OCT4和P27kip1蛋白在腎透明細胞癌中的表達及其相關性

關有良，臧東鈺，王丹

OCT4和P27kip1蛋白在腎透明細胞癌中的表達及其相關性

關有良1，臧東鈺2，王丹3△

目的研究OCT4和P27kip1蛋白在腎透明細胞癌中的表達及其相關性。方法采用免疫組織化學方法對24例腎透明細胞癌標本OCT4和P27kip1的表達進行檢測。觀察OCT4和P27kip1在腎癌組織中的陽性表達百分比及細胞分布情況。考察OCT4和P27kip1在性別、年齡（＜60歲和≥60歲）及癌細胞有無轉移間的表達水平差異。對兩者進行相關性分析。結果腎透明細胞癌標本OCT4和P27kip1蛋白陽性表達分別為16例（66.7%）和18例（75%），OCT4蛋白高、中及低表達分別為8例（33.3%）、5例（20.5%）及3例（12.5%），主要在細胞質和細胞核中表達，另有少部分在胞膜中表達。P27kip1高、中及低表達分別為3例（12.5%）、6例（25%）、9例（37.5%），陽性著色在胞漿和胞膜，少部分細胞核可表達。OCT4和P27kip1的表達水平在年齡、性別間差異無統計學意義，在腫瘤有無轉移間差異有統計學意義（P＜0.05）。OCT4和P27kip1在腎癌中的表達呈負相關（rs=-0.408，P＜0.05）。結論OCT4和P27kip1呈負相關，采用抑制OCT4表達或P27kip1的降解，尤其是降低胞質中P27kip1的表達，可作為基因治療腎癌的一個新的的作用靶點。

基因療法；腎透明細胞癌；OCT4；P27kip1；免疫組織化學

腎癌是泌尿系統常見的惡性腫瘤，其中60%～85%為腎透明細胞癌，腫瘤干細胞與癌癥發生發展有密切關系，OCT4是胚胎干細胞的重要調節因子，為一種重要的癌干細胞因子，其表達水平與一些惡性腫瘤如肝癌、喉癌等發生密切相關，并影響這些惡性腫瘤的生物學行為、轉移、復發、治療及預后，水平表達高者進展快、易發生轉移且預后差［1-3］。細胞周期調節的紊亂與腫瘤的發生密切相關，P27kip1屬于細胞周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白。目前關于OCT4在人腎癌組織中的表達情況及OCT4聯合P27kip1表達水平與臨床病理因素關系的研究尚少見報道。本研究旨在探討OCT4和P27kip1在腎癌組織中的表達及其與腎癌的臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2013年10月—2014年10月于本院行腎癌手術的24例患者的腎透明細胞癌標本，男16例，女8例，年齡50～74歲，平均（60.4±8.5）歲，中位年齡60歲。依據2004年WHO腎細胞癌病理分型標準，所有患者均于術后病理證實為腎透明細胞癌。

1.2 主要儀器和試劑小鼠抗人OCT4單克隆抗體（批號：14394708）、兔抗人P27kip1單克隆抗體（批號：14620812）、兔超敏二步法檢測試劑盒（批號：k145611f）均購于中杉金橋生物技術有限公司；DAB顯色系統（武漢博士德公司），光學顯微鏡（OLYMPUS BX51）。

1.3 OCT4和P27kip1蛋白表達的檢測采用免疫組織化學SP法檢測OCT4、P27kip1蛋白在石蠟包埋病理標本中的表達情況。實驗操作步驟按試劑盒說明，DAB顯色，蘇木素復染，脫水、透明、封片。陰性對照以PBS代替一抗。

1.4 結果判定（1）OCT4結果判定標準［2］：隨機讀取5個高倍鏡視野（×200），按染色強度及陽性細胞占腫瘤細胞總數的百分比綜合判定。染色強度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。陽性細胞數：＜5%0分，5%～25%1分，26%～50%2分，＞50%3分。染色強度與陽性細胞數得分之乘積，0分為陰性（-），1～3分為低表達（+），4～5分為中度表達（++），≥6分為高表達（+++）。P27kip1結果判定標準：隨機讀取5個高倍鏡視野（×200），按陽性細胞占腫瘤細胞總數的百分比判定，P27kip1陽性細胞數＜10%記為“-”，10%～30%記為“+”，31%～60%記為“++”，＞60%記為“+++”。（2）考察OCT4和P27kip1在性別、年齡（＜60歲和≥60歲）及癌細胞有無轉移中的表達水平差異。（3）計算腎細胞癌中OCT4、P27kip1蛋白表達間的相關性。

1.5 統計學方法采用SPSS17.0軟件進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以表示。計數資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。相關分析采用Spearman等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 OCT4和P27kip1在腎透明細胞癌組織中的表達情況癌組織中OCT4表達陽性為16例（66.7%），高、中及低表達分別為8例（33.3%）、5例（20.5%）及3例（12.5%），主要在細胞質和細胞核中表達，另有少部分在胞膜中表達，陽性染色呈現粗大棕黃色顆粒。癌組織有P27kip1表達18例（75%），高、中及低表達分別為3例（12.5%）、6例（25%）、9例（37.5%），P27kip1陽性著色在胞漿和胞膜，少部分在細胞核可表達，見圖1。

Fig.1Expressions of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma（DAB staining，×200）圖1 OCT4和P27kip1在腎透明細胞癌組織中的表達（DAB顯色，×200）

2.2 OCT4和P27kip1的表達與臨床病理特征的關系OCT4、P27kip1的表達水平在性別、年齡間差異無統計學意義，與腫瘤在腫瘤有無轉移間差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.3 OCT4與P27kip1的相關性OCT4與P27kip1的表達呈負相關（rs=-0.408，P=0.048），見表2。

