沈陽市2013年副溶血弧菌臨床分離株的血清分型研究

劉 娜 董 雪 李繼耀 張國斌 高 丹 李 欣

沈陽市疾病預防控制中心，遼寧沈陽 110031

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）屬于弧菌科弧菌屬的細菌，其作為嗜鹽細菌屬于革蘭陰性菌的一種，并且與哈氏弧菌、霍亂弧菌和創傷弧菌屬于同一種屬。VP 在海產品（如海底泥沙、海水、浮游生物和魚貝類等）和腌制食品中廣泛存在。腹瀉、頭痛、嘔吐、惡心、腹部痙攣和低熱等急性胃腸炎的癥狀[1]皆可由于直接或間接食用被VP 污染的食品而引起。即使人體自身免疫系統可以對大部分因VP 引起的胃腸炎起到抑制作用，但仍然可以對肝病患者和免疫紊亂的群體造成生命威脅。副溶血弧菌不但能夠引起胃腸炎，還能導致傷口感染以及敗血癥[2]。

在世界上的所有沿海國家中發生的食源性中毒事件中由副溶血弧菌引起的占到一半以上，包括美國、日本、東南亞等沿海國家均有報道。副溶血弧菌是導致中國沿海地區居民夏、秋季食物中毒和急性腹瀉的主要原因。副溶血弧菌是以血清型為主要分類基礎的，并由菌體的抗原(O)和莢膜(K)的抗原特性所決定。副溶血弧菌的血清分型是利用O 抗原和K 抗原的組合（包括11種不同的O 抗原和65 種不同的K 抗原）來進行分類的，針對沈陽地區副溶血弧菌血清分型資料不全面的現狀，該研究對沈陽市2013年5—9月食源性疾病病例監測哨點醫院副溶血弧菌臨床菌株進行血清學分型，為該地區預防副溶血弧菌感染和流行病學調查提供全面的科學依據，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

副溶血弧菌臨床菌株分離自食源性疾病病例監測哨點醫院臨床病例，2013年5月—9月共采集250 份樣本，分離得到67株副溶血弧菌，采集分離時間為7—10月份。

1.2 菌株的分離培養

菌株的分離培養使用TCBS 培養基、營養瓊脂、三糖鐵瓊脂，其中營養瓊脂和三糖鐵瓊脂分別加入3% NaCl。將采集的糞便標本接種于37℃TCBS 瓊脂中，培養18～24 h，將TCBS 瓊脂上(不分解蔗糖)的透明菌落，接種于37℃三糖鐵瓊脂，同樣培養18～24 h，K/A，不產硫化氫者做O-F 試驗、氧化酶試驗和耐鹽生長試驗。發酵型、氧化酶陽性，0%NaCl 和10%NaCl 不生長、3%NaCl 和7% NaCl 生長者為副溶血弧菌疑似菌落，做系統生化鑒定。

表1 2013年食源性疾病監測病例副溶血弧菌分離株API20NE 鑒定結果

1.3 生化反應和血清分型

生化反應用法國bioMerieux 生產的API20NE 生化試劑條進行鑒定，按說明書操作。

血清分型用溶血性弧菌的血清分型診斷血清(Denka Seiken,Japan),該血清含O1～O11 共11 個O 抗原診斷血清，65 個K 抗原診斷血清。方法為取一定量細菌于3﹪NaCl 鹽水中，121℃滅菌30 min，離心(4 000 r/min,10 min），棄上清，用生理鹽水洗滌3 次。取菌體，進行O 抗原血清凝集試驗。K 抗原鑒定：直接取濃菌懸液與多價抗K 血清按適當比例混合，出現凝集反應時再用單個抗血清進行檢測。用生理鹽水作為對照。

2 結果

2.1 分離副溶血性孤菌菌株的生物學性狀

分離的副溶血性弧菌67 株，均在TCBS 平板上呈綠色、中,心較深、濕潤、形態稍凸起。氧化酶陽性。在3%Nacl 雙糖鐵上－/＋，H2S－，動力+，耐鹽性試驗：0%、10%Nacl 胨水中不生長，3%、7%Nacl 胨水中生長良好，挑取純培養物用API20NE 生化試劑條鑒定，結果見表1。

2.2 血清分群情況

分離的67 株副溶血性弧菌可分為5 個O 血清群，其中O3群占58.21%(39/67)、O4 群占35.82%(24/67)、O1 群占2.99%(2/67)、O2 群占1.49%(1/67)、O10 群占1.49﹪(1/67)，如圖1所示。

圖1 2013年食源性疾病監測病例副溶血弧菌分離株血清分群

分離的67 株副溶血弧菌有77.61%(52/67)可以同時被O:K抗血清凝集，主要的血清型是O3:K6，占32.84%(22/67)，其次是O4:K68 和O4:K8，分別占13.43%(9/67)和8.96%(6/67)，約22.39%(15/67)的菌株可與O 抗血清凝集但不能與K 抗血清凝集，分別為O3:KUT 占11.94%(8/67)和O4:KUT 占10.45%(7/67)，見表2。

表2 2013年食源性疾病監測病例副溶血弧菌分離株血清分型結果

3 討論

副溶血弧菌擁有極為復雜的抗原構造，是沿海地區引起食物中毒和急性腹瀉的主要致病菌，探究副溶血弧菌臨床血清分型的分布情況，對該病的預防控制具有重要的意義。研究顯示，2013年食源性疾病監測臨床病例副溶血弧菌分離株67 株，共分為16 種不同的血清型，其中菌株數＞5 的血清型有3 種，分別為O3:K6、O4:K68 和O4:K8，由此也說明這幾種血清型為沈陽地區副溶血弧菌比較常見的血清型。其中最主流的血清型為O3:K6，所占比例為32.84﹪，這與國內外的相關報道是一致的[3-6]。其次為O4:K68，所占比例為13.43﹪，這與報道中除O3:K6 外O4:K8為較為常見的血清型稍有不同[7-8],國外有報道認為，O4:K68 血清型可能是由O3:K6 通過其O 抗原和K 抗原的突變遺傳進化而來[9]。日本曾近連續12年調查食源性副溶血弧菌的血清型，發現每年最主流的血清型別都有很大的不同[10]。2005年沈陽地區引起食物中毒的副溶血弧菌血清型主要以O3 群和O1 群為主[11]，通過對2013年沈陽市食源性疾病監測臨床分離株血清型的鑒定，目前沈陽市副溶血弧菌血清型主要以O3 和O4 為主，同時在分離株中發現3 株新血清型，4 株K 混合多價凝集但單價不能定型，說明副溶血弧菌血清型具有多樣性。該研究缺少毒力基因方面的檢測，結合血清分型共同分析，以了解分離株的毒力基因特征，以及與血清型的內在聯系，有待今后進一步考察。

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