保泰松片HPLC含量檢測(cè)方法的建立

李玲??陳乃江??姜燕

[摘要] 目的 建立保泰松片含量測(cè)定的HPLC方法。 方法 采用Phenomenex Luna C18（250 mm × 4.6 mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水（磷酸調(diào)pH至3.0）（70︰30），流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為239nm，柱溫為室溫，進(jìn)樣體積為10μL。結(jié)果 保泰松在9.65～96.50μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為99.6%，RSD為0.7%（n=9），保泰松檢測(cè)限為2ng。 結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于保泰松片的含量測(cè)定。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；保泰松片；含量測(cè)定；方法驗(yàn)證

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）17-61-03

HPLC method for content determination of phenylbutazone tablets

LI Ling CHEN Naijiang JIANG Yan

Lianyungang Institute for Drug Control， Lianyungang 222006， China

[Abstract] Objective To develop a method for the determination of phenylbutazone tablets by HPLC. Methods A Phenomenex Luna C18 column（250mm×4.6mm，5μm） was used， and the mobile phase was acetonitrile –water[adjusting pH to 3.0 with phosphoric acid] （70∶30）. The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was set at 239nm. The injection volume was 10μL. Results The linear range of phenylbutazone was 9.65-96.50μg/mL （r=0.9999）， the average recovery was 99. 6% and RSD was 0.7%（n=9）， the limit of detection was 2ng. Conclusion The method is simple， accurate with promising sensitivity and reproducibility， and can be used in the determination of phenylbutazone tablets.

[Key words] HPLC； Phenylbutazone tablets； Determination； Method verification

保泰松片為非甾體類(lèi)抗炎鎮(zhèn)痛藥，用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及痛風(fēng)。本品不良反應(yīng)發(fā)生率較高[1-4]，因此有必要建立一種準(zhǔn)確、有效、快捷的含量測(cè)定方法。保泰松片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第5冊(cè)[5]，原標(biāo)準(zhǔn)中保泰松片的含量測(cè)定采用容量分析法。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6]，有HPLC法測(cè)定保泰松片的含量，采用磷酸二氫鉀溶液作為緩沖鹽，流動(dòng)相配制復(fù)雜，且對(duì)色譜柱有損害，會(huì)大大縮短色譜柱的使用壽命。本文選擇乙腈-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，建立了高效液相色譜法測(cè)定保泰松片的含量，此法避免了使用緩沖鹽對(duì)色譜柱壽命的影響，且方法簡(jiǎn)單、專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695 高效液相色譜儀、Waters 2996 DAD檢測(cè)器，Empower 色譜工作站，Sartorius BP-211D 電子天平，PHS-3C型酸度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），BRANSON B5500S-MT型超聲儀。

1.2 試藥

對(duì)照品保泰松（批號(hào)100481-200601，含量99.9%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；保泰松片[上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司，H41024168，規(guī)格為0.1 g，批號(hào)為13082702，1312280，14043002]；乙腈為色譜純（德國(guó)Merck公司），磷酸為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Phenomenex Luna C18（250mm ×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（磷酸調(diào)pH至3.0）（70︰30）；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為239nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按保泰松峰計(jì)算不低于4000。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取保泰松對(duì)照品96.60mg，置100mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL置100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取樣品（批號(hào)13082702）20片，除去包衣后，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置100mL量瓶中，加甲醇約70mL，超聲處理20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取不含保泰松的空白輔料適量，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專(zhuān)屬性考察

分別取對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。從色譜圖可見(jiàn)，其他成分對(duì)保泰松的測(cè)定無(wú)干擾，保泰松的保留時(shí)間約為7.4 min。表明該方法專(zhuān)屬性良好。

圖1 對(duì)照品溶液（A）、樣品溶液（B）及陰性溶液（C）的液相色譜圖

2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密量取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0mL，分別置100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程：Y=29506X+21093，r=0.9999。表明保泰松在9.65～96.50 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.7 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品溶液（批號(hào)13082702），分別于0、2、4、6、8、12、16 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果保泰松峰面積RSD=0.5%，表明樣品在16h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 精密度考察

取同一份供試品溶液（批號(hào)13082702），連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定保泰松峰面積。結(jié)果RSD=0.5%，表明儀器精密度良好。

2.9 重復(fù)性考察

取同一批樣品（批號(hào)13082702）6份，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果RSD=0.7%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取9份已測(cè)知含量的樣品（批號(hào)13082702）細(xì)粉，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于保泰松5mg），分別置20mL量瓶中，平均分成3組，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液4、5、6mL，加甲醇適量，超聲處理20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密吸取10μL，注入液相色譜儀，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果本品低、中、高3個(gè)濃度的平均回收率（n=9）為99.6%，RSD=0.7%。說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

樣品含量

（mg） 加入量

（mg） 測(cè)得量

（mg） 回收率

（%） 平均回收率

（%） RSD

（%）

4.883 3.864 8.701 98.81 99.6 0.7

4.870 3.864 8.723 99.72

4.888 3.864 8.707 98.84

4.918 4.830 9.758 100.21

4.901 4.830 9.717 99.71

4.883 4.830 9.743 100.62

4.853 5.796 10.642 99.88

4.879 5.796 10.631 99.24

4.892 5.796 10.658 99.48

2.11 檢測(cè)限和定量限

精密吸取保泰松對(duì)照品溶液適量，加甲醇逐步稀釋至色譜圖中保泰松峰高分別為噪音的3倍和10倍，測(cè)得保泰松的檢測(cè)限和定量限分別為2ng和5ng。

