廣東省虎門地區兒童肺炎鏈球菌血清型分布及耐藥性監測

李 明， 譚丁丁， 張曲濤， 周 湧， 李 薇， 郭文婷， 郭錦均

·論著·

廣東省虎門地區兒童肺炎鏈球菌血清型分布及耐藥性監測

李 明， 譚丁丁*， 張曲濤， 周 湧， 李 薇*， 郭文婷， 郭錦均*

目的 了解東莞虎門地區兒童肺炎鏈球菌的血清型分布和對抗菌藥物的耐藥性，評估幾種疫苗，尤其是7價結合疫苗（PC V7）在本地區對肺炎鏈球菌的覆蓋情況，并為臨床合理使用抗菌藥物提供依據。方法 對2011年1月—2012年12月就診肺炎患兒呼吸道標本中分離的肺炎鏈球菌，采用莢膜腫脹試驗進行血清分型，并采用法國生物梅里埃公司的A T B ST R E P 5肺炎鏈球菌板條進行藥物敏感性試驗。采用C LSI 2010年版標準判斷結果，數據分析采用 W H O N E T 5.5軟件。結果 共分離到229株肺炎鏈球菌，主要血清型為19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）和14型8株（3.5%）。7價疫苗（PC V7）的覆蓋率為95.2%，11價疫苗（PC V11）的覆蓋率為95.2%，13價疫苗（PC V13）的覆蓋率為97.4%。所分離的肺炎鏈球菌中青霉素敏感的肺炎鏈球菌（PSSP）占92.6%（212/229），青霉素中介的肺炎鏈球菌（PISP）占5.7%（13/229），青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PRSP）占1.7%（4/229）。肺炎鏈球菌對紅霉素、克林霉素、四環素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、氯霉素、頭孢噻肟、阿莫西林的耐藥率依次為95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株對萬古霉素和左氧氟沙星完全敏感。結論該地區兒童肺炎鏈球菌的血清型主要為19F、23F、6B和14型，PC V7的覆蓋率為95.2%，提示可用于本地區的預防接種。肺炎鏈球菌對紅霉素、克林霉素、四環素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑耐藥嚴重，對萬古霉素、左氧氟沙星、青霉素的敏感率較高。

肺炎鏈球菌； 血清型； 兒童； 耐藥性

肺炎鏈球菌是兒童社區獲得性感染的重要病原菌，可引起肺炎、腦膜炎、菌血癥、中耳炎等疾病。近20年來，該菌對多種抗菌藥物的耐藥性日益嚴重。現已發現肺炎鏈球菌有90個血清型，感染后免疫具有型特異性。根據本地區流行病學調查結果，選擇和應用相應疫苗不但可以預防肺炎鏈球菌感染，而且可防止耐藥菌株傳播。本研究分析了本院2011年1月—2012年12月臨床5歲以下兒童患者所分離的229株肺炎鏈球菌的血清型分布及其對抗菌藥物的耐藥狀況，為臨床經驗用藥、疫苗研制和免疫預防提供實驗室依據，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 2011年1月—2012年12月我院兒科門診及住院5歲以下肺炎患兒痰標本分離的肺炎鏈球 菌229株，經 法國生 物 梅里埃VIT E K-2 Compact全自動細菌鑒定儀或常規方法鑒定到種。

1.1.2 抗菌藥物及培養基 O ptochin（奧普托欣）、苯唑西林紙片為O X OID公司產品，藥敏試驗平皿采用O X OID公司生產的 M H 瓊脂加5%脫纖維羊血。生理鹽水、A T B S T R E P 5藥敏板條和E試驗條為法國生物梅里埃公司產品。

1.1.3 多價血清 多價血清購自丹麥血清研究所（Statens Seru m Institut，Den mark）。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗 肺炎鏈球菌的藥敏試驗采用法國生物梅里埃公司生產的A T B S T R E P 5藥敏板條，包括青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟、紅霉素、克林霉素、四環素、氯霉素、左氧氟沙星、萬古霉素和甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑，嚴格按試劑盒說明書進行操作和判讀。并采用 E試驗條確證青霉素的最低抑菌濃度（M IC），以便正確區分青霉素敏感、中介和耐藥肺炎鏈 球 菌 （PSSP、PISP 和P R SP）。結 果 判斷 以C LSI 2010版為 標 準［1］。質 控菌株為肺 炎 鏈 球 菌A T C C49619。

1.2.2 血清分型 采用莢膜腫脹試驗進行血清分型，分型血清可判斷23價多糖疫苗（P C V23）所覆蓋的血清型（1、2、3、4、5、6B、7F、8、9 N、9 V、10 A、11 A、12F、14、15B、17F、18C、19 A、19F、20、22F、23F和33F）和6 A，此外的血清型歸為不能分型類。根據血清分型結果，計算多價疫苗，7價疫苗（P C V7，可覆蓋4、6B、9 V、14、18C、19F和23F）、11價疫苗（P C V11，可覆蓋1、3、4、5、6B、7F、9 V、14、18C、19F和23F，即在PC V7基礎上增加1、3、5、7F）和13價疫苗（P C V13，可覆蓋1、3、4、5、6 A、6B、7F、9 V、14、18C、19 A、19F 和23F，即在 P C V11 基礎上增加6 A、19 A）的覆蓋率。

