均勻設計法優選金鎖二仙口服液的提取工藝

韓曉麗，劉光斌，毛和平，謝六生，任遠

（1.嘉峪關市酒鋼醫院，甘肅735100；2.甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000）

均勻設計法優選金鎖二仙口服液的提取工藝

韓曉麗1，劉光斌1，毛和平1，謝六生1，任遠2

（1.嘉峪關市酒鋼醫院，甘肅735100；2.甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000）

目的探討優選金鎖二仙口服液的提取工藝。方法采用均勻設計法安排試驗，以加聚乙二醇400（PEG400）的濃度、提取時間、溶劑用量、提取次數4項指標作為考察因素，以總黃酮提取量作為考察指標，優化提取工藝。結果最佳提取工藝：以PEG400濃度為2.8%的水溶液提取，提取60 min，提取2次，每次7倍量。結論提取工藝合理、可行，適合金鎖二仙口服液生產的需要。

二仙湯/治療應用；口服液；黃酮類/分離和提純；中藥制藥工藝；均勻設計

金鎖二仙口服液是根據酒鋼醫院經驗方[1-3]自行研制的中藥制劑。由金櫻子、鎖陽、淫羊藿、仙茅等藥材組成，具有補腎固精之功效。臨床用于陽痿、早泄、射精無力、性欲低下、腰膝酸軟或酸痛、疲乏困倦等疾病的治療。為了保證該制劑內在質量和臨床療效穩定性，本文采用均勻設計優選7味藥材的提取工藝，從而綜合考慮選擇金鎖二仙口服液的生產工藝。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器756紫外可見分光光度計（上海奧譜勒儀器有限公司），AUW120D型電子分析天平（日本島津，1/ 10萬），超純水儀（杭州天創凈水設備有限公司）。

1.1.2 試藥蘆丁對照品[批號：100080-200707，供紫外線（UV）法含量測定用，含量為92.5%]，購自中國藥品生物制品檢定所。水為超純水，其他試劑均為分析純。藥材均購自甘肅省酒泉市培豐中藥材生態種植加工公司，經嘉峪關藥品檢驗所中藥室鑒定符合2010版《中華人民共和國藥典》藥材項下標準規定。

1.2 方法

1.2.1 方法學驗證

1.2.1.1 測定波長的選擇用蘆丁對照品溶液（0.104 mg/mL），隨行試劑為空白，在波長200～700 nm下掃描。

1.2.1.2 標準曲線的制備取蘆丁對照品約10.0 mg，精密稱定，適量乙醇溶解后置于100 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。分別精密量取上述溶液0、1、2、4、6、8、10 mL置于10 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。以第1個樣品為空白，于359 nm處測定各對照液吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標回歸分析，得回歸方程。

1.2.1.3 精密度試驗取最低濃度標準液（10.4 μg/mL）依法測定其吸收度（n=5），計算RSD。

1.2.1.4 供試品溶液的制備取5.0 g聚酰胺裝柱（長30.0 cm，內徑1.8 cm），精密稱取供試品0.2 g，干法上柱，用5 mL純化水潤濕聚酰胺柱上部，3 h后再加純化水5 mL，使柱底部聚酰胺完全潤濕，過夜。先用純化水洗至洗脫液無色，再用50mL乙醇以1mL/min速度洗脫，洗脫液收至50 mL容量瓶中，乙醇定容，備用。

1.2.1.5 重復性試驗精密稱取同一樣品6份，每份0.2g，依法獨立測定吸收度，計算RSD。

1.2.1.6 加樣回收率試驗精密稱取同一樣品6份，每份0.2 g，精密加入蘆丁對照品適量（已知含量的80%、100%、120%），照供試品溶液制備方法制備樣品溶液，測定，計算平均回收率、RSD。

1.2.1.7 樣品溶液穩定性試驗取同一樣品溶液，分別在0、1、2、3、4 h測定其吸收度，計算RSD。

1.2.1.8 樣品含量測定分別取樣品按1.2.1.4項制備樣品溶液，測定吸光度，計算樣品總黃酮含量。

1.2.2 提取工藝優選

1.2.2.1 藥材吸水率測定測定藥材吸水率，以確定提取用水的最低水平值。按處方比例稱取藥材200 g，加水8倍浸泡，每隔30 min觀察1次浸透情況，直至藥材浸至透心，濾出未被吸收的水液，稱量濕藥材，按公式得吸水率：

