金花茶對衰老大鼠的抗氧化和抗凋亡作用

金花茶對衰老大鼠的抗氧化和抗凋亡作用

盧春毅劉紅楊曦榮曦黃李平1黃振光2

(廣西醫科大學第一附屬醫院老年內分泌科，廣西南寧530022)

摘要〔〕目的探討金花茶對亞急性衰老大鼠抗氧化和抗凋亡的作用。方法擬建立大鼠亞急性衰老模型后，予高、低濃度金花茶灌胃干預。測肝臟和睪丸組織超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量及bax、bcl-2 mRNA表達水平。結果與衰老模型組對比，高、低濃度金花茶組肝臟和睪丸組織SOD含量和bcl-2 mRNA表達顯著升高(P<0.05)，且MDA含量和bax mRNA表達明顯下降(P<0.05)。高、低濃度金花茶組間比較，上述指標有統計學差異(P<0.05)。結結論金花茶可以提高SOD含量和降低MDA含量，通過上調bcl-2和下調bax表達水平，減慢肝臟和睪丸細胞的凋亡，對延緩機體衰老有重要作用。

關鍵詞〔〕金花茶；衰老；凋亡；抗氧化

中圖分類號〔〕R5〔

基金項目：廣西壯族自治區中醫藥管理局自籌經費科研課題(g22c1055)

通訊作者：劉紅(1960-)，女，教授，碩士生導師，主任醫師，主要從事內分泌代謝病研究。

1中醫科2藥劑科

第一作者：盧春毅(1986-)，女，碩士，醫師，主要從事內分泌代謝性疾病研究。

研究證實，茶中總游離氨基酸為80.8 mg/100 g,脯氨酸占總游離氨基酸的38.7%〔1〕；黃酮類物質、茶多酚〔2〕和皂甙的含量分別為8.5%、4.42%和7.0%,維生素C和維生素E的含量分別為90 mg/100 g和520 mg/100 g。金花茶中營養豐富且富含多種延緩衰老作用的成分。本實驗觀察金花茶對大鼠自由基和凋亡因子表達水平的影響。

1材料與方法

1.1實驗儀器和試劑D-半乳糖(博仁生物)；金花茶(廣西桂人堂圓茶：多酚類物質含量極高的金花茶鮮嫩葉精制而成)；丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；DEPC(焦碳酸二乙酯)(美國AMRESCO公司)；DNA Marker(上海生工)；PCR引物(上海生工)；Tag DNA聚合酶(Ptomega公司)；高速低溫離心機(Beckman產品)；紫外分光光度計(上海長明光學電子儀廠)；PCR擴增儀(Gene Amp PCR system)；電泳槽(北京東方特力科貿中心)。

1.2實驗動物雄性SD大鼠(180～220 g)40只，廣西醫科大學動物實驗中心提供，SPF級飼養，普食。

1.3動物分組和處理隨機分成正常對照組、衰老模型組、低濃度金花茶組和高濃度金花茶組，每組10只。衰老模型組和金花茶組采用D-半乳糖連續腹腔注射200 mg·kg-1·d-1制備亞急性衰老動物模型，1次/d,共40 d。衰老模型組造模成功后不再做任何處理。金花茶組大鼠造模成功后，低、高農度組大鼠分別每天用金茶花2、4 g/kg煮水灌胃，1次/d，共40 d。正常對照組大鼠每天灌胃同等劑量的生理鹽水，時間同金花茶組大鼠。所有大鼠最后1次灌胃后全部斷頸處死取肝臟和睪丸組織測衰老指標。

1.4實驗方法按照試劑盒說明書測定肝臟和睪丸組織SOD，MDA。肝臟和睪丸組織bcl-2和bax的RNA檢測：根據GeneBank發表的大鼠基因序列，由上海生工設計并合成引物(見表1)。取肝臟和睪丸組織，用總RNA試劑盒提取組織RNA，依次進行RNA檢測，逆轉錄反應，PCR擴增，擴增條件：95℃ 3 min,95℃ 1 min，58℃(bax)30 s/59℃(bcl-2)30 s,72℃ 1 min,35個循環，72℃ 5 min,4℃終止反應，電泳成象及分析。

1.5統計學方法采用SPSS13.0軟件進行方差分析和q檢驗。

2結果

2.1金花茶對衰老大鼠肝臟和睪丸SOD和MDA含量的影響在肝臟和睪丸組織中，與正常對照組相比，衰老模型組MDA含量均明顯增多(P<0.05),且SOD活性均降低(P<0.05)；與衰

