CyclinB2、CDK1在胃癌中的表達水平及生物學意義

CyclinB2、CDK1在胃癌中的表達水平及生物學意義

王曉明梁國棟楊玉波王斌劉海瑞王淑紅

(吉林省腫瘤醫院腹部腫瘤外一科,吉林長春130012)

摘要〔〕目的探討胃癌患者瘤組織中細胞周期蛋白(Cyclin)B2、細胞周期依賴性激酶(CDK1)的表達水平及其預后的臨床生物學意義。方法共收集60例胃癌患者組織標本，采用免疫組化法檢測胃癌及癌旁組織CyclinB2、CDK1表達水平進而分析其與患者臨床病理特征及長期預后的相關性。結果胃癌組織CyclinB2、CDK1表達水平明顯高于癌旁組織(χ2=17.515,P<0.001)，病理為Ⅲ期患者的瘤組織中CyclinB2、CDK1的表達水平明顯高于術后病理Ⅰ期，臨床統計學證實CyclinB2、CDK1的表達水平與TNM分期有關(χ2=11.545,P=0.05)。CyclinB2、CDK1高表達的胃癌患者總生存率明顯差于CyclinB2、CDK1低表達者(P=0.039)，而無疾病生存率兩者無顯著性差異(P=0.096)。 結論胃癌患者CyclinB2、CDK1高表達可能提示腫瘤侵襲的生物學能力較強，并與患者低總生存率(OS)有關。

關鍵詞〔〕胃癌；細胞周期蛋白B2；細胞周期依賴性激酶

中圖分類號〔〕R735.1〔

基金項目：吉林省科技廳資助項目(200705274)

通訊作者：梁國棟(1983-)，男，主治醫師，博士，主要從事普通外科的臨床研究。

第一作者：王曉明(1962-)，男,副主任醫師，主要從事消化道腫瘤外科臨床研究。

細胞周期蛋白(Cyclin)和細胞周期依賴性激酶(CDK)是細胞周期調控的重要分子，在細胞有絲分裂周期的不同時段發揮重要的生物學作用，使細胞周期正常有序的運行。研究表明在其他消化道腫瘤中均存在Cyclin、CDK的過表達，與其侵襲、轉移、增殖、分化等生物學行為密切相關，目前胃癌聯合檢測CyclinB2、CDK1文獻報道較少。本實驗通過免疫組化、熒光原位雜交(FISH)等方法研究CyclinB2和CDK1在胃癌組織(不同TNM分期)、癌旁組織、正常胃組織中的表達，及其生物學行為與患者預后的相關性〔1〕。近期國外有研究提示CyclinB2為進展期胃癌預后不良標志之一〔2〕。國內雖有類似研究，但大多缺乏長期預后數據〔3〕。本研究旨在探究CyclinB2、 CDK1在國人胃癌患者中表達水平及其預后意義。

1材料與方法

1.1研究對象2013年6月至2014年6月收集我住院手術切除胃癌組織的患者60例，年齡37～72歲。45例患者行遠端胃癌切除術，15例患者行全胃切除術。腫瘤<5 cm 26例，>5 cm 34例；低分化30例，中/高度分化30例；臨床分期ⅡA期6例，ⅡB期11例，ⅢA期12例，ⅢB期14例，ⅢC期17例；T分期：T2期9例，T3期26例，T4期25例；N分期N0期7例，N1期15例，N2期19例，N3期19例。納入標準：所有患者均為初始治療，未行術前新輔助化療、無服用生物免疫制劑歷史。術后病理證實為胃腺癌患者60例，其中男30例，女30例。均行D2+淋巴結清掃術(開腹手術51例，腹腔鏡手術9例)。兩位臨床高年資病理醫生(副教授)依據國際抗癌聯盟(AJCC)胃癌臨床病理分型對病人進行術后TNM分期〔4〕。手術后將病人新鮮癌胃組織(原發灶)與癌旁組織進行免疫組化及FISH病理分析，癌旁組織選擇距癌灶>5 cm的胃組織，本實驗得到吉林省腫瘤醫院倫理委員會批準并且征得患者本人的同意。

1.2免疫組化樣本經4%多聚甲醛固定后，包埋于石蠟中。將組織切割為4.0 μm厚的連續切片。二甲苯脫蠟30 min后，梯度乙醇水化。切片浸于枸櫞酸緩沖溶液中進行復性，再用3%的H2O2抑制內源性過氧化酶。切片置于10%皂素中修復，余步驟按卵蛋白-生物素-酶復合物染色(ABC)法進行，常規行蘇木精-伊紅染色，免疫組化染色，鼠單克隆抗體CyclinB2和CDK1均購于上海BOSTER生物有限公司，ABC購于(英國Leica Biosystems Newcastle公司)。

結果判斷標準： 用Olympus顯微鏡觀察DAB-染色切片，染色強度分級由吉林省腫瘤醫院病理科負責，事前未告知臨床診斷分期。胞質、胞核出現棕黃色，黃褐色顆粒為陽性染色細胞，光鏡下每張切片隨機選取高倍視野(400倍)計數500個細胞，根據染色陽性細胞數進行評分〔2〕： 0分為無色，1分為5%～25%細胞表達CyclinB2和CDK1，2分為25%～50%，3分50%～75%，4分75%～100%。根據染色評分結果，將患者分為CyclinB2和CDK1低表達(評分為0～1分)與CyclinB2和CDK1高表達(評分為2～4分)。

1.3術后輔助化療患者術后行替吉奧(愛斯萬日本大鵬株式會社)聯合奧沙利鉑(樂沙定法國賽諾菲)輔助化療，根據患者耐受情況及病情變化等決定化療療程，最大療程數為6個療程。化療方案：替吉奧(愛斯萬日本大鵬株式會社)40 mg/m2口服，2次/d，第1～14天；奧沙利鉑(樂沙定法國賽諾菲)130 mg/m2避光4 h泵入，第1天，每3 w為1個周期。

