可溶性B7-H4在膀胱癌診斷中的價值

黃衛，陳湘

（中南大學湘雅醫院泌尿外科，湖南 長沙 410008）

可溶性B7-H4在膀胱癌診斷中的價值

黃衛，陳湘

（中南大學湘雅醫院泌尿外科，湖南 長沙 410008）

目的探討可溶性B7-H4（sB7-H4）在膀胱癌中的診斷價值。方法應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)夾心法檢測117例膀胱癌患者與120例正常人血清sB7-H4水平，采用ELISA法檢測膀胱癌抗原（UBC）和尿液細胞角蛋白19-片段（CYFRA21-1），利用受試者工作特性曲線（ROC）比較分析sB7-H4作為膀胱癌血清標志物的診斷價值。結果膀胱癌患者血清sB7-H4水平（48.73±14.69）ng/ml明顯高于正常人（29.52±17.84）ng/ml，差異有統計學意義（P＜0.01）。sB7-H4在膀胱癌診斷中的靈敏性（87.18%）和準確性（78.48%）均高于尿UBC及CYFRA21-1，特異性（74.17%）低于CYFRA21-1及UBC。結論sB7-H4在膀胱癌診斷中具有良好的臨床應用前景，聯合檢測sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可提高膀胱癌的診斷率。

膀胱癌；B7-H4；ELISA；受試者工作特性曲線

膀胱癌大多為移行細胞癌。其術后復發率較高，并具有由淺表向深部浸潤性發展的特點。膀胱鏡是對膀胱癌進行診斷和隨訪的主要手段，但因其為侵入性檢查，患者常因畏懼頻繁復檢而失去早期診斷治療的機會。因此，尋找無創、簡便的腫瘤標志物已成為近年研究的熱點。B7-H4是最新發現的B7家族成員，它在抗原特異性的免疫反應中起到非常重要的調節作用[1]。利用免疫組織化學染色方法，業已發現B7-H4在各種腫瘤組織中均有過度表達，如結腸癌、肝癌、胰腺癌等。B7-H4可表達于腫瘤細胞的胞膜上和胞漿內，還能以可溶性形式存在于血清中，且有實驗證明了宮頸癌和食管癌患者血清中可溶性B7-H4（soluble B7-H4,sB7-H4）水平的增高[2-3]。本研究用雙抗體ELISA夾心法，定量檢測膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，比較分析sB7-H4與尿膀胱癌抗原（urinary bladder cancer antigen，UBC）、尿液細胞角蛋白19-片段（cytokeratin19fragment，CYFRA21-1）在靈敏性、特異性及準確度上的差異，探討sB7-H4在膀胱癌診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年1月-2013年12月湘雅醫院泌尿外科住院117例膀胱癌患者。均經臨床診斷和病理診斷確診，年齡32～74歲。正常人120例，均為經本院體檢健康的志愿者，年齡22～71歲。

1.2 標本留取

所有受試者均于清晨空腹抽靜脈血6 ml，加入試管，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，留待測定sB7-H4，置入-20℃冰箱保存。

1.3 sB7-H4測定

采用雙抗體夾心ELISA法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，試劑盒購于美國R&D公司[4]。

1.4 尿UBC和CYFRA21-1檢測

所有研究對象在行膀胱鏡或手術前留取晨尿，1000 g離心15min后，取上清液置入20℃冰箱保存，用作UBC和CYFRA21-1檢測。UBC采用瑞典生物技術有限公司試劑盒，ELISA法檢測，其中單克隆抗體對細胞角蛋白18（cytokeratin18，CKl8）有特異性，同時對CK8有交叉反應。CYFRA21-1采用法國CIS國際生物公司試劑盒，放射免疫技術檢測，其測定為通過識別2株鼠單克隆抗體BM19-21、KS19-1的雙抗體夾心法。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，數值用均數±標準差（±s）表示，組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 膀胱癌患者和正常人血清sB7-H4、尿液UBC和CYFRA21-1水平

與正常人比較，膀胱癌患者血清中sB7-H4水平均顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.0l）（見表1）。該結果提示，sB7-H4在膀胱癌早期診斷中具有潛在應用的價值。