1.2.3 統計分析 采用 W H O N E T5.5軟件進行分析。

2 結果

2.1 肺炎鏈球菌血清群/型分布

229株肺炎鏈球菌中，血清型依次為19F 146株（63.8%）、23F 49株（21.4%）、6B 12株（5.2%）、14型8株（3.5%）、19 A 4株（1.7%）、4型3株（1.3%）、15B 2株（0.9%）和6 A 1株（0.4%），4株菌株（1.7%）在本次研究中不能明確分型。229株肺炎鏈球菌中，P C V7所包含的9 V、18C，P C V11所包含的1、3、5、7F在本次研究中未分離到。PC V7和P C V11的覆蓋率均為95.2%，P C V13的覆蓋率為97.4%。兩者相比較差異無統計學意義（P＞0.05）。血清型的分布情況見表1。

表1 肺炎鏈球菌的血清型分布Table 1 Distribution of serotypes ofS.pneu moniae

2.2 肺炎鏈球菌對常用抗菌藥物的敏感性

所分離的肺炎鏈球菌中PSSP占92.6%（212/ 229），PISP占5.7%（13/229），P R SP占1.7%（4/ 229）。其中PC V7所覆蓋的肺炎鏈球菌對青霉素的敏感率93.6%（204/218），P C V13所覆蓋的肺炎鏈球菌對青霉素的敏感率92.8%（207/223），兩者相比較差異無統計學意義（P＞0.05）。所分離的肺炎鏈球菌對紅霉素、克林霉素、四環素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑、氯霉素、頭孢噻肟、阿莫西林的耐藥率依次為95.6%、93.0%、88.2%、86.5%、7.0%、2.2%、0.9%，所有菌株對萬古霉素和左氧氟沙星完全敏感。藥敏試驗結果見表2。

2.3 不同血清型對抗菌藥物的耐藥性

本次所分離的肺炎鏈球菌主要血清型為19F、23F和6B型，其中對青霉素耐藥的4株肺炎鏈球菌均集中在19F。各主要血清型對本次試驗相應抗菌藥物的耐藥性差異均無統計學意義（P＞0.05）。試驗結果見表3。

表2 229株肺炎鏈球菌對抗菌藥物的敏感率和耐藥率Table 2 Susceptibility of 229 strains ofStreptococcus pneu moniaeto antimicrobial agents（%）

表3 主要血清型肺炎鏈球菌對抗菌藥物的耐藥率Table 3 Resistance ofStreptococcus pneu moniaestrains to antimicrobial agents by serotype［n （%）］

3 討論

肺炎鏈球菌是兒童社區獲得性肺炎的主要病原菌。據估計，發展中國家每年約有814 000例5歲以下的兒童死于肺炎鏈球菌感染［2］。為保障人類健康，W H O主張采用接種肺炎鏈球菌疫苗來預防肺炎鏈球菌感染，而選擇疫苗應以本地區人群中肺炎鏈球菌血清型分布為依據方能達到最佳效果。

流行病學調查顯示，P C V7在美國、歐洲、非洲和亞洲部分國家的覆蓋率分別可達86%、74%、67%和 43%［3］。 國內 H o 等［4］研 究顯 示香港地區P C V7的覆蓋率為66.5%；姚開虎等［5］的研究顯示北京、上海、廣州、深圳兒童人群中P C V7的覆蓋率分別為46.0%、80.0%、98.4%、94.4%。本研究中，PC V7在本地區兒童人群中的覆蓋率為95.2%，與廣州（98.4%）、深圳（94.4%）接近，但與北京（46.0%）、上海（80.0%）、香港（66.5%）存在較大差異。張泓等［6］在2007年10 月—2008年5月對上海某兒童醫院分離的肺炎鏈球菌的研究顯示，P C V7的覆蓋率為58.9%；姚開虎等［5］在2006年2月—2007年2月對上海另一所兒科醫院分離的肺炎鏈球的研究顯示PC V7的覆蓋率為80.0%，兩者差異較大。提示血清型的分布除了存在地域上的差異外，即使在同一地區的不同醫院，不同時期，肺炎鏈球菌的血清型分布也有可能有所變化。使用疫苗應注意地區差異，同時也需進行連續監測。

歐美的監測研究表明，在廣泛使用P C V 7疫苗后，非疫苗覆蓋的血清型引起的侵襲性肺炎鏈球菌病 持 續上 升，尤其 是 19 A。M essina 等［7］報道2002—2005年5歲以下兒童侵襲性肺炎鏈球菌菌株中，19 A 所占比率逐年升高，分別為11.5%、16.0%、36.0%和44.0%。由于PC V7價格較高，在中國尚未納入計劃免疫之列，加之本地區以流動人口居多，PC V7接種率極低，19 A 所占比率僅為1.7% （4/229），在廣泛接種P C V7后，是否如國外的監測19 A的比率大幅上升，值得進一步關注。

