細穗紅三七的生藥學研究

岐琳??姜海??牛曉峰

[摘要] 目的 對細穗紅三七Polygonum suffultum var. pergracile進行性狀鑒別、顯微鑒別和總蒽醌含量測定。 方法 性狀鑒別及顯微鑒別采用形態學和組織學鑒別方法，總蒽醌含量測定采用分光光度法。 結果 細穗紅三七根莖和葉薄壁細胞中含草酸鈣簇晶；粉末中可見纖維、不定式氣孔、非腺毛和草酸鈣簇晶。細穗紅三七總蒽醌含量為1.0%～1.5%。 結論 上述性狀及顯微特征和總蒽醌含量測定可用于細穗紅三七藥材的質量鑒定。

[關鍵詞] 細穗紅三七；生藥學；總蒽醌；含量測定

[中圖分類號] R282.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2015）17-54-04

Study on the pharmacognosy of Polygonum suffultum var. pergracile

QI Lin JIANG Hai NIU Xiaofeng

School of Pharmacy， Xi'an Jiaotong University， Xi'an 710061，China

[Abstract] Objective To establish a microscope identification method and to determine total anthraquinones content of Polygonum suffultum var. pergracile. Methods Morphological and histological methods be used for microscope identification， Spectrophotometry be used for determination of total anthraquinones content. Results There are clusters crystals instems in rhizome and leaf of Polygonum suffultum var. pergracile； Anomocytic type stomas， fibers， non-glandular hairs and clusters crystals instems are visible in powder. The content of total anthraquinones was 1.0%-1.5%. Conclusion The microscopic character and the determination method of total anthraquinones content can be used for the quality determination of Polygonum suffultum var. pergracile.

[Key words] Polygonum suffultum var. pergracile； Pharmacognosy； Total Anthraquinones； Assaying

細穗紅三七Polygonum suffultum Maxim. var. pergracile （Hemsl.）G. Sam.為蓼科蓼屬植物，又稱螺絲七、趕山鞭和九節犁等，主要分布于我國陜西、四川、云南省[1]。藥用根莖或全草，為止痛、化瘀劑，主治胃痛，傷勞瘀血、紅白痢及脫肛等癥；又為收斂止血藥，主治月經不凋、血崩、便血、淋癥及勞傷等[2-4]。目前，細穗紅三七目前研究報道很少，細穗紅三七的生藥學研究及有效部位總蒽醌的含量測定未見報道，為此我們對細穗紅三七進行了生藥學研究，為細穗紅三七藥材質量標準的建立提供了依據。

1 資料與方法

1.1 試藥

2012年采于西安交通大學藥學院藥用植物園及陜西省戶縣，經鑒定為細穗紅三七Polygonum suffultum Maxim. var. pergracile （Hemsl.）G. Sam.的全草。1，8-二羥基蒽醌對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號： 110829-9702）。

1.2 方法

1.2.1 藥材顯微鑒別 采取新鮮藥材，利用徒手切片、石蠟切片、表面裝片以及粉末片進行藥材顯微組織結構觀察。顯微圖采用44XIV型顯微掃描

儀繪制。

1.2.2 總蒽醌含量測定 采用日本島津UV-260型紫外可見分光光度計進行含量測定。

對照品溶液制備：取1，8-二羥基蒽醌對照品約10mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得含1，8-二羥基蒽醌0.2mg/mL的對照品溶液。

供試品溶液制備：取細穗紅三七藥材粗粉約0.2g，精密稱定，加氯仿30mL及12.5moL/mL硫酸溶液15mL，沸水浴回流水解2h，收集氯仿層，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并分次轉移至10mL量瓶中，最終用甲醇稀釋至刻度，搖勻后精密量取1mL，移至10mL量瓶中，用0.8%醋酸鎂-甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

