腫瘤相關抗原組合在腫瘤診斷中的價值*

許林平，張瑞芳，王 鵬，張建營

1)鄭州大學附屬腫瘤醫院;河南省腫瘤醫院科研外事辦 鄭州450008 2)新鄉醫學院公共衛生學院實驗室管理辦公室 新鄉453003 3)鄭州大學公共衛生學院流行病學教研室;河南省腫瘤流行病學重點實驗室 鄭州450001

眾多研究［1-2］發現腫瘤患者血清中存在各種類型的抗細胞自身抗原的抗體，其中與腫瘤發生有關的抗原被稱為腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen，TAA)。對血清TAA 的檢測可以用于腫瘤的早期診斷，但單一抗原在腫瘤患者中出現的頻率較低，一般在10%～20%，所以僅采用一項TAA 診斷腫瘤價值十分有限，而通過聯合、使用一組“精心篩選”的TAA組合就可克服該缺點［3-4］。不同腫瘤可能需要不同的TAA組合，因此多種TAA 聯合檢測用于腫瘤早期診斷具有可行性和實用性。該研究對不同類型腫瘤患者進行了8種TAA(Koc、p62、IMP1、cyclinE、p16、survivin、c-myc、p53)檢測，并評價檢測結果，探討TAA組合檢測在腫瘤診斷中的價值。

1 材料與方法

1．1 血清標本 304 份不同類型腫瘤患者(98例肺癌、69例食管癌、50例肝癌、46例結直腸癌、41例乳癌)和58 份正常人血清標本由大連市中心醫院檢驗科提供。腫瘤患者血清均采集于首次到大連市中心醫院就診、經組織病理學確診并且沒有接受過任何化療或放療的患者。正常對照血清采集于到該院正常體檢、經查無任何腫瘤相關疾病的健康成年人。

1．2 主要試劑和儀器 8種TAA(Koc、p62、IMP1、cyclinE、p16、survivin、c-myc、p53)由美國德克薩斯州大學生命科學系腫瘤免疫與腫瘤分子流行病學研究室提供;HRP 標記的羊抗人IgG 購自美國Stratagene 公司;四甲基聯苯胺(TMB)、過氧化氫尿素、明膠購自美國Sigma 公司;96 孔酶標板購自美國Gibco 公司;SUNRISE 自動酶標儀購自美國Tecan公司。

1．3 血清中8種TAA 抗體的檢測及TAA 免疫活性驗證 采用ELISA 法［5］測定血清中8種TAA 抗體。8種TAA 分別用包被稀釋液稀釋成0．5 mg/L，包被96 孔酶標板，每孔100 μL，用30 g/L 明膠封閉2 h;加入一抗待測血清(1∶100 稀釋)，以PBS 作為空白對照，每孔100 μL，37℃孵育1 h，PBST 洗板3次;加入HRP 標記的羊抗人IgG 二抗(1∶4 000 稀釋)，每孔100 μL，37℃孵育1 h，洗板3次;加入TMB-過氧化氫尿素顯色液，每孔100 μL，37℃濕盒加熱避光反應至充分顯色，加終止液50 μL;在自動酶標儀上讀取450 nm 處的OD 值。選擇4個正常對照和2個腫瘤患者血清標本用于批間可靠性的判斷。結果判定:每份樣品血清做2 孔，取平均值為最后結果。設空白孔調零。以58例正常人血清OD值的平均值加2個標準差為判斷臨界值，高于此值為陽性，低于此值為陰性。將ELISA 陽性反應的血清標本進一步用Western blot 技術驗證其對TAA 的免疫活性［6］，操作按照試劑盒說明書進行。

1．4 統計學處理 采用SPSS 17．0 進行統計分析。采用χ2檢驗或確切概率法對不同組間TAA 陽性率進行比較，檢驗水準α=0．05。

2 結果

2．1 單一TAA 檢測結果 見表1。腫瘤患者血清中8種TAA 陽性率普遍偏低，最高為肝癌中的cyclinE，陽性率達34．0%;但均高于正常人。

表1 8種TAA 抗體檢測結果 陽性數(%)

2．2 不同TAA組合檢測結果 以單一TAA 抗體陽性率最高的TAA 為組合檢測的起點，以每增加一種TAA 要保證能最大程度地提高檢測靈敏度為原則，對不同TAA組合檢測進行了分析，見表2。從表2 可以看出，隨TAA組合數目的增加直至最終的8種抗原聯合，無論哪種腫瘤，陽性率均逐步增加。

2．3 不同TAA組合檢測的診斷價值 不同TAA組合診斷價值見表3、表4。結果顯示，隨著TAA組合種類的增加直至最終的8種TAA組合，對腫瘤的合計診斷靈敏度(Se)從11．5%逐步提高至63．5%，特異度(Sp)從100．0%降至86．2%。不同類型腫瘤診斷的約登指數從一種TAA 的0．049～0．180提高到8種TAA組合的0．423～0．522。預測值也隨TAA組合的變化而變化，如8種TAA組合時，不同類型腫瘤診斷的陽性預測值(PPV)為74．2%～88．7%，陰性預測值(NPV)則為58．8%～75．8%。

表2 不同TAA組合檢測結果 陽性數(%)

表3 不同TAA組合診斷價值的評價

表4 8種TAA組合的診斷價值

3 討論

腫瘤發生的多因素、多步驟分子機制為生物標志物用于腫瘤的早期診斷提供了理論支持，但眾多研究表明，沒有任何單一標志物可以完全識別和區分腫瘤患者和正常人，因此，多個標志物的組合就可能成為腫瘤早期診斷的一種有效方法。腫瘤患者血清中存在有多種抗TAA 的自身抗體，可作為腫瘤發生過程中識別異常或失調細胞機制的早期標志［7］。近十余年來，TAA 作為監測腫瘤發生的早期生物學標志已經得到廣泛和深入的研究，尤其多種TAA 的組合在腫瘤診斷中的價值更大［8-10］。

該研究對304 份不同類型腫瘤患者血清中的8種TAA 進行了檢測及診斷效能分析，結果顯示，單一TAA 對腫瘤的診斷靈敏度普遍較低，從4．9%～18．0%，8種TAA組合對腫瘤的診斷靈敏度升高至56．1%～66．0%;8種TAA組合診斷的陽性似然比達4．60，陰性似然比為0．42，PPV 達96．0%，NPV 達31．1%，說明8種TAA組合檢測腫瘤的臨床診斷價值較高。結果進一步驗證了“精心挑選的多種TAA組合能夠大大提高腫瘤診斷的靈敏度”這一觀點。

目前有關TAA組合在臨床上的實用性研究仍處于起步階段，在TAA組合廣泛應用于診斷腫瘤、監測腫瘤進展、指導腫瘤治療等方面之前，定義TAA 系統的最優組合、最大限度地提高組合的靈敏度和特異度至關重要。另外，不同腫瘤可能需要不同的TAA組合，以達到早期腫瘤免疫診斷所需要的敏感度和特異度，從而使多種TAA組合檢測并用于腫瘤早期診斷具有可行性和實用性。上述問題均需進一步研究探討。

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