藥品檢驗中無菌觀念的培養及無菌操作規范

孫亦群

（廣州中醫藥大學第一臨床醫學院，廣東 廣州 510405）

藥品檢驗中無菌觀念的培養及無菌操作規范

孫亦群

（廣州中醫藥大學第一臨床醫學院，廣東 廣州 510405）

介紹無菌概念、滅菌方法及無菌操作規范，強調培養無菌觀念的重要性及基本操作訓練、無菌室的制度管理。

藥品檢驗；無菌概念；操作規范

藥品是特殊商品，藥品質量關系到人的健康和生命。因此，生產藥品的車間需達到一定的凈化級別，生產中的每個步驟都應有操作規范，每一位操作者都應具備一定的藥學專業知識并經過崗位培訓。作為一位藥學工作者，樹立無菌觀念、掌握無菌技術是十分必要的。

1 無菌技術

無菌技術包括無菌環境及無菌操作。

1.1 無菌環境

用物理或化學方法，在某一可控的空間內，使微生物數量降到最低限度。

潔凈室是根據需要對空氣中塵粒、微生物、溫度、濕度、壓力和噪聲進行控制的密閉空間，并以其空氣潔凈度級別符合有關規定為主要特征。我國將空氣潔凈度劃分為4個級別，見表1。

表1 空氣潔凈度級別

對于制藥車間來說，一般要求達到300 000級到100 000級，而對于檢驗用的無菌操作室，要求達到10 000級，局部100級（操作臺）。為保持無菌環境，防止污染，人流通道應設2個緩沖間，需經過換鞋、換衣、洗手、消毒等步驟方能進入；物流設傳遞窗，物品經清潔、消毒后，經傳遞窗進入。

1.1.1 物理滅菌法（1）干熱滅菌：滅菌設備為電烤箱。適用于設備、器械、容器、耐熱干粉藥劑的滅菌。

（2）濕熱滅菌：以水或水蒸氣為媒介，通過加熱提高溫度，達到滅菌效果。適用于設備、器械、耐熱液體藥劑、生藥等的滅菌。常用的方法有煮沸滅菌法、流通蒸氣法、間歇滅菌法、高壓蒸氣滅菌法、巴氏消毒法。①間歇滅菌法：當溫度達到一定值，保溫一段時間后，降至室溫，再繼續加熱，溫度達到一定值，保溫一段時間后，降至室溫，這樣反復操作幾次，直至達到滅菌效果。如靈芝孢子粉的滅菌：加熱至70℃（或80℃），保溫1小時，降至室溫，反復操作3次。這個方法適用于不耐長時間高溫的物品滅菌[1]。②高壓蒸氣滅菌法：常用各類壓力滅菌器，在壓力作用下，可使蒸氣穿透力增強，溫度提高，極大提高滅菌效果。這個方法適用于耐高溫的物品滅菌。③巴氏消毒法：最早用于牛奶的消毒。有兩種方法：保持式巴氏消毒法和連續式巴氏消毒法。保持式巴氏消毒法即在62℃～65℃處理30分鐘，立即降溫，15分鐘內降至5℃以下，可殺滅致病微生物（如結核桿菌、布氏桿菌、沙門菌等）；連續式巴氏消毒法即在72℃～75℃保持15～16秒，立即降溫至10℃，再繼續加熱至80℃～85℃，保持10～15秒，立即降溫至10℃。而現在常用于血漿蛋白制品生產中的病毒滅活的巴氏消毒法是60℃保持10小時[2-3]。

（3）輻射滅菌：醫療器械、容器、生產輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。①紫外線滅菌：紫外線消毒滅菌（UVGⅠ）定義為：使用紫外線光輻射進行空氣和表面消毒殺菌的技術，即利用紫外線C波段254 nm波長產生的紫外線破壞微生物的DNA或RNA，達到消毒殺菌的效果。紫外線消毒滅菌是一種高效、廣譜、無污染、經濟簡單的實用技術，可廣泛應用于水、空氣的消毒殺菌，是一項被醫學界公認的最有效的廣譜殺菌技術。其可在短時間內殺滅分布于空氣及水中的微生物，還能產生活性氧清新空氣，對潔凈室來說能增加空氣新鮮度、潔凈度，真正達到潔凈衛生的空氣品質，并適用于物品表面的消毒[4]。②微波滅菌：微波（Microwave）是頻率在300 MHz至300 GHz，波長在1 mm至1 000 mm范圍內的超高頻電磁波。在微波輻射下產生熱效應，并使分子的運動加劇，分子的平均能量增加，瞬間提高溫度，達到滅菌效果[5]。③鈷60射線滅菌：利用60Co-Y射線對細菌進行輻射，破壞細菌的DNA和RNA，使分子發生降解，失去合成蛋白質和遺傳的功能，使細胞死亡，達到滅菌效果。具有穿透力強、節能、安全、方便（不必除去包裝）、高效、滅菌徹底等優點。一般選擇輻照劑量為10 kGy以下、輻照時間為5小時就能達到滅菌效果。對不能以常規方法滅菌的制劑，可以采用鈷60輻照滅菌[3]。