表1 膀胱癌患者和正常人3種血清標記物水平比較

2.2 sB7-H4與UBC、CYFRA21-1相關性分析

將117例膀胱癌患者血清sB7-H4水平分別與UBC、CAl5-3水平進行單因素直線相關分析，結果顯示，sB7-H4與UBC、CYFRA21-1均呈正相關（r分別為0.521和0.531，P＜0.0l）。

2.3 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲線下面積比較

利用受試者工作特性曲線（ROC）測得sB7-H4對應產生的曲線下面積（AUC）為0.837（95%可信區間為0.764～0.928），大于UBC的0.713（95%可信區間為0.645～0.824）和CYFRA21-1的0.782（95%可信區間為0.739～0.892）（見附圖）。

附圖 早期膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲線下面積比較

表2 sB7-H4、UBC、CYFRA21-1診斷效率比較%

2.4 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1診斷效率比較

通過ROC曲線分析，sB7-H4的最佳診斷值為35.32 ng/ml，它在膀胱癌診斷中的靈敏性（87.18%）和準確性（78.48%）均高于UBC及CYFRA21-1，特異性（74.17%）低于UBC及CYFRA21-1，UBC和CYFRA21-1單項檢測時的陽性率都比較低，而聯合檢測sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可將膀胱癌的診斷率提高至92%。見表2。

3 討論

由于膀胱癌的早期癥狀以血尿為主，但引起血尿的病因有很多，如泌尿系統感染、結石等，往往容易漏診。尿細胞學檢查可作為血尿的初步篩查，但其檢出率較低，不易于鑒別出分化良好的腫瘤細胞，亦可導致漏診。雖然膀胱鏡檢查可作為檢測膀胱癌的金標準，但費用高，且檢查過程往往引起患者不適，不適合作為篩查使用。所以臨床上急切需要尋找敏感性高、特異性好的膀胱癌腫瘤標志物。目前已知血清或尿液中的某些腫瘤標志物，如CYFRA21-1、UBC等在復發轉移性膀胱癌的診斷以及療效監測方面具有一定應用價值[7]。但是否也能用于膀胱癌的早期診斷或篩查目前尚不明確。

目前，國內有關B7-H4與腫瘤關系的研究越來越多，已證實大多數腫瘤組織均高表達B7-H4，如前列腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌等等[6-8]，幾乎涵蓋腫瘤的各個領域。眾多研究表明，B7-H4在腫瘤的發生、發展及預后有重要作用，可為腫瘤的診斷和治療提供一種新的靶位點，具有良好的臨床應用前景。然而，目前對B7-H4的研究大多采用Western blot和免疫組織化學染色的方法，其操作繁鎖，只能定性研究B7-H4在腫瘤組織中表達情況，很難比較手術前后患者B7-H4含量的變化。本研究采用ELISA法定量檢測117例膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，同時與膀胱癌常用的輔助診斷指標UBC、CYFRA21-1進行比較，分析3者在靈敏性、特異性及準確性上的差異，以探討sB7-H4在膀胱癌診斷中的價值。結果發現，膀胱癌患者血清sB7-H4水平明顯高于正常人，差異有統計學意義（P＜0.01）。直線相關分析顯示，sB7-H4與UBC、CYFRA21-1均呈正相關，提示sB7-H4初步具備膀胱癌血清標志物的潛質。利用受試者工作特性曲線（ROC）測得sB7-H4對應產生的曲線下面積（AUC）為0.868，大于UBC的0.745和CA125的0.796。該結果說明雖然3者在膀胱癌的診斷中均有一定的準確性，但sB7-H4的準確性要稍高于CA125和UBC。sB7-H4的靈敏性、準確性分別為87.18%和78.48%，明顯高于UBC和CYFRA21-1，而特異性僅為74.17%，低于UBC的85.83%和CYFRA21-1的92.5%，提示sB7-H4可能是一個廣譜的腫瘤標志物。盡管3種血清標志物均具有一定的診斷價值，但sB7-H4的診斷效率要高于UBC和CYFRA21-1。UBC和CYFRA21-1單項檢測時的陽性率都比較低，而聯合檢測sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可將膀胱癌的診斷率提高至94.87%。因為腫瘤的發生是多基因、多步驟改變的結果，也是多靶點、多環節的調控過程，聯合檢測正成為該領域一個重要的探索方向，能彌補單項檢測的不足，可明顯提高膀胱癌的診斷率。

