涎腺黏液表皮樣癌中信號傳導和轉錄激活因子3、血管內皮生長因子的表達及臨床意義

安　峰，何薇薇，林媛媛，劉　博，段曉瑾

(1.河北北方學院附屬第一醫院口腔科，河北 張家口 075000；

2.河北北方學院附屬第一醫院病理科，河北 張家口 075000；

3.河北醫科大學第四醫院病案室，河北 石家莊 050011)

·論著·

涎腺黏液表皮樣癌中信號傳導和轉錄激活因子3、血管內皮生長因子的表達及臨床意義

安峰1，何薇薇1，林媛媛2，劉博2，段曉瑾3

(1.河北北方學院附屬第一醫院口腔科，河北 張家口 075000；

2.河北北方學院附屬第一醫院病理科，河北 張家口 075000；

3.河北醫科大學第四醫院病案室，河北 石家莊 050011)

[摘要]目的探討信號傳導和轉錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管內皮生長因子(vascular endothelial gravth factor,VEGF)在涎腺黏液表皮樣癌( mucoepidermoid carcinoma,MEC)中表達的臨床意義。方法應用免疫組織化學SP法，分別檢測STAT3、VEGF在20例正常涎腺組織、20例良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及82例MEC中的表達情況。結果MEC組STAT3、VEGF表達均高于正常涎腺組和SPA組(P<0.05)；在MEC組中病理分級Ⅲ級患者 STAT3和VEGF表達陽性率高于病理分級Ⅰ級患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表達陽性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴轉移患者 STAT3和VEGF表達陽性率高于無淋巴轉移患者(P<0.05)。結論STAT3和VEGF共同參與MEC的發生發展，可為判斷涎腺MEC 的預后提供參考。

[關鍵詞]涎腺腫瘤；STAT3轉錄因子；血管內皮生長因子類

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.05.014

涎腺黏液表皮樣癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)是一種常見于兒童和成人的涎腺腫瘤，鏡下由黏液細胞、中間細胞及表皮樣細胞構成，約占涎腺惡性腫瘤的29.6%，好發于腮腺。2005年WHO曾采用Auclair等[1]提出的方法按照細胞分化程度、囊內成分、神經浸潤、壞死、間變等情況綜合評分將其分為低度、中度及高度惡性3種級別。這3種分化級別提示了不同的腫瘤發展進程及預后[2]，相對應的具體治療方案也不同。治療方案主要還是采取手術方式，術后生存率較高；但如果出現復發、轉移的患者，則預后較差。在促進腫瘤分化、復發的機制中，微血管生成占據了重要一環。而信號傳導和轉錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)便具有促進腫瘤細胞生長分化、血管增殖的功能[3]。以前的研究中我們注意到人體實體腫瘤細胞中都檢測到高水平的STAT3，并參與了腫瘤細胞的增殖、抗凋亡和血管生成系統。本研究應用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接(streptavidin-perosidase,SP)法分別檢測STAT3和VEGF 在MEC中的表達，探討二者在MEC發生發展中的生物學作用，以及與臨床特征之間的關系。

1材料與方法

1.1一般資料收集1985—2011年間河北北方學院附屬第一醫院病理科經手術切除的MEC石蠟標本共82例，并選取20例涎腺良性多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma，SPA)及其周圍正常涎腺組織作對照。MEC組男性32例，女性50例，年齡19~80歲，平均(54.67±4.90)歲，其中18例有淋巴結轉移；均為首次發病，無術前放療或化療病史；參照WHO(2005)MEC的組織學標準對其進行量化分級：Ⅰ級28例，Ⅱ級34例，Ⅲ級20例；按照國際抗癌聯盟臨床TNM分期法：Ⅰ+Ⅱ期59例，Ⅲ+Ⅳ期23例。SPA組男性7例，女性13例，年齡24~68歲，平均(51.90±9.48)歲。正常涎腺與SPA組來源于同一組病例。3組性別、年齡差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法選用鼠抗人STAT3和VEGF的單克隆抗體，利用免疫組織化學SP法進行染色。每種抗體均采取陽性(已知陽性標本)及陰性(PBS代替一抗)對照。