（4）濾過滅菌：利用微孔濾膜（0.22 μm）濾除細菌。常用于熱不穩定的藥品溶液或原料、生化藥劑、水及空氣的滅菌。

1.1.2 化學滅菌法 化學滅菌法可分為氣體滅菌法和液體滅菌法。（1）氣體滅菌法是指采用氣態殺菌劑（如臭氧、環氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和過氧乙酸蒸氣等）進行滅菌的方法。該法特別適合環境消毒以及不耐加熱滅菌的醫用器具、設備和設施的消毒，亦可用于粉末注射劑。（2）液體滅菌法是指采用液態殺菌劑進行消毒的方法。該法常作為其他滅菌法的輔助措施，適合于皮膚、無菌器具和設備的消毒。常采用的消毒液有75%乙醇、1%聚維酮碘溶液、0.1%～0.2%苯扎溴銨（新潔爾滅）、2%左右的酚或煤酚皂溶液等。

1.2 無菌操作

無菌操作一般是指在無菌環境下，使用無菌器材進行操作，可保證操作中物品不被二次污染、實驗結果的真實性及檢驗人員的安全。無菌操作涉及的面很廣，現以藥品檢驗中的無菌操作為例，簡述如下[6]。

1.2.1 實驗前準備 消毒（對無菌操作室地面、墻面、工作臺面及燈具等進行消毒）→空間滅菌（開啟凈化系統和紫外線燈）→經滅菌處理的實驗器具與供試品進入無菌室（通過物流通道）→操作人員進入第一緩沖間（換鞋、洗手、用消毒液消毒手）→操作人員進入第二緩沖間（穿戴無菌工作服、鞋、帽、口罩，75%乙醇噴霧消毒手）→操作人員進入無菌室→點燃酒精燈，用有消毒液的棉球消毒手→進行實驗操作。

1.2.2 檢驗操作規程（1）實驗全過程應在近火焰處操作，動作要輕。（2）對供試品及實驗器皿做標記。（3）對接種環（針）進行灼燒滅菌。（4）用吸管吸取供試液或培養液等。（5）用過的玻璃器皿應立即放入消毒液缸（桶）內進行滅菌。（6）在開啟菌種管或其他供試品安瓿之前，應用碘伏溶液、碘酒棉球消毒容器及刻痕用的砂輪、鋸刀等，安瓿切口通過火焰滅菌。（7）在接種霉菌、放線菌時，應在鋪有浸過消毒液的濕紗布上操作，以防孢子散落傳播。（8）培養皿開蓋時開口朝向火焰，不得將蓋放在工作臺上，拔出玻璃容器塞子時應用小指夾住塞子拔出，不得將塞子放在工作臺上，以免造成污染。（9）觀察平板培養物時，一般不宜開蓋觀察。如取菌落或菌苔涂片、染色，或做玻片凝集試驗時，在近火焰處操作，平皿蓋可適當開啟（45°），開口朝向火焰，挑取菌落。（10）在涂片、染色時，應使用夾子夾持載玻片，切勿用手直接拿載玻片，用過的載玻片和蓋玻片應放入消毒液中消毒后洗刷清潔，再經消毒后再洗刷清潔，最后放在固定處。