本次研究中，肺炎鏈球菌對萬古霉素、左氧氟沙星100%敏感，對青霉素的體外敏感率為92.6%，各主要血清型對本次試驗相應抗菌藥物的耐藥性差異均無統計學意義（P＞0.05）。所分離的肺炎鏈球菌仍對紅霉素、克林霉素、四環素、甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑的耐藥率較高，與以往的監測基本相同［8］。

P C V7疫苗能有效覆蓋本地區肺炎患兒分離的肺炎鏈球菌，可用于本地區的預防接種。所分離菌株對萬古霉素、左氧氟沙星、青霉素敏感率較高，但對大環內酯類藥物耐藥率仍維持較高水平。

［1］ Cl inical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards for A ntimicrobial Susceptibility Testing ［S］.T wentieth Informational Supplement，2010，M 100-S20.

［2］ Scott JA.The preventable burden of pneu m ococcal disease in the developing world［J］.Vaccine，2007，25（13）：2398-2405.

［3］ W orld H ealth Organization.Pheu m ococcal conjugated vaccine for childhood im m unization-W H O position paper［J］.W kly Epidemiol Rec，2007，82（12）：93-104.

［4］ H o PL，La m K F，Chow F K，et al.Serotype distribution and aitimicrobial resistance pattems of nasopharyngeal and invasiveStreptococcus pneu moniaeisolates inH ongK ong children［J］.Vaccine，2004，22（25-26）：3334-3339.

［5］ 姚開虎，王立波，趙根明，等.北京上海廣州深圳4家兒童醫院肺炎住院患兒肺炎鏈球菌分離株的血清型分布［J］.中國循證兒科雜志，2008，3（6）：426-432.

［6］ 張泓，李萬華，孔菁，等.兒童肺炎鏈球菌血清型分布及其對抗菌藥物的耐藥性［J］.中國感染與化療雜志，2011，11（4）：287-290.

［7］ M essina A F，katz-Gaynor K，Barton T，et al.Im pact of the pneu m ococcal conjugate vaccine on serotype distribution and antimicrobial resistance of invasiveStreptococcus pneu moniae isolates in Dallas，T X，children fro m 1999 through 2005［J］. Pediatr Infect Dis J，2007，26（6）：461-467.

［8］ 李明，周湧，郭文婷，等.2011年東莞市太平人民醫院細菌耐藥性監測［J］.中國感染與化療雜志，2013，13（1）：65-71.

Serotype distribution and antimicrobial resistance ofStreptococcus pneumoniaein children in Hu men area

LI Ming，TA N Dingding，Z H A N G Qutao，Z H O U Yong，LI Wei，G U O Wenting，G U O Jinjun. （Department of Laboratory Medicine，Taiping People′s H ospital，Dongguan Guangdong 523907，China）

Objective To investigate the serotype distribution and antimicrobial resistance of theS.pneu moniaestrains isolated fro m children in H u men，and evaluate coverage of the serotypes by several vaccines，especially PC V7.M ethods A total of 229 S.pneu moniaestrains were isolated fro m the children treated in our hospital during January 2011 and Decem ber 2012. Capsular typing was performed by Q uellung reaction.A ntimicrobial susceptibility was determined by A T B ST R E P 5.The data were analyzed by W H O N E T 5.5 software according to C LSI 2010 breakpoints.Results The main serotypes identified fro m the 229S.pneu moniaestrains were 19F（146，63.8%），23F（49，21.4%），6B（12，5.2%）and 14（8，3.5%）.The coverage of these serotypes was 95.2%by PC V7，95.2%by PC V11，and 97.4%by PC V13.Of all theS.pneu moniaestrains，penicillin susceptibleS.pneu moniae（PSSP）accounted for 92.6% （212/229），penicillin intermediateS.pneu moniae（PISP）accounted for 5.7% （13/229）and penicillin resistantS.pneu moniae（P RSP）accounted for 1.7% （4/229）.A bout 95.6%，93.0%，88.2%，86.5%，7.0%，2.2% and 0.9% of the isolates were resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycl ine，trimethoprim-sulfamethoxazole，chloramphenicol，cefotaxime and am oxicillin，respectively.No strain was found resistant to vanco m ycin or levofloxacin.Conclusions The serotypes 19F，23F，6B and 14 are the main prevalent serotypes ofS. pneu moniaein children inH u men.PC V7 could cover 95.2% of theseS.pneu moniae，indicating its appropriateness for vaccination in H u men area.TheseS.pneu moniaestrains were highly sensitive to vanco m ycin，levofloxacin and penicillin，but relatively m ore resistant to erythro m ycin，clindam ycin，tetracycline and trimethoprim-sulfamethoxazole.

Streptococcus pneu moniae；serotype；children；antimicrobial resistance

R378.14

A

1009-7708（2015）01-0043-04

2014-02-17

2014-08-21

廣東省東莞市科技局項目（201110515025046）。

廣東省東莞市太平人民醫院檢驗科，廣東東莞 523907；*兒科。

李明（1974—），男，學士，副主任技師，主要從事臨床微生物檢驗及細菌耐藥監測。

李明，E-mail：liming8813@126.co m。