綜上所述，本研究表明sB7-H4在膀胱癌診斷中具有良好的臨床應用前景，但尚需做以下的基礎研究進一步證實：①目前對于B7-H4的受體及其信號轉導途徑尚未明確，尚不清楚sB7-H4來源于何處，以及sB7-H4能在多大程度上代表體內總的B7-H4含量；②對B7-H4分子表達的調控機制有待進一步明確。

[1]GILBERT SM,WOOD DP,DUNN RL,et al.Measuring healthrelated quality of life outcomes in bladder cancer patients using the Bladder Cancer Index(BCI)[J].Cancer,2007,109(9):1756-1762.

[2]CHEN L,SUN J,WU H,et al.B7-H4 expression associates with cancer progression and predicts patient's survival in human esophageal squamous cell carcinoma[J].Cancer Immunology,Immunotherapy,2011,60(7):1047-1055.

[3]GALAZKA K,OP?AWSKI M,WINDORBSKA W,et al.The immunohistochemical analysis of antigens such as RCAS1 and B7H4 in the cervical cancer nest and within the fibroblasts and macrophages infiltrating the cancer microenvironment[J].American Journal of Reproductive Immunology,2012,68(1):85-93.

[4]胡國艷,鄭淑華,劉偉,等.檢測可溶性B7-H4 ELISA夾心法的建立[J].細胞與分子免疫學雜志,2008,24(8):831-833.

[5]王興亮,宋明山.CYFRA21-1在膀胱癌患者中的表達研究[J].中國實用醫藥,2012,7(29):9-1.

[6]MIYATAKE T,TRINGLER B,LIU W,et al.B7-H4(DD-O110) is overexpressed in high risk uterine endometrioid adenocarcinomas and inversely correlated with tumor T-cell infiltration[J].Gynecologic Oncology,2007,106(1):119-127.

[7]LOOS M,GIESE NA,KLEEFF J,et al.Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer[J].Cancer letters,2008,268(1):98-109.

[8]ROTH TJ,SHEININ Y,LOHSE CM,et al.B7-H3 ligand expression by prostate cancer:a novel marker of prognosis and po tential target for therapy[J].Cancer Research,2007,67(16):7893-7900.

（張蕾 編輯）

Diagnostic value of soluble B7-H4 in bladder cancer

Wei HUANG,Xiang CHEN
(Department of Urology,Xiangya Hospital,Central South University, Changsha,Hunan 410008,P.R.China)

【Objective】To discuss the diagnostic value of soluble B7-H4(sB7-H4)in bladder cancer.【Methods】Using sandwich ELISA method,the serum level of soluble B7-H4 was detected in 117 cases of bladder cancer patients and 120 cases of normal people.ELISA method was used to determine the urine levels of urinary bladder cancer antigen(UBC)and cytokeratin 19 fragment(CYFRA21-1),then the diagnosis value of sB7-H4 in bladder cancer was analyzed with ROC(receiver operating characteristic)curve.【Results】The serum level of soluble B7-H4 in the bladder cancer patients[(48.73±14.69)ng/ml]was significantly higher than that in the normal people[(29.52±17.84)ng/ml],there was a significant difference between them (P＜0.01).The sensitivity(87.18%)and accuracy(78.48%)of sB7-H4 in bladder cancer were higher than those of UBC and CYFRA21-1,but the specificity(74.17%)was lower than that of UBC and CYFRA21-1.【Conclusions】Soluble B7-H4 has good prospects in clinical application in diagnosing bladder cancer.Detection of serum level of sB7-H4 together with UBC and CYFRA21-1 can raise the positive diagnostic rate of bladder cancer.

bladder cancer；B7-H4；ELISA；receiver operating characteristic(ROC)curve

R737.14

B

1005-8982（2015）30-0065-03

2015-04-08