老模型組相比，高、低濃度金花茶組MDA含量均明顯降低，且SOD含量均增高(P均<0.05)，高、低濃度組間均有統計學差異(P<0.05)。此結果說明金花茶能降低衰老機體MDA含量并提高SOD活性，具有抗氧化作用，且高濃度時作用較強。見表2。

2.2金花茶對衰老大鼠肝臟和睪丸bcl-2 bax mRNA表達的影響在肝臟和睪丸組織中，衰老模型組大鼠肝組織中bax表達均增高，bcl-2表達均降低，與正常對照組對比有統計學差異(P均<0.05)；與衰老模型組相比，高、低濃度金花茶組bax表達均明顯降低(P<0.05)，bcl-2表達均明顯增高(P<0.05)，高、低濃度組間有統計學差異(P<0.05)。由此可知金花茶能抑制衰老大鼠肝臟和睪丸組織細胞凋亡，高濃度時抑制作用較強。見表2。

表1RT-PCR引物設計及合成程序

基因引物序列RCP產物長度bax上游:5'CTAGCAAACTGGTGCTCAAGG3'178bp下游:5'GATGGTCACTGTCTGCCATGT3'bcl-2上游:5'GATTGTGGCCTTCTTTGAGTTC3'111bp下游:5'CGGTTCAGGTACTCAGTCATCC3'

組別肝臟MDA SOD睪丸MDA SOD肝臟bcl-2mRNA baxmRNA睪丸bcl-2mRNA baxmRNA正常對照組3.75±0.65357.93±46.062.86±0.24277.94±26.300.821±0.1400.272±0.0220.564±0.0350.183±0.126衰老模型組6.84±0.281)211.68±30.691)6.01±0.451)181.20±19.811)0.296±0.0251)0.865±0.1891)0.189±0.0291)0.608±0.0291)低濃度金花茶組4.99±0.192)265.44±23.482)4.99±0.192)220.98±26.422)0.424±0.0152)0.418±0.0352)0.361±0.0232)0.350±0.0142)高濃度金花茶組5.59±0.382)3)296.57±24.542)3)4.51±0.332)3)253.76±13.472)3)0.502±0.0162)3)0.309±0.0052)3)0.461±0.0102)3)0.440±0.0102)3)

與正常對照組比較：1)P<0.05；與衰老模型組比較：2)P<0.05；與低濃度金花茶組比較：3)P<0.05

3討論

當生物體內氧化與抗氧化系統失衡，抗氧化酶SOD活性降低，過氧化物MDA堆積，直接損害或者通過一系列過氧化鏈式反應引起蛋白質變性和核酸破壞，導致線粒體等廣泛的生物細胞結構破功能受損，促進了細胞的凋亡，引起機體衰老〔3〕。本實驗中,經D-半乳糖腹腔注射，衰老模型組大鼠睪丸和肝臟組織中氧化與抗氧化系統失衡，bcl-2 mRNA表達明顯下降而bax mRNA表達升高，相比正常對照組睪丸和肝細胞凋亡增加。

衰老與性腺的功能退化和性激素水平的降低密切相關〔4〕。睪酮主要由睪丸細胞分泌，并且與睪丸組織SOD活性正相關〔5〕，由于增齡過程中氧化應激的作用和睪丸細胞的不斷凋亡，致使睪丸細胞功能受損減低，可能導致血清睪酮水平的下降使衰老程度加重。此外，肝臟作為性激素代謝的重要器官，自由基損傷及肝細胞凋亡使肝臟代謝睪酮等性激素能力下降〔6〕，未代謝性激素過多殘留可能通過負反饋抑制，導致體內性激素分泌減少加快衰老。

本文結果表明，金花茶一方面可能通過對抗脂質過氧化，平衡機體氧化與抗氧化系統延緩衰老；另一方面可能通過抑制睪丸和肝臟組織細胞凋亡，以提高睪丸和肝臟組織維持機體性激素水平的能力，協調睪丸和肝臟功能，多位點加強機體抗衰老作用。機體的衰老可能與睪丸和肝臟的功能下降失調有關，但其發生機制尚未完全明確，金花茶延緩衰老的作用機制也還需進一步研究探討。

4參考文獻

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3蔡崇岳，黎明，莊仁漢，等.衰老雄性大鼠睪丸組織脂質過氧化與睪酮水平和bcl-2基因表達的研究〔J〕.中華男科學雜志，2007；13(1)：46-9.

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5蔡崇岳，章振保，田生平.衰老雄性大鼠睪丸組織抗氧化酶與血清睪酮水平、凋亡蛋白酶-3基因表達的研究〔J〕.汕頭大學醫學院學報，2006；19(3)：154-7.

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〔2012-12-19修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)