1.3結果判斷以細胞漿及胞膜有棕黃色顆粒為陽性，按照10個高倍視野內陽性細胞百分數及染色強度的評分相加進行綜合評分。陽性率0分： ≤5%；1分：>5%～25%；2分：>25%~50%；3分：>51%~75%；4分：>75%。染色強度0分：無著色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。0~3分為陰性，≥4分為陽性，所有染色結果均由2位資深醫師進行閱片判讀。

1.4統計學方法應用SPSS19.0統計軟件進行數據處理。計數資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.13組STAT3和VEGF表達比較STAT3和VEGF陽性顆粒均集中在細胞漿和(或)細胞膜，多呈均勻著色，偶爾呈小顆粒狀(圖1~6)。MEC組STAT3、VEGF表達均高于正常涎腺組和SPA組(P<0.05)，而SPA組與正常涎腺組差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　3組STAT3和VEGF表達比較Table 1　Expression of STAT3 and VEGF among three groups　(例數，%)

*P<0.05與正常涎腺組比較#P<0.05與SPA組比較(χ2檢驗)

2.2MEC組不同病理特征中 STAT3和VEGF的表達在MEC組中病理分級Ⅲ級患者STAT3和VEGF表達陽性率高于病理分級Ⅰ+Ⅱ級患者(P<0.05)； TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者STAT3和VEGF表達陽性率高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ 期患者(P<0.05)；有淋巴轉移患者 STAT3和VEGF表達陽性率高于無淋巴轉移患者(P<0.05)；不同性別和年齡MEC患者之間 STAT3和VEGF表達陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2　MEC中不同病理特征STAT3和VEGF的表達Table 2　Pathological features of STAT3 and VEGF in mucoepidermoid carcinoma　(例數，%)

2.3相關性分析MEC組中STAT3與VEGF表達呈正相關(rs=0.226，P<0.05)。

3討論

MEC是口腔頜面部常見的涎腺惡性腫瘤之一，經臨床研究分析，不同的病理組織學分級提示不同的生物學行為，且預后差異較大。低分化型較高分化型更易侵襲周圍組織并發生轉移，生存率也更低。腫瘤的影響因素很多，其中腫瘤內血管增殖占據了重要的部分。不同腫瘤的生長浸潤以及向遠處轉移都將依賴于腫瘤內新生性血管的形成[4]。腫瘤本身的毛細血管內皮細胞在各種促血管生成因子作用下發生了一系列復雜的過程，涉及多種細胞因子和生長因子，如VEGF[5]即是其中關鍵性的組成部分。而STAT3則會直接影響VEGF的形成，促進腫瘤內血管的增殖[6]。

STAT3屬于信號轉導與轉錄激活因子家族(STATs)[7]，在細胞因子和生長因子的作用下，具有促進腫瘤細胞生長分化、血管增殖的功能，并參與到腫瘤的免疫逃逸，為腫瘤的侵襲轉移提供了幫助，已被認為是一種癌基因。現今很多研究證實在惡性腫瘤如胃癌、肝癌[6]、白血病、涎腺樣囊性癌中，STAT3都具有與新生血管相關的高表達。本研究結果顯示，STAT3在正常涎腺組織、SPA、MEC中的陽性表達率分別為5.0%、10.0%、36.6%，MEC組的STAT3陽性表達率高于正常涎腺和SPA組(P<0.05)；鏡下可發現在腫瘤性新生血管豐富的區域如腫瘤浸潤邊緣區，STAT3陽性細胞數量多且更加聚集，相反血管相對較少的腫瘤中心區域，其陽性細胞數量少且分散。說明MEC中STAT3的過表達能夠促進腫瘤血管的增殖，為腫瘤的生長進化以及浸潤轉移提供了營養及途徑。有研究也證實腫瘤細胞中STAT3的過表達，能夠誘導血管生長因子VEGF的表達，促進腫瘤的生長和腫瘤的浸潤[8]。

