catenin（rs=0.512，0.428，P＜0.01）.ConclusionGalectin-3 and β-catenin may play important roles synergistically in the pathogenesis of endometriosis.

Galectin 3；beta catenin；endometriosis；immunohistochemistry

R711.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.012

1河北北方學院（郵編075000）；2解放軍第二五二醫院

石亞楠（1988），女，碩士在讀，主要從事婦科腫瘤方向的研究

△通訊作者E-mail：hhl252@aliyun.com