1.4統計學分析采用SPSS16.0軟件，計數資料比較采用Pearsonχ2檢驗或趨勢χ2分析及秩和檢驗。兩小樣本計量資料比較采用t檢驗。采用Kaplan-Meier法進行生存分析，組間比較采用log秩和檢驗。

2結果

2.1胃癌與癌旁組織CyclinB2和CDK1表達水平60例胃癌患者中29例呈現CyclinB2和CDK1高表達，其中2分為14例，3分為15例。癌旁組織6例為CyclinB2和CDK1高表達，均為2分，兩者比較有統計學差異(χ2=17.515,P<0.001)。

2.2CyclinB2和CDK1表達水平與胃癌臨床病理因素的相關性研究CyclinB2和CDK1高表達與患者性別、腫瘤大小無關(均P>0.05)，但與患者TNM分期相關，CyclinB2和CDK1高表達患者TNM分期明顯高于低表達者(均P<0.05)。趨勢χ2分析表明，CyclinB2和CDK1表達水平與TNM分期有關，分期越高，CyclinB2和CDK1高表達患者所占比例越高(P=0.05)。CyclinB2和CDK1表達水平與患者臨床分期、淋巴結轉移情況均存在相關性(均P>0.05)。見表1。

表1　CyclinB2和CDK1表達水平與

2.3長期預后患者隨訪6～24個月，中位隨訪24個月，失訪4例，失訪率8.16%。CyclinB2和CDK1高表達胃癌患者總生存率明顯差于CyclinB2和CDK1低表達者(P=0.039)，無疾病生存率無顯著差異(P=0.096)。見圖1，圖2。

圖1　CyclinB2和CDK1表達水平與 患者總生存率的相關性

圖2　CyclinB2和CDK1表達水平與 患者無疾病生存率的相關性

3討論

腫瘤基本生物學行為的特征是細胞的增殖(有絲分裂)和分化失控，多數由于癌基因的激活和抑癌基因的失活，干擾了細胞正常有序的增殖分化，而最終歸結至細胞周期調節機制的異常。細胞周期主要由Cyclin和CDK及CK1共同完成。細胞周期G2末期是重要的檢查點，決定著G2/M的轉換，學者Yang等發現CyclinB1、2在胃癌G1細胞中及瘤細胞株中非時相性過度表達，可使細胞周期關鍵點G2/M轉變時間縮短，加速細胞周期的轉換，使細胞過度增殖最終導致癌變，在食管癌、大腸癌的研究中也發現這兩種蛋白的異常表達。由此可以推論CyclinB2和CDK1在細胞周期的調控和腫瘤細胞的形成中起到了重要的作用，且可能為消化道腫瘤發生過程中的一個較早的分子事件。通過實驗研究發現，不同分化程度的腫瘤CyclinB2和CDK1表達差別無顯著性意義，這可能與本實驗選取的例數較少有關，在食道癌及喉癌中的表達情況恰恰相反，說明也存在著器官的差異性。CyclinB2和CDK1在人類多種腫瘤細胞表面過表達，并與細胞運動性及腫瘤細胞轉移密切相關〔5〕。臨床研究表明，高表達CyclinB2和CDK1的乳腺癌、腎癌、肝癌及膽管癌等惡性腫瘤患者，其預后不良。然而CyclinB2和CDK1在胃癌中的預后意義研究較少〔2,6〕。Li等〔7〕研究結果支持本研究結論。而Kang等〔2〕研究中CyclinB2和CDK1表達水平與腫瘤T分期的相關性并無統計學差異，但CyclinB2和CDK1表達水平似乎隨著腫瘤T分期升高而增加。以上研究結果提示CyclinB2和CDK1高表達可能是腫瘤侵襲能力增強的表現。

本研究患者術后采用統一輔助化療方案，隨訪失訪率<10%，提示數據質量較好。結果與國內外研究〔2〕一致。但本研究并未發現CyclinB2和CDK1高表達與患者無復發生存率有關。可能與本研究樣本量少、隨訪時間短有關，也可能與人群基因遺傳背景不同有關，尚待擴大樣本進一步研究。

4參考文獻

1Sadej R,Grudowska A,Turczyk L,etal.CD151 in cancer progression and metastasis:a complex scenario〔J〕.Lab Invest,2014;94(1):41-51.

2Kang BW,Lee D,Chung HY,etal.Tetraspanin CD151 expression associated with prognosis for patients with advanced gastric cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol,2013;139(11):1835-43.

3馬曉麗,黃淑紅,黃敬愛,等.CyclinB1、CDK1在胃癌中的表達及其意義〔J〕.中國現代普通外科進展,2004;7(5):272-4.

4Duman-Scheel M,Weng L,Xin S,etal.Hedgehog regulates cell growth and proliferation by inducting Cyclin D and Cyclin E〔J〕.Nature,2002;417(6886):299-304.

5Romanska HM,Berditchevski F.Tetraspanins in human epithelial malignancies〔J〕.J Pathol,2011;223(1):4-14.

6李桃,齊潔敏.整合素α5β1、CD151在胃癌中的表達及意義〔J〕.中國老年學雜志,2013;33(11):2527-9.

7Li XK,Motwani M,Tong W,etal.Huanglin,a chinese herbal extract,inhibits cell growth by suppressing the expression of cyclin B1 and inhibiting CDC2 kinase activity in human cancer cells〔J〕.Mol Pharmacol,2000;58(6):1287-93.

〔2014-08-12修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)