VEGF是最為重要的一種血管刺激因子，它在人類很多惡性腫瘤細胞中都呈高表達狀態，如乳腺癌、肺癌、卵巢癌[9]等。它的陽性表達部位較為廣泛，可以出現在腫瘤細胞、間質細胞和部分血管內皮細胞中。腫瘤細胞可以通過分泌VEGF來刺激其鄰近血管的內皮細胞分裂增殖和轉化遷移[10]。這種新生的幼稚血管具有結構和功能上的缺陷，導致血管通透性增加，進一步促進腫瘤細胞的增殖和轉移。并且它還能參加到免疫系統中使腫瘤細胞逃避免疫監控。本研究結果顯示，VEGF在正常涎腺組織、SPA、MEC中的陽性表達率分別為10.0%、25.0%、73.2%，MEC組VEGF陽性表達率高于正常涎腺和SPA組(P<0.05)；它的陽性表達區主要集中在腫瘤細胞的胞漿及胞膜上，且這些陽性表達顯著的腫瘤細胞更多集中于腫瘤邊緣，即與周圍組織的交界浸潤處。表明腫瘤細胞通過分泌VEGF作用于附近的血管內皮細胞，從而影響其生長與功能。

多年的研究已經發現，VEGF的啟動子上具有STAT3的結合位點序列，這種STAT3的反應元件可以導致VFGF的異常活化，促進腫瘤的生長和轉移[11-12]。本研究結果也顯示這兩者間呈正相關關系(P<0.05)，在MEC中相互影響，與其預后密切相關。表明它們通過不同的影響方式，促進腫瘤及其所需血管的生長，并共同影響了機體的免疫系統，使腫瘤細胞逃脫機體的免疫監控，加大了腫瘤的復發和轉移率[13]。

綜上所述，STAT3、VEGF在MEC中的表達明顯高于正常涎腺及SPA組，提示二者是MEC發生發展的重要原因之一。通過對這二者聯合表達的研究，可以對MEC的預后進行評估。(本文圖見封三)

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(本文編輯：許卓文)

[收稿日期]2015-03-09；[修回日期]2015-04-10

[基金項目]張家口市科學技術研究與發展指導計劃項目

[作者簡介]安峰(1962-)，男，河北涿鹿人，河北北方學院附屬

[中圖分類號]R739.87

[文獻標志碼]A

[文章編號]1007-3205(2015)05-0540-04

Expression of signal transducer and activator of transcription 3 and vascular endothelial
growth factor in mucoepidermoid carcinoma and clinical significance

AN Feng1,HE Wei-wei1,LIN Yuan-yuan2,LIU Bo2，DUAN Xiao-jin3

(1.Department of Stomatology,the First Affiliated Hospital of Hebei North College,Hebei Province,

Zhangjiakou 075000，China;2.Department of Pathology,the First Affiliated Hospital of Hebei North

College,Hebei Province,Zhangjiakou 075000，China；3.Medical Record Room,the Fourth Hospital

of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050011,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the expression and clinical significance of signal transducer and activator of transcription 3(STAT3) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands.MethodsThe immunohistochemical method SP was used to detect the expression of STAT3 and VEGF in 20 cases of normal salivary gland tissue,20 cases of salivary pleomorphic adenoma(SPA) and 82 cases of mucoepidermoid carcinoma(MEC).ResultsThe expression of STAT3 and VEGF in MEC group were higher than those of normal salivary gland group and SPA group(P<0.05);in MEC group,STAT3 and VEGF expression of pathological grade level Ⅲpatients were higher than those of pathological grade levelⅠpatients(P<0.05 );STAT3 and VEGF expression of TNM stage Ⅲ + Ⅳ patients were higher than those of TNM stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05);STAT3 and VEGF expression of lymph node metastasis in patients were higher than in patients without lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionSTAT3 and VEGF participated in the occurrence and development of MEC and should also be considered as significant indicators of prognosis in salivary gland MEC.

[Key words]salivary gland neoplasm;STAT3 transcription factor;vascular endothelial growth factors

(11110012D)； 河北北方學院自然科學面上項目(2013010)

第一醫院主任醫師，從事口腔頜面外科疾病診治研究。