腫瘤患者紅細(xì)胞的血紅蛋白釋放實(shí)驗初步研究

韓麗紅閆 斌高麗君秦良誼秦文斌*

（1 包頭醫(yī)學(xué)院血紅蛋白研究室，內(nèi)蒙古 包頭 014010；2 包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外二科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

腫瘤患者紅細(xì)胞的血紅蛋白釋放實(shí)驗初步研究

韓麗紅1閆 斌2高麗君1秦良誼1秦文斌1*

（1 包頭醫(yī)學(xué)院血紅蛋白研究室，內(nèi)蒙古 包頭 014010；2 包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普外二科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

目的在已建立“血紅蛋白釋放試驗HRT”的基礎(chǔ)上，研究腫瘤患者的HRT情況。方法同時比較研究全血中紅細(xì)胞和從中分離出來紅細(xì)胞的HRT（簡稱“兩種紅細(xì)胞的HRT”），做淀粉-瓊脂糖混合凝膠電泳。第1次電泳后停電一段時間，再進(jìn)行第2次或更多次電泳。觀察紅細(xì)胞中血紅蛋白的釋放情況，同時加入了定量因素。結(jié)果各種腫瘤標(biāo)本都有“兩種紅細(xì)胞的HRT”，梯帶強(qiáng)度可有不同。本次標(biāo)本中，游離紅細(xì)胞梯帶相對最強(qiáng)的是肝癌、胰腺癌、胃癌，最弱的是鼻咽癌、甲狀腺癌、皮膚癌。全血紅細(xì)胞的梯帶強(qiáng)度普遍較弱，變化相對較小。結(jié)論腫瘤患者標(biāo)本中的血漿因素可能影響全血中紅細(xì)胞的梯帶釋放。不同腫瘤其血漿因素可能不一樣，具體機(jī)制有待深入研究。

腫瘤；血紅蛋白釋放試驗/HRT；紅細(xì)胞

2007年，本研究組在研究1例輕型β-地中海貧血病例的紅細(xì)胞電泳過程中偶然發(fā)現(xiàn)，該患者紅細(xì)胞第1次電泳后，比正常人紅細(xì)胞電泳原點(diǎn)殘留有更多的紅色物質(zhì)（加樣量相等）；在停電一段時間后再次電泳，該患者標(biāo)本從原點(diǎn)電泳出來紅色物質(zhì)（后經(jīng)證實(shí)為血紅蛋白）比正常成人的多許多：連續(xù)多次停電再通電后，輕型β-地中海貧血患者紅細(xì)胞釋放多條血紅蛋白區(qū)帶（稱梯狀帶或竹節(jié)帶）。在停電一段時間后再次電泳，該患者標(biāo)本從原點(diǎn)釋放出較多的血紅蛋白，從而開始創(chuàng)建血紅蛋白釋放試驗（HRT）[1]。在這一現(xiàn)象的啟示之下，我們開始研究其他臨床標(biāo)本的血紅蛋白釋放情況。我們建立HRT，發(fā)現(xiàn)地中海貧血時梯帶釋放增強(qiáng)[2]，現(xiàn)在想看腫瘤患者與正常對照之間紅細(xì)胞膜或紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白存在狀態(tài)的差異，同時探討其機(jī)制和意義。

1 材料與方法

1.1 材料：全部腫瘤患者血液都來自包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，抗凝劑有肝素、EDTA和檸檬酸鹽。

1.2 方法

1.2.1 HRT：兩種紅細(xì)胞的HRT（兩種紅細(xì)胞的雙向梯帶電泳）。第一向：用患者的全血或由此全血分離出來的紅細(xì)胞，分別做淀粉-瓊脂糖混合凝膠電泳[1-2]，電勢梯度6 V/cm，通電15 min、停電15 min，交替進(jìn)行，共3 h。第二向：到時轉(zhuǎn)90°，電勢梯度6 V/cm，通電1.5 h，中間不停電。染色：先染麗春紅，再染聯(lián)苯胺，此時血紅蛋白呈藍(lán)黑色，其他蛋白顯紅色。

1.2.2 梯帶定量：使用BAND SCAN軟件，每個麗春紅標(biāo)本都掃描定量梯帶中血紅蛋白A2右上方的第一個血紅蛋白區(qū)帶（Hb1），以及血紅蛋白A2右下方的CA（碳酸酐酶）區(qū)帶，計算：Hb1/CA=梯帶強(qiáng)度。游離紅細(xì)胞梯帶強(qiáng)度測定值=X，全血紅細(xì)胞梯帶強(qiáng)度測定值=Y，二者比值Z=X/Y。