3 討論

OCT4主要存在于多能干細胞中，并和其他因子一起維持多能干細胞多向分化潛能和自我更新能力。有關腎細胞癌的研究表明，OCT4在癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，OCT4表達與腎細胞

癌T分期及淋巴結轉移無明顯相關性［4-5］。本研究結果顯示，腎癌組織中有OCT4陽性表達，與文獻［4］報道相符，表明OCT4陽性表達可能對癌癥的發生有促進作用。此外，結果還顯示OCT4在年齡、性別間差異無統計學意義，在腫瘤有無轉移間差異有統計學意義，與文獻［6-7］相符，提示OCT4可能與腫瘤的轉移及侵襲能力有關。但與文獻［5］不一致，考慮原因為文獻［5］中患者86例，采用組織免疫熒光染色法檢測OCT4表達，本研究為24例，采用免疫組織化學SP法檢測OCT4表達，樣本數量和實驗方法不同可能是結果不同的原因之一。因此，筆者認為臨床上通過檢測OCT4的表達有助于預測腎癌的發生及轉移狀況。

Tab.1Relationship between expressions of OCT4，P27kip1and clinicopathological parameters in patients with renal hyaline cell carcinoma表1 OCT4和P27kip1表達與臨床病理特征的關系例（%）

Tab.2The relationship between expressions of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma表2 OCT4和P27kip1在腎透明細胞癌組織中表達的相關性

細胞周期調節的紊亂與腫瘤的發生密切相關，P27kip1屬于細胞周期素依賴性蛋白激酶抑制蛋白。本研究顯示，癌組織中P27kip1蛋白的表達多定位于胞質和胞膜，少數表達在胞核，與文獻［8-9］報道一致。因此，筆者認為癌組織中P27kip1在胞核與胞漿的表達比例會有所降低。另有研究顯示，OCT4與Skp2在乳腺組織中的表達呈正相關［10］。癌組織中對P27kip1與Skp2兩者相關分析較多。研究顯示，在肺癌組織中兩者的表達呈負相關［11］。但有關OCT4和P27kip1表達間的關聯性尚無定論。研究顯示，喉癌中OCT4是過表達，在胃癌、宮頸癌組織中P27kip1表達則下調［12-13］。本研究顯示，OCT4與P27kip1表達呈負相關，筆者推測組織中可能存在OCT4-P27kip1通路，OCT4可能降低P27kip1的表達，尤其是在胞核中的表達，但機制尚需進一步探討。

綜上所述，針對OCT4和P27kip1的作用機制，采用抑制OCT4表達或P27kip1的降解，尤其是降低胞質中P27kip1的表達，可作為腎癌診治的一個新的基因治療的作用靶點。

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（2015-03-20收稿 2015-05-06修回）

（本文編輯 陸榮展）

The expression of OCT4 and P27kip1in renal hyaline cell carcinoma and their correlations

GUAN Youliang1，ZANG Dongyu2，WANG Dan3△
1 Department of Urinary Surgery of the First Affiliated Hospital，Liaoning Medical College，Jinzhou 121001，China；2 Department of Thoraxes Surgery of the Third Affiliated Hospital，Liaoning Medical College；3 Department of Histology and Embryology，Liaoning Medical College△

ObjectiveTo investigate the expressions of OCT4 and P27kip1and their correlations in renal hyaline cell carcinoma.MethodsA total of 24 samples of renal hyaline cell carcinoma were detected by immunohistochemistry.The rate of cells with positive labelling of OCT4 and P27kip1and their intra cellular distribution were observed in renal hyaline cell carcinoma.The expression levels of OCT4 and P27kip1were compared between different gender，age（＜60y and≥60y）and cancer cell metastasis groups.ResultsThe rates of cells with positive OCT4 and P27kip1expressions were 66.7%and 75%in renal hyaline cell carcinoma respectively.The ratio of cells with high，middle and low expression of OCT4 were 33.3%，20.5%and 12.5%in renal hyaline cell carcinoma tissues.OCT4 was mainly expressed in cytoplasm and nuclei with a few was expressed in the cell membrane.The ratio of cells with high，middle and low expression of P27kip1were 12.5%，25% and 37.5%in renal hyaline cell carcinoma tissues respectively.The positive staining of P27kip1was in the cytoplasm and cell membrane，and a small number of nuclei were expressed.There were no significant differences in OCT4 and P27kip1between different age and gender groups.There were significant differences in OCT4 and P27kip1expressions between patients with metastasis and patients without metastasis（P＜0.05）.A negative correlation was found between OCT4 and P27kip1expressions in renal hyaline cell carcinoma（rs=-0.408，P＜0.05）.ConclusionThe expression of OCT4 is negatively correlated with the expression of P27kip1.Inhibiting expressions of OCT4 or P27kip1，especially knocking down P27kip1in cytoplasm can be used as a new diagnosis and treatment of renal cancer gene therapy.

gene therapy；renal clear cell carcinoma；OCT4；P27kip1；immunohistochemistry

R737.11

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.12.018

遼寧省自然科學基金資助項目（2013022009）；遼寧醫學院校長基金項目（XZJJ20130243）

1遼寧醫學院附屬第一醫院泌尿外科（郵編121001）；2遼寧醫學院附屬第三醫院胸外科；3遼寧醫學院組織胚胎學教研室

關有良（1973），男，副主任醫師，碩士，主要從事腎癌發病機制研究

△通訊作者E-mail：595680903@qq.com