線性關系考察：精密吸取濃度為0.216mg/mL的1，8-二羥基蒽醌對照品溶液0.2，0.6，1.0，1.4，1.8和2.0mL，分別移至25mL量瓶中，水浴蒸干甲醇，用0.8%醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度。照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010版一部，附錄ⅤA），以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在516nm波長處測定溶液的吸光度值。以1，8-二羥基蒽醌對照品的濃度Y為橫坐標，被測溶液吸光度值X為縱坐標，進行線性回歸。

精密度實驗：精密量取已配制好的1，8-二羥基蒽醌對照品溶液1.0mL，按線性關系考察項下方法操作，然后在516nm波長處測定溶液的吸光度值，連續6次。

穩定性實驗：將同一批號已制備好的供試品溶液，立即在0，15，30，60，90和120min的時間點，在516nm波長處測定溶液的吸光度值。

重復性實驗：精密稱取同一批號藥材粉末約0.2g，分別制備6份供試品溶液，然后在516nm波長處測定溶液的吸光度值，采用標準曲線法計算出6份藥材的總蒽醌含量。

加樣回收率實驗：分別精密稱取已測定含量的藥材粉末0.1g，精密加入一定濃度的1，8-二羥基蒽醌對照品溶液，水浴揮干甲醇，按照供試品溶液制備項下的方法，共制備藥材供試品溶液6份，以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，照紫外-可見分光光度法，在516nm波長處測定溶液吸光度值，采用標準曲線法計算樣品含量，并計算回收率。

樣品測定：取西安交通大學藥學院藥用植物園及陜西省戶縣所采集的6個批次細穗紅三七藥材，按照供試品溶液制備項下的方法，共制備藥材供試品溶液6份，按線性關系考察項下方法操作，然后在516nm波長處測定溶液的吸光度值，計算藥材總蒽醌含量。

2 結果

2.1 植物形態

多年生草本植物，植株高10～35cm。根狀莖粗短，具殘留的老葉柄，生有須根。莖叢生或單生，細弱，直立，不分枝，無毛或在近節處被稀疏柔毛。基生葉和下部莖生葉具長柄，葉片草質，卵形或團卵形，長4～10cm，寬3～6cm，先端漸尖，基部心形，表面無毛或被稀疏毛，莖生葉3～5枚，具短葉柄至近于無柄，葉片漸小，托葉鞘膜質，褐色，管狀；花序為稀疏的穗狀花序，頂生和腋生，長1～3cm，直徑約1cm，苞片褐色，膜質，卵形或卵狀披針形，長約2mm，光端漸尖，內含1朵花，花被白色，或初期帶粉紅色，長約3mm，5深裂，裂片橢圓狀倒卵形或長圓形，先端鈍，雄蕊8枚，露出花被外；花柱3枚，線形，露出于花被外，桂頭小，頭狀。果實橢圓狀三棱形，長約3mm，兩端尖，黑褐色。花期4～5月，果期5～7月。產于我國陜西、四川、云南省。

2.2 藥材性狀

根莖呈結節狀圓柱形，稍彎曲，長2～8cm，直徑0.3～1.5cm。表面棕褐色至紫褐色，結節處被有葉柄殘基、須根或須根痕，有時可見細長的節間。質硬，易折斷，斷面淺粉紅色至棕紅色，近邊緣處有黃白色維管束小點9～30個，排列成斷續環狀。氣微、味澀。

2.3 顯微特征

2.3.1 根莖橫切面 最外層為木栓層，由4～5列扁長方形細胞構成，細胞壁較薄且微栓化；皮層由大的薄壁細胞組成；韌皮部由數層小型扁平狀薄壁細胞構成，在其外側存在有少量的單個纖維或纖維束，纖維壁略增厚；維管束為無限外韌型，形成層由3～4層長方形狀薄壁細胞組成；木質部可見導管多數多徑向排列，內側偶見木纖維；根莖的薄壁細胞中含有草酸鈣簇晶及小型淀粉粒。結果見圖1。