1.2.2.2 因素及水平選擇以影響提取結果的聚乙二醇400（PEG400）濃度（A）、溶劑用量（B）、提取時間（C）、提取次數（D）等為主要參數，根據吸水率結果及藥材中成分性質，設定因素水平，見表1。

表1 各因素水平情況

1.3 數據處理[4-5]應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，以Backword方式進行多元線性回歸。P＜0.05為差異有統計學意義。

1.2.3 工藝條件驗證通過重復試驗將得到的最佳工藝條件進行驗證，采用試驗確定的最佳工藝評價體系考察工藝的穩定性。

2 結果

2.1 方法學驗證

2.1.1 測定波長的選擇結果供試品溶液與對照品溶液均在359 nm波長處有最大吸收，與文獻[6]報道的360 nm相近，確定測定波長為359 nm。

2.1.2 標準曲線的制備回歸方程A=12.953 0C+0.0058，R2=0.999 7（n=6），線性范圍10.4～104.0 μg/mL。

2.1.3 精密度試驗RSD為0.81%。

2.1.4 重復性試驗RSD為1.68%。

2.1.5 加樣回收率試驗平均回收率為100.32%，RSD為1.34%。

2.1.6 樣品溶液穩定性試驗4 h內RSD為1.61%。

2.2 提取工藝優選

2.2.1 藥材吸水率測定計算出本處方藥材吸水率為220%。

2.2.2 試驗安排及結果采用均勻設計法[7]，用U5（54）表安排試驗，試驗安排及結果見表2。以總黃酮提取量為因變量Y，PEG400濃度（A）、總提取時間（B）、溶劑總量（C）、提取次數（D）為自變量，得回歸方程為Y=12.289+ 5.532C+1.276A（F=345.2，P＜0.05），由回歸方程可知，PEG400濃度、溶劑總量對試驗結果有顯著影響，總提取時間、提取次數對結果影響無顯著性。金鎖二仙口服液的提取工藝：取處方量藥材，用PEG400濃度為2.8%的水溶液提取，每次用7倍量溶劑，提取60 min，共提取2次，合并提取液，即得。

表2 實驗安排及結果

2.3 工藝條件驗證優化工藝條件總黃酮提取量高于優化試驗時的任何一組，而且結果比較接近，提示所得工藝條件不但可行而且比較穩定。見表3。

表3 工藝條件驗證表

3 討論

處方中金櫻子[8]、鎖陽[9]、淫羊藿[10]、仙茅[11]、巴戟天[12]、當歸、甘草7味藥材中的多糖類在水中溶解度較大，苷類、黃酮類等成分在水中也有一定的溶解度，因此可用大量水進行回流提取，但部分黃酮類在水中溶解度較小，該部分成分在濃縮時隨水的蒸發會以沉淀形式析出，采用藥用級PEG400作為潛溶劑與水組成混合溶液提取，既可保證多糖的提取，又可防止水中溶解度較小成分析出。

由于混合溶劑的溶解范圍很廣，可將藥材中的果膠、淀粉、蛋白質等大分子雜質隨黃酮及其苷類同時被提取出來，因此以出膏率作為評價指標不太嚴謹。鑒于本處方藥材中黃酮及其苷類為主要的有效成分，因此選用總黃酮作為指標評價提取工藝較為科學。

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Optimization of extraction technique for Jinsuoerxian oral liquid by uniform design

Han Xiaoli1，Liu Guangbin1，Mao Heping1，Xie Liusheng1，Ren Yuan2
（1.Jiayuguan Jiugang Hospital，Gansu 735100，China；2.Gansu Chinese Traditional Medical College，Lanzhou，Gansu 730000，China）

Objective To optimize extraction technique for Jinsuoerxian oral liquid.Methods It was adopted uniform design method and 4 pramaters such as the PEG400 concentration，extraction time，solvent dosage and extraction fredquency as the survey factors，as well as general flavone extraction dosage as the survey pramater to optimize extraction technique.Results The extraction technique of 2.8%PEG400 concentrations was optimum，extracting 60 min，two times，each time with an amount of 7 times.Conclusion sThe extraction technique is reasonable and feasibile，which meets the requirements of industrial production of Jinsuoerxian oral liquid.

ERXIAN decoction/therapeutic use；Peroral liquids；Flavones/isolation&purification；Pharmaceutical technology；Uniform design

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.03.006

A

1009-5519（2015）03-0335-02

2014-09-02）

韓曉麗（1968-），女，甘肅嘉峪關人，主管藥師，主要從事醫院制劑藥品工作；E-mail：jgyylgb@sina.com。