脫落酸對人SACC-2細胞增殖作用的實驗研究

谷愛玲何巍457000河南省濮陽市人民醫院口腔科473058河南省鄭州大學第一附屬醫院口腔頜面外科

脫落酸對人SACC-2細胞增殖作用的實驗研究

谷愛玲1何巍2
457000河南省濮陽市人民醫院口腔科1
473058河南省鄭州大學第一附屬醫院口腔頜面外科2

目的：觀察天然植物激素ABA對SACC-2癌細胞抑制增殖的影響。方法：從細胞增殖活力、DNA合成和周期分布等方面研究ABA對SACC-2細胞增殖的影響。結果：不同濃度的ABA對SACC-2細胞增殖的影響不同。結論：ABA在濃度(≥1×10-1mmol/L)下有較強抑制增殖作用。

脫落酸；抑制；人SACC-2細胞；增殖

涎腺腺樣囊性癌有惡性程度高、易侵神經及遠處轉移等特性，探索新療法成為必要[1]。國內外文獻報道脫落酸有抗腫瘤作用[2]。本研究應用ABA作用SACC-2細胞后，觀察細胞形態、計算生長曲線和細胞增殖抑制率的改變，以探討ABA的作用機制，為腺樣囊性癌的防治提供理論依據。

資料與方法

細胞株及試劑：人SACC-2細胞株(四川大學口腔醫學院)。98％ ABA(Aldrich公司，美國)。

方法：①細胞形態學觀察：將細胞分為對照組、ABA組，培養24h、48h后，觀察各組細胞的數量、形態、染色質和胞漿的變化。②MTT法檢測ABA對細胞抑制率：空白對照組、溶劑對照組、實驗組，同樣條件分別培養6h、12h、24h、48h、72h后，計算實驗結果。③流式細胞術檢測細胞周期分布和增殖指數：采用15mW氬離子激發器，應用Expo 32ADC進行免疫熒光數據分析，計算S期分數(SPF)和細胞增殖指數(PI)。

統計學處理：采用SPSS 13.0進行數據統計分析，采用(x±s)表示，采用χ2檢驗分析比較，以α=0.05為顯著性檢驗水準。

結果

ABA對SACC-2細胞作用的形態學觀察：在倒置相差顯微鏡下，對照組SACC-2細胞貼壁生長良好，細胞單層生長，形態為扁平的多角形，胞體較大，核分裂相多，胞質飽滿，中央有細胞核，細胞具有連接成片的能力，生長迅速。實驗組細胞生長明顯減慢、脫落、懸浮培養液中，貼壁細胞變圓、縮小、連接松解，細胞堆集減少，呈散在，胞漿顆粒增多，核顏色加深，用藥48h、72h后，生長停滯，脫落明顯，細胞皺縮變小、裂解，胞內顆粒增多，核漿難分清。

ABA對SACC-2細胞生長的影響：不同濃度ABA分別為10-5mmol/L、10-4mmol/L、10-3mmol/L、10-2mmol/L、10-1mmol/L，分別作用6、12、24、48、72h后，利用MTT法測定了對SACC-2細胞生長的影響。隨著劑量的增加，細胞生長抑制率上升，與對照組相比，差異有統計學意義(P＜0.05)，存在劑量依賴關系，即呈劑量-效應關系，見圖1。隨時間延長，細胞生長抑制率上升，有時間依賴關系，即呈時間-效應關系，見圖2。

圖1 不同濃度ABA對SACC-2細胞生長抑制作用

圖2 不同時間、不同濃度ABA對SACC-2細胞生長抑制作用

表1 ABA對SACC-2細胞周期的影響(x±s)

流式細胞儀檢測結果：結果顯示，ABA在濃度10-1mmol/L時作用48h后，G0/G1期細胞構成比分別為80.13％和77.23％，G2/M期分別為6.47％和7.64％，而對照組G0/G1期僅68.19％，G2/M期達5.51％，可見實驗組G0/G1期細胞構成比明顯高于對照組，G2/M期明顯低于對照組(P＜0.05)，見表1，說明ABA作用后延長了G0/G1期，縮短了S期和G2/M期。提示ABA抑制細胞生長的作用可能與G0/G1期阻滯有關，差異具有統計學意義(P＜0.05)。

討論

腫瘤最根本的屬性是細胞的增殖失去控制，這也是我們對于癌癥研究的核心問題[3]。因此抑制腫瘤細胞增殖是篩選抗腫瘤藥物的一個重要指標[4]。本研究顯示，經ABA作用后細胞數目減少、排列疏松，部分細胞脫壁，漂浮于培養液中，生長增殖受到明顯的抑制，且濃度越高，持續時間越長，受到的抑制作用越顯著。MTT比色法是目前廣泛使用檢測抗癌藥物對腫瘤增殖活性的方法[5]。本研究中，實驗組的OD值越小，表明植物激素對腫瘤細胞的抑制作用越明顯。細胞分化的啟動，首先有細胞增殖停止，退出細胞周期。研究表明，G1-S卡點失常進入S期細胞增多是是腫瘤細胞去分化的一個重要標志。本研究明顯降低了腫瘤細胞的PI、S期比率，破壞了DNA復制合成，減少增殖，發揮了抗腫瘤的作用。

總之，高濃度的植物激素ABA對細胞增殖局域較強的抑制作用，具有劑量-效應關系、時間-效應性，其具體作用機制仍需要繼續進行研究。

[1] Barrett AW，Speight PM.Perineural invasion in adenoid cystic carcinoma of the parotid glands：Avalid prognostic indicator[J].Oral Oncol，2009，45(11)：936-940.

[2] Suzuki T，Ezure T，Ishida M.Synergistic effects of some pairsof antioxidants and related agents on mouse leukaemia L5178Y cell growth in-vitro[J].Pharm Pharmacol，1998，50 (10)：1173-1177.

[3] Ma J，Zhong M，Wang ZY.Anti-proliferation effectof genistein on salivary adenoid cystic carcinoma cell line SACC-83 in vitro[J]. Shanghai Kou Qiang Yi Xue，2005，14(1)：55-58.

[4] Dolezal K，Popa I，et al.Preparation and biological activity of 6-benzylaminopurine derivatives in plantsand human cancer cells[J]. BioorgMed Chem，2006，14(3)：875-884.

[5] Morgan DM.Tetrazolium(MTT)assay for cellular viability and activity[J].Methods Mol Biol，2008，79：179-183.

Experiment research of abscisic acid on the proliferation effectof human SACC-2 cells

Gu Ailing1，HeWei2
DepartmentofStomatology，PuyangCity People'sHospitalofHenan Province4570001

Objective：To observe the effectof natural planthormone ABA on the suppress proliferation of SACC-2 cancer cells. Methods：The effectof ABA on the SACC-2 cells proliferationwas studied from cellproliferation activity，DNA synthesisand cycle distribution and otheraspects.Results：The differentconcentrationsof ABA had differenteffectson the SACC-2 cells proliferation. Conclusion：ABA in the concentration(≥1×10-1mmol/L)hasstrongersuppressproliferation effect.

Abscisic acid；Suppress；Human SACC-2 cells；Proliferation

book=6,ebook=8

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.22.2

DepartmentofOraland Maxillofacial Surgery，the FirstAffiliated HospitalofZhengzhou University，Henan Province 4730582