2.3.2 莖橫切面 最外層為表皮，由2～3列排列緊密的類方形栓化細胞構成，細胞壁稍增厚。皮層由數列多角形的薄壁細胞組成，細胞排列較緊密。維管束為有限外韌型，環狀排列，約為16束，韌皮部較窄小，其外側有較多成群分布的韌皮纖維，形成層2～3列，不明顯；木質部導管呈不明顯的徑向排列，其內側偶有木纖維；髓部由大型薄壁細胞構成；莖的薄壁細胞中偶見草酸鈣簇晶。結果見圖2。

2.3.3 葉橫切面 葉的上下表皮均由1列橫向延長的薄壁細胞構成。葉上表皮下具有1列短柱狀柵欄細胞，未通過主脈；葉主脈的維管束1～2束，為有限外韌型，木質部由數個放射狀排列的導管和木薄壁細胞構成；葉薄壁細胞中可見到草酸鈣簇晶；葉表皮上偶見1～5細胞構成的非腺毛。結果見圖3。

1.木栓層；2.草酸鈣簇晶；3.皮層；4.韌皮部；

5.形成層；6.纖維；7.木質部；8.髓部

圖1 細穗紅三七根莖橫切面圖（×200）

1.表皮；2.纖維；3.韌皮部；

4.木質部；5.髓部

圖2 細穗紅三七莖橫切面圖（×300）

1.上表皮；2.柵欄組織；3.海綿組織；4.木質部；

5.韌皮部；6.草酸鈣簇晶；7.下表皮

圖3 細穗紅三七葉橫切面圖（×300）

2.3.4 粉末 非腺毛1～5細胞，直徑6～21?m，長26～151?m；葉表皮氣孔為不定式，其副衛細胞3～4個；纖維壁稍增厚，細胞壁的紋孔及孔溝有時不明顯，直徑6～22?m，長42～220?m；導管主為網紋和梯紋導管，少為具緣紋孔，直徑14～32?m；薄壁細胞中含有草酸鈣簇晶，直徑20～76?m，棱角明顯且較尖（圖4）。

1.非腺毛；2.氣孔；3.網紋導管；4.纖維；5.螺紋導管；

6.具緣紋導管；7.木栓細胞；8.草酸鈣簇晶

圖4 細穗紅三七粉末圖（×350）

2.4 總蒽醌含量測定

2.4.1 方法學考察 線性關系考察實驗中，計算得回歸方程為Y=0.0343X+0.0362，r=0.9998。實驗結果顯示，對照品濃度在1.728～17.280μg/mL范圍內，1，8-二羥基蒽醌的對照品濃度與溶液的吸光度值之間呈現良好的線性關系；精密度實驗的RSD為0.55%，實驗結果顯示，所使用的儀器精密度良好；穩定性實驗的RSD為0.92%，實驗結果顯示，制備的供試品溶液在120min內，有著良好的穩定性；重復性實驗的RSD為1.83%，實驗結果顯示，所建立的含量測定方法的重復性良好；加樣回收率實驗中，6份樣品的平均回收率為97.9%，其RSD為2.2%。

2.4.2 樣品測定 戶縣3批野生的細穗紅三七藥材總蒽醌含量分別為1.3%、1.5%和1.2%，藥圃栽培的3批細穗紅三七藥材總蒽醌含量分別為1.2%、1.1%和1.0%。

3 討論

細穗紅三七藥材顯微鑒別中可見，根莖及葉的薄壁細胞中含草酸鈣簇晶；粉末中可見到不定式氣孔、細胞壁稍增厚的纖維、1～5細胞的非腺毛和草酸鈣簇晶；以上顯微特征可作為細穗紅三七的鑒別要點。