2.12 樣品含量測(cè)定

取3批供試品，按“2.3”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密量取10μL，按外標(biāo)法計(jì)算含量，3批樣品含量分別為97.1%，96.4%，98.6%。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

保泰松為吡唑烷二酮類(lèi)化合物，在不同pH溶液中呈現(xiàn)不同的光譜吸收，在本文的偏酸性流動(dòng)相色譜條件下，經(jīng)DAD檢測(cè)器在190～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)保泰松在239 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收，因此選擇239nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

參考有關(guān)文獻(xiàn)資料[6-15]及相關(guān)書(shū)籍[16-18]，考慮流動(dòng)相操作簡(jiǎn)單方便，且對(duì)色譜柱損害最小原則，分別考察了甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)在不同pH條件下對(duì)峰型的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈-水系統(tǒng)優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)；試驗(yàn)中以磷酸調(diào)節(jié)水pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0時(shí)對(duì)峰形的影響，結(jié)果表明當(dāng)乙腈-水（pH 3.0）為70︰30時(shí)峰型最好，且基線(xiàn)平穩(wěn)，出峰時(shí)間適中。

3.3 提取條件的選擇

保泰松溶于乙醇或乙醚，幾乎不溶于水，考慮有機(jī)溶劑的性質(zhì)，選擇甲醇作為提取溶劑；同時(shí)考察超聲時(shí)間對(duì)提取效果的影響，發(fā)現(xiàn)超聲20min即能使有效成分溶出。故以此為提取條件。

3.4 耐用性試驗(yàn)

改變色譜條件：乙腈初始濃度（±5%），流動(dòng)相pH（±0.5），柱溫（±5℃），流速（±0.1mL/min），根據(jù)主峰理論板數(shù)和拖尾因子進(jìn)行考察試驗(yàn)條件的耐用性。經(jīng)試驗(yàn)，以上變動(dòng)均能滿(mǎn)足本試驗(yàn)系統(tǒng)適用性要求，表明該方法耐用性良好。

本研究建立HPLC法測(cè)定保泰松片的含量，具有操作簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，可以避免容量分析法的固有缺點(diǎn)，可作為保泰松片的定量分析方法。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 朱學(xué)義，董樂(lè)，李澤純.保泰松合用地塞米松致藥物剝脫性皮炎并藥物性肝炎1例[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（13） ：77.

[2] 但蓓蓓.保泰松急性中毒患兒1例救治報(bào)道[J].兒科藥學(xué)雜志，2012，18（3）：1.

[3] 肖曙芳，李亞玲，陳祝，等.保泰松中毒致多器官功能障礙1例[J].兒科藥學(xué)雜志，2006，12（6）：62.

[4] 王蕊婷，盧亞弟，尉亞娥.保泰松引起頻發(fā)多源性室性期前收縮一例[J].山西醫(yī)藥雜志，2002，4（2）：156.

[5] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（二部）[S].第五冊(cè).1996：65.

[6] 孫旌文，馬洪濤.高效液相色譜法測(cè)定保泰松片的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25（5）：332-333.

[7] 張磊，白青山，王亮.復(fù)方顛茄口服溶液中硫酸阿托品含量測(cè)定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].藥物分析雜志，2013，33（8） ：1407-1410.

[8] 穆同娜，王浩，劉艷琴，等.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的保泰松[J].日用化學(xué)工業(yè)，2011，41（6） ：459-461.

[9] 車(chē)洪勇，楊元玉，馮愛(ài)萍.HPLC法測(cè)定關(guān)節(jié)鎮(zhèn)痛片中保泰松和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量[J].中國(guó)藥事，2003，17（3）：167-168.

[10] 杜興.HPLC法測(cè)定風(fēng)濕松片中保泰松及氨基比林的含量[J].西北藥學(xué)雜志，1999，14（2）：53.

[11] 姜澤慧，吳勇.市售保泰松片溶出度方法的考察[J].中國(guó)藥師，2014，17（6）：962-964.

[12] 郭旭光，鄭子棟.多索茶堿注射液的含量測(cè)定方法改進(jìn)[J].中國(guó)藥事，2014，28（7）：774-777.

[13] 黎昌權(quán)，熊雪慶.HPLC法測(cè)定尼美舒利顆粒的含量[J].中國(guó)藥師，2014，17（9）：1590-1594.

[14] 閆韶華.HPLC法測(cè)定維生素B1片的含量及含量均勻度[J].數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜雜志，2013，26（6）：729-730.

[15] 劉瑛，陳運(yùn)峰.高效液相色譜法測(cè)定土霉素片的含量[J].中國(guó)藥事，2004，18（5）：300-301.

[16] 孫毓慶.分析化學(xué)下冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：297-301.

[17] 孫毓慶.現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2005：235-236.

[18] 劉文英.藥物分析[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：381-382.

（收稿日期：2015-06-03）