食管鱗癌組織中磷酸化表皮生長因子受體和Akt蛋白的表達*

盧 紅，王建軍，周 芳

河南大學淮河醫院腫瘤科開封475000

△女，1973年12月生，博士，副教授，副主任醫師，研究方向:惡性腫瘤的綜合治療，E-mail:hhyyluhong@126．com

表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是細胞表面的受體酪氨酸激酶，能夠與大量的生長因子如表皮生長因子和雙調蛋白相互作用。磷酸化的EGFR(p－EGFR)能夠激活不同的胞內信號途徑，從而導致細胞增殖和存活［1］，因而EGFR 可能成為治療這些腫瘤的分子靶點［2］。蛋白激酶(Akt)信號途徑作為EGFR 調控的下游信號途徑之一［3］，其激活主要體現在以下幾個方面:Akt 的磷酸化、前凋亡蛋白BAD 的失活以及雄性激素受體轉錄活性的變化等［4－5］。目前，越來越多的研究［6－7］顯示，p－EGFR 和磷酸化Akt(p－Akt)的過表達與腫瘤的增殖、存活及預后關系密切。作者采用免疫組化方法檢測食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織中p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表達，分析其與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關系，探討二者在食管鱗癌中表達的相關性，為食管鱗癌惡性程度的預測提供新的理論依據。

1 材料與方法

1．1 組織標本 選取河南大學淮河醫院2011年7月至2012年2月食管癌標本50例，均經病理學證實為食管鱗癌。每例標本于手術切除后40 min 內取癌組織及癌旁正常食管黏膜組織(距腫瘤邊緣5～8 cm)，立即置于液氮中。患者中男31例，女19例。腫瘤直徑＜3 cm 者15例，3～5 cm 者14例，＞5 cm 者21例。TNM 分期:Ⅱ期11例，Ⅲa 期13例，Ⅲb 期15例，Ⅳ期11例。分化程度:低分化27例，中分化13例，高分化10例。有淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移23例。

1．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的免疫組化檢測將食管鱗癌及癌旁正常食管黏膜組織標本5 μm 厚連續切片，微波修復抗原，分別與一抗［兔抗人p－Akt(Ser 473)多克隆抗體為Abcam 公司產品，兔抗人p－EGFR(1173)多克隆抗體為Santa Cruz 公司產品］、二抗反應。DAB 顯色，蘇木素復染。結果判定:以胞質、胞膜或胞核出現黃色顆粒為陽性細胞。每張切片選5個高倍視野，計算每個視野陽性細胞百分率。陽性細胞百分率＜10% 為1 分，10%～50%為2 分，＞50%為3 分;按染色強弱評分:無黃色顆粒為0 分，淡黃色染色為1 分，中度黃色染色為2 分，棕黃色染色為3 分。然后按照2種評分的乘積計算總分，總分＜3 分為陰性，≥3 分為陽性。

1．3 統計學處理 采用SPSS 13．0 進行分析。應用配對資料的χ2檢驗比較食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p－EGFR 和p－Akt 蛋白表達的差異，應用χ2檢驗分析p－EGFR 和p－Akt 蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關系，應用Pearson 相關分析食管鱗癌組織中兩種蛋白表達的關系，檢驗水準α=0．05。

2 結果

2．1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表達 見圖1 和表1、2。p－EGFR 蛋白陽性表達產物主要定位于細胞質或細胞膜。食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白陽性表達率為78% (39/50)，高于癌旁正常食管黏膜組織［40%(20/50)］。p－Akt 陽性表達產物主要定位于細胞質或細胞核，其在食管鱗癌組織中的陽性表達率為80% (40/50)，高于癌旁正常食管黏膜組織［6%(3/50)］。

圖1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR(A)和p-Akt(B)蛋白的表達(SP，×400)

表1 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-EGFR 蛋白表達的比較(n=50)例

表2 食管鱗癌及癌旁正常食管組織中p-Akt 蛋白表達的比較(n=50)例

2．2 p-EGFR 和p-Akt 蛋白的表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關系 見表3。

表3 p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的關系

2．3 食管鱗癌組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的關系 見表4。

表4 食管鱗癌組織中p-EGFR 和p-Akt 蛋白表達的關系例

3 討論

當前分子靶向治療作為一種新的腫瘤治療的替代手段已經顯示出極大的應用前景。采用EGFR 作為分子靶點開發出很多靶向藥物，如吉非替尼［8］、埃羅替尼［9］、西妥昔單抗［10］等。Hiraishi 等［11］研究發現，口腔鱗癌組織中p－EGFR 和EGFR 蛋白表達的陽性率分別為98%(51/52)和92．3%(48/52)，并發現二者均與腫瘤分期和淋巴結轉移無關，提示其高表達可能成為預測口腔鱗癌極好的分子標志之一。此外，胃腸道類癌和胰腺內分泌腫瘤中均檢測出高水平的p－EGFR 和EGFR 蛋白的表達，且發現高表達p－EGFR 的胰腺內分泌腫瘤患者與低表達或不表達p－EGFR 的患者相比，其預后更差［12］，提示p－EGFR 在腫瘤的發生和預后中發揮重要的作用。為了進一步了解食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白的表達情況，作者采用免疫組化法分析食管鱗癌組織和癌旁正常食管黏膜組織中p－EGFR 蛋白的表達，發現食管癌組織中p－EGFR 表達的陽性率高于癌旁正常食管組織;進一步分析發現有淋巴結轉移、分化程度低的食管鱗癌組織中p－EGFR 蛋白陽性表達率明顯增高，提示EGFR 的磷酸化狀態水平的高低可能與食管鱗癌的發生、發展關系密切，表明其可能成為判定食管鱗癌惡性程度的分子標志，但其確切的分子機制尚需要進一步探討。

眾所周知，大多數腫瘤并非由單一信號轉導通路所支配，因此，多靶點治療可能為腫瘤患者帶來新的福音。EGFR 調控腫瘤細胞的增殖、存活和凋亡的過程主要依賴以下3 條信號途徑:①Ras/Raf/MAPK 信號途徑。②PI3K/Akt 信號途徑。③STAT信號途徑。其中PI3K/Akt 信號途徑占有重要的地位。Akt 的磷酸化狀態水平的高低與腫瘤(急性淋巴細胞性白血病［13］、腎癌［14］和前列腺癌［15］)的惡性程度密切相關。因此，作者也分析了食管鱗癌組織中p－Akt 蛋白的表達情況，結果顯示，食管鱗癌組織中p－Akt 蛋白表達的陽性率高于癌旁正常食管黏膜組織;進一步分析發現其與食管鱗癌患者臨床病理學參數之間的關系與p－EGFR 蛋白具有一致性。此外，作者還發現二者在食管鱗癌組織中的表達呈正關聯，表明二者有協同作用，共同調控食管鱗癌細胞的增殖和存活。

總之，作者的研究結果表明，食管鱗癌組織中存在p－EGFR 和p－Akt 的高表達，其高表達與食管鱗癌的分化程度和淋巴結轉移密切相關，并且在食管鱗癌中其表達呈正相關，因而聯合檢測食管鱗癌中p－EGFR 和p－Akt 的水平對食管鱗癌惡性程度的預測具有一定價值。

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