蒽醌類化合物有多種藥理活性，如抗氧化[5]、抗菌消炎[6]、抗病毒[7-9]、抗癌[10-11]及利膽明目[12-13]等，細穗紅三七藥材中含有蒽醌類化合物，為了進一步控制藥材質量，我們參考文獻進行了不同采集地點和不同批次藥材中總蒽醌的含量測定[14-17]。在測定過程中，對細穗紅三七總蒽醌的測定波長選擇進行了實驗，實驗方法為吸取1，8-二羥基蒽醌對照品溶液、細穗紅三七藥材供試品溶液適量，分別置于25mL量瓶中，水浴蒸干甲醇，用0.8%醋酸鎂甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，照紫外-可見分光光度法，以0.8%醋酸鎂甲醇溶液為空白，在300～600nm波長范圍內進行掃描，分別得到對照品溶液和藥材樣品溶液的紫外吸收圖譜。實驗結果顯示，對照品溶液和藥材樣品溶液在516nm處均具有最大吸收，故實驗中選用516nm為樣品測定波長。

[參考文獻]

[1] 中國科學院西北植物研究所.秦嶺植物志（第2冊）[M]. 北京：科學出版社，1976：163-164.

[2] 張建平.秦嶺山地藥用植物資源概況[J].資源開發與保護雜志，1986，2（2）：28-31.

[3] 程虎印.太白山“七藥”及其植物資源研究[J].陜西中醫，1990，11（8）：371-372.

（下轉第頁）

（上接第頁）

[4] 吳振海，傅青，陳書文.陜西民間“三七”藥品種整理[J].中藥材，1990，13（5）：14-16.

[5] 潘英明，張曉璞，朱金嬋，等.虎杖中抗氧化成分的提取分離及其活性研究[J].精細化工，2005，22（11）：835-837.

[6] 茍奎斌，孫麗華，婁衛寧，等.大黃4種蒽醌類化合物抑制幽門螺桿菌結果比較[J].中國藥學雜志，1997，32（5）：278-280.

[7] 梁榮感，羅偉生，李利亞，等.大黃蒽醌類化合物體外抗流感病毒作用的研究[J].華夏醫學，2006，19（3）：396-398.

[8] 吳春玲.蘆薈的藥理與臨床應用[J].海峽藥學，2004，16（1）：92-94.

[9] Andersen DO，Weber ND，Wood SG，et al.In vitro vi-rucidal activity of selected anthraquinones and an-thraquuinone derivatives[J].Antiviral Res，1991（16）：185-196.

[10] Galasinski W，Chlabicz J，Paszkiewcz-Gadek A.The substances of plant origin that inhibit protein biosynthesis[J].Acta Pol Pharm，1996，53（5）：11-18.

[11] 郭蘭，鄧懷慈.蘆薈中的活性成分-蒽醌化合物抗腫瘤的研究[J].現代腫瘤醫學，2006，14（6）：757-759.

[12] 韓昌志.決明子煎劑對家兔和狗睫狀肌中乳酸脫氫酶活性的影響[J].同濟醫科大學學報，1994，23（6）：470-472.

[13] Arosio B，Gagliano N，Fusaro LM，et al.Aloe-Emodin quinone prtreatment reduces acute liver injury in-duced by carbon tetrachloride[J].Pharmacol Toxicol，2000，87（5）：229-233.

[14] 段瑞，蘇雪慧，曲曉蘭，等.泰山土大黃總蒽醌含量的測定[J].中國實用醫藥，2009，4（13）：31-33.

[15] 魏玉輝，武新安，陳嵐，等.大黃蒽醌類成分含量測定方法實驗[J].蘭州大學學報，2005，31（1）：13-15.

[16] 劉翠哲，王汝興，劉喜剛，等.測定大黃總蒽醌含量的分光光度法改進[J].天津中醫藥，2004，21（4）：335-336.

[17] 杜星，李昭，郭東艷，唐志書，等. 大黃生品及不同炭品中總蒽醌及游離蒽醌的含量測定[J].現代中西醫結合雜志，2013，22（27）：3059-3060.

（收稿日期：2015-04-07）