2 無菌觀念的培養

臨床上常由于操作人員未嚴格遵守無菌操作原則，導致醫療、護理事故，而在制藥及藥品檢驗上，雖然不比醫療上會造成嚴重后果，但同樣也會造成很大的損失。如造成整批藥品微生物限度超標而報廢；又如因操作污染，檢驗結果無效，需要從頭來過等。無菌操作看似簡單，但無菌觀念的養成卻并不簡單。要應用好無菌技術，就要樹立牢固的無菌觀念。無菌觀念的形成不是一蹴而就的，強化無菌觀念是一個長期的、重要的任務，需要不斷學習、培訓，強化無菌意識，還要建立嚴格的制度，以制度管理員工，才能使員工逐漸樹立無菌觀念，做好每一步無菌操作，生產出合格的無菌產品。

2.1 無菌知識的學習

藥學人員應時刻牢記藥品是特殊商品，質量是企業的生命，藥品質量直接關系到人的健康甚至生命。只有了解無菌概念，才能知道其重要性，才能自覺樹立無菌意識。在無菌操作中，自覺做好每一步操作，最終完成無菌操作全過程，生產出合格的無菌產品，產品的質量就會有保證。

2.2 滅菌技術及無菌操作的培訓

無菌操作是培訓重點，僅學習幾個概念、定義及條文是遠遠不夠的。因此，要加強滅菌技術及無菌操作的培訓，通過培訓，使員工清楚地了解怎么做是正確的、怎么做是錯誤的，加深他們對無菌觀念的認識和理解，從而逐漸養成無菌操作的良好習慣。

以藥品檢驗為例，實習生及新入職的檢驗員都要經過培訓才能上崗。初上崗時，需要教師帶教，對以下問題進行實地講解：操作環境需要消毒，如何消毒？所有物品，包括檢驗器具、培養皿、吸管、稀釋液、培養基都要消毒，如何消毒？為什么消毒物品要裝入容器內，或用消毒巾包好？無菌物品在空氣中能否暴露較長時間？無菌物品取出后能否放回無菌容器內？為什么手經過消毒，還是不能接觸吸管吸樣品的一端？用吸管取樣時，能否用嘴吹？通過對這些問題的講解，以加深實習生及新入職檢驗員對無菌觀念的認識。

2.3 嚴格的制度管理

員工經過學習和培訓，了解了無菌概念，樹立了無菌意識，養成了無菌操作的良好習慣，還需要嚴格的制度管理才能使無菌觀念長久地樹立心中，順利地貫徹執行下去[7]。其中，無菌操作室管理制度包括：（1）無菌操作室溫度應控制在18℃～26℃，相對濕度應控制在45%～65%，并做到每天記錄；（2）級別不同的相鄰房間的靜壓差應大于5 Pa，無菌操作室與室外大氣的靜壓差應大于10 Pa，以保證空氣新鮮，并做到每天記錄靜壓差；（3）無菌操作室內空氣的微生物數和塵粒數應符合規定并定期檢查和記錄。無菌操作室微生物數、塵粒數檢測每年一次，檢測報告應歸檔備查；（4）進入無菌操作室按規定穿潔凈工作服，工作人員應按個人衛生制度進行檢查，合格后方可進入潔凈室。無菌操作室使用完畢，應嚴格按清潔規程進行各房間、器具等的清潔工作，實驗前后均應對無菌操作室進行消毒，并有清潔記錄及消毒記錄。另外，人員出入均需登記；（5）無菌操作室內嚴格控制人員數量，無關人員嚴禁入內。工作人員（包括維修輔助人員）應定期進行衛生和微生物學基礎知識、潔凈作業等方面的培訓與考核，對進入無菌操作室的臨時外來人員應進行指導和監督。

[1]蕭莉.靈芝孢子粉低溫間歇滅菌法除菌效果的考察[J].中國藥業，2003，12（1）：52.

[2]薛廣波.現代消毒學[M].北京：人民軍醫出版社，2002.

[3]張文福.醫學消毒學[M].北京：軍事醫學科學出版社，2002.

[4]嚴浩.紫外線消毒滅菌（UVGI）與（過濾+UVGI）潔凈技術[J].機電信息，2009（29）：3-9.

[5]黃振洲.微波滅菌在醫藥工業的應用[J].醫藥工程設計，2003，24（1）：16-18.

[6]孫亦群.醫院制劑檢驗人員的崗位培訓[J].現代醫院，2011，11（2）：131-132.

[7]周曉英.手術室無菌管理概述[J].中國中醫藥現代遠程教育，2012（24）：94.

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1671-1246（2015）08-0158-02