2 結(jié) 果

2.1 HRT圖例：見圖1～圖2。

2.2 一些癌癥HRT定量結(jié)果：見表1。

表1 一些癌癥HRT定量結(jié)果

圖1 皮膚癌

圖2 膽管癌

3 討 論

HRT的建立開始于地中海貧血的檢測，后來研究過普通外科患者血液標(biāo)本，尿毒癥、高血糖與血液流變學(xué)的關(guān)系[1-8]，本文開始研究癌癥患者紅細(xì)胞的血紅蛋白釋放情況?，F(xiàn)在看來，各種癌癥的血液標(biāo)本都有再釋放，但程度不盡相同，而且每個標(biāo)本的兩種紅細(xì)胞的梯帶關(guān)系也有差異。在游離紅細(xì)胞方面（參見附表中的X），梯帶最強(qiáng)的是肝癌、胰腺癌、肺癌、胃癌等，最弱的是鼻咽癌、甲狀腺癌、皮膚癌等。在全血紅細(xì)胞的梯帶釋放普遍較弱（參見附表中的Y），這說明血液標(biāo)本中的血漿成分對其中紅細(xì)胞的再釋放有抑制作用，但抑制程度也不盡相同（參見附表中的Z），例如，膽管癌的抑制程度不大，直腸癌肝轉(zhuǎn)移及肝癌抑制較大，皮膚癌抑制最大。梯帶抑制程度的大小與血漿成分有關(guān)，血漿中成分很多，什么成分影響紅細(xì)胞再釋放，這是一個新的有趣的大課題，研究繼續(xù)進(jìn)行中[9-11]。

[1]秦文斌,高麗君,蘇燕,等.血紅蛋白釋放試驗與輕β-地中海貧血[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2007,23(6):561-563.

[2]Su Y,Shao G,Gao LJ,et al.RBC electrophoresis with discontinuous power supply – a newly established hemoglobin release test[J]. Electrophoresis,2009,30(6):3041-3043.

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[4]高雅瓊,王彩麗,高麗君,等.尿毒癥患者低滲血紅蛋白釋放試驗的初步結(jié)果[J].臨床和實(shí)驗醫(yī)學(xué)雜志,2010,9(1):12-13.

[5]張曉燕,高麗君,高雅瓊,等.血糖濃度和血紅蛋白釋放試驗的比對研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2010,31(6):524-525.

[6]王翠峰,高麗君,烏蘭,等.血紅蛋白釋放試驗與血液流變學(xué)檢測結(jié)果相關(guān)性的研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2010,7(4):64-66.

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[9]Su Y,Gao LJ,Ma Q,et al.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Electropho resis,2010,31(17):2913-2920.

[10]秦文斌.活體紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的電泳釋放[J].中國科學(xué)-生命科學(xué),2011,41(8):597-607.

[11]Su Y,Gao LJ,Qin WB.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Methods Mol Biol,2012,869(3):393-402.

The Experimental Study of Hemoglobin Release Test in Different Cancer Patients

HAN Li-hong1, YAN Bin2, GAO Li-jun1, QIN Liang-yi1, QIN Wen-bin1*
(1 Department of Hemoglobin Laboratory, Baotou Medical College, Baotou 014010, China; 2 General Surgery, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Baotou 014010, China)

ObjectiveTo study the hemoglobin release test in different cancer patients on the basis of hemoglobin release test.MethodsComparative study of red blood cells in whole blood and extracted from red cell HRT(referred to as the "two red cell HRT")was carried out with starch-agarose mixed gel electrophoresis. After first run of electrophoresis, the power was cut down for a while, the second run of electrophoresis was then performed. Observe the release of hemoglobin in red blood cells with the quantitative factors.ResultsThere are "two red cell HRT" in all tumors, and maybe have different ladder intensity. The ladder intensity of free erythrocyte in liver cancer, pancreatic cancer, gastric cancer and nasopharyngeal carcinoma are strongest. The weakest is thyroid cancer, skin cancer. The ladder intensity of red blood cells is generally weak, and has small changes.ConclusionThere are some plasma factor specimens in cancer patients affect red cells in blood ladder release. Different tumor plasma factors may not be the same, the mechanism need to be further studied.

Cancer; Hemoglobin release test/HRT; Red blood cell

R446.1；R446

B

1671-8194（2015）08-0012-02

*通訊作者