木瓜斑點落葉病菌生物學特性及室內藥劑篩選

摘要：對木瓜（Chaenomeles sinensis）斑點落葉病致病菌冠盤二胞（Marssonina coronaria）的生物學特性及其室內藥劑防治進行了研究。結果表明，病菌生長的最適培養基為PDA，在pH為7.0、碳源和氮源分別為可溶性淀粉和尿素、光照條件光/暗為12 h/12 h的條件下生長最好；菌絲致死溫度為45 ℃。在供試的9種藥劑中，多菌靈的抑菌效果最好，其EC50為8.78 mg/L，在濃度1.0 mg/L條件下，相對抑菌率達85.0%，代森錳鋅效果最差，在濃度1.67 mg/L條件下，相對抑菌率僅為40.8%。

關鍵詞： 木瓜（Chaenomeles sinensis）； 斑點落葉病； 生物學特性； 藥劑篩選

中圖分類號：S436.5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）01-0086-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.01.024

木瓜（Chaenomeles spp.）亦稱木瓜海棠、光皮木瓜等，為薔薇科木瓜屬植物，有5個種即木瓜種（C. sinensis）、皺皮木瓜種（C. speciosa）、毛葉木瓜種（C. cathayensis）、西藏木瓜種（C. thibetica）和日本木瓜種（C. japonica）[1]。木瓜主要分布于亞洲東南部，中國主產于安徽、山東、湖北、貴州、云南和西藏等地區[2]。木瓜是傳統的庭園觀賞綠化樹種，樹皮含鞣質，可提制栲膠，木材質地堅硬，可制作家具，還是名貴的中藥材[2-4]。

近年來，安徽、山東、河南、湖北、云南等地大力發展木瓜種植規模。然而，木瓜上的斑點落葉病發生嚴重，該病害嚴重影響木瓜的產量和品質，成為其產業化發展的重要限制因子之一[5-8]。2012年4～8月，云南、湖北等多地木瓜斑點落葉病發生嚴重。本試驗對引起木瓜斑點落葉病的病原菌冠盤二胞（Marssonina coronaria）的生物學特性進行了研究，并對病原菌防治藥劑作了室內平板篩選。旨在進一步了解木瓜斑點落葉病菌及其發生規律，為病害的防治奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株來源、培養基和供試農藥

木瓜斑點落葉病菌自西南林業大學校園木瓜病葉上分離得到，菌種保存于西南林業大學林學院森保教研室，菌株編號MGB1。

供試培養基[9]：①清水瓊脂（Water agar，WA）：瓊脂粉15 g，去離子水1 000 mL。②查氏培養基（Czapek agar，CA）：蔗糖30 g，硝酸鈉3 g，氯化鉀0.5 g，硫酸鐵0.01 g，硫酸鎂0.5 g，磷酸二氫鉀1 g，瓊脂15 g，去離子水1 000 mL。③玉米粉培養基（Corn meal medium，CMM）：玉米粉40 g，蔗糖10 g，瓊脂15 g，去離子水1 000 mL。④馬鈴薯葡萄糖培養基（Potato dextrose agar，PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉15 g，去離子水1 000 mL。

供試藥劑為9種生產上常用農藥（表1），藥劑濃度依次為推薦濃度、稀釋2倍濃度、稀釋4倍濃度。

1.2 不同營養和環境條件對病原菌生長的影響

1.2.1 不同培養基對病原菌生長的影響 不同培養基培養5 d，用5 mm的打孔器自病菌菌落邊緣打取菌餅，分別接種在上述4種不同培養基平板中央，置于28 ℃培養5 d后，用十字交叉法測量菌落直徑并記錄，每處理3個重復，試驗重復3次（培養條件和重復次數下同）[10]。

1.2.2 不同碳源和氮源對病原菌生長的影響 以CA培養基為基礎培養基，分別用含有相當碳元素的葡萄糖、甘露醇和可溶性淀粉取代其中的蔗糖，配制成不同含碳培養基，以不加碳元素的培養基為對照。分別用含有相當氮元素的硝酸鈣、硝酸銨和尿素取代其中的硝酸鈉，并以不加氮元素的培養基為對照[11]。

1.2.3 不同pH對病原菌生長的影響 用1 mol/L NaOH或HCl調節PDA培養基的pH至4、5、6、7、8、9和10共7個梯度[11]。

1.2.4 不同致死溫度對病原菌生長的影響 打取3個直徑為5 mm的菌餅，移至含有5 mL去離子水的試管中，分別置于40、45、50、55、60、65 ℃水浴10 min，取出后冷卻至室溫。將處理后的菌餅接種到PDA平板中央，置于28 ℃培養觀察。

1.2.5 不同光照和通氣對病原菌生長的影響 將光照培養箱分別設置3種不同光照條件（光/暗，h）：0/24、12/12和24/0[12]。通氣處理采用培養皿用Parafilm封口和不封口兩種處理方法[13]。

1.3 室內藥劑平板篩選

采用菌絲生長法測定藥劑對病菌的相對抑制效果。將供試藥劑與熔化后的PDA培養基混合，制成一定濃度的含藥平板，以不加藥劑的PDA平板為對照。病菌活化5 d后，用打孔器打成5 mm的菌餅，接種于含藥平板中。28 ℃恒溫培養箱培養，5 d后測量菌落直徑，計算相對抑菌率。每個濃度重復3次，試驗重復3次。取濃度對數值為x，相對抑菌率值為y，求出毒力回歸方程[14]，并計算供試藥劑對病原菌的有效中濃度EC50以及EC70、EC90[15]。

菌落凈直徑=菌落直徑-菌餅直徑

相對抑菌率=（對照菌落凈直徑-處理菌落凈直徑）/對照菌落凈直徑×100%

1.4 數據分析

用Excel 2010對數據進行處理、作圖和差異顯著性分析（P<0.05）。所有圖形和表格中的正負偏差均為標準偏差。用回歸程序得到毒力回歸方程、相關系數、EC50、EC70和EC90。

2 結果與分析

2.1 不同培養基對病原菌生長的影響

在供試的4種培養基中，病原菌在PDA上生長速度最快，菌絲最濃密，其次是CMM培養基，而在WA瓊脂培養基上菌落直徑最小（圖1），且最稀疏。表明PDA培養基是很好的植物病原真菌通用培養基。

2.2 不同碳源和氮源對病原菌菌絲生長的影響

病原菌在試驗所用的幾種碳源條件下皆可生長，其中以在可溶性淀粉條件下生長最好，其次是葡萄糖，它們之間存在明顯差異。氮源以尿素最佳，其次是硝酸銨，菌落直徑差異明顯。不加碳和氮元素明顯影響菌絲生長（表2）。

2.3 不同pH對病原菌菌絲生長的影響

試驗結果表明，病原菌在pH為4～10的條件下皆可生長，而以pH為7條件下生長的最好，偏酸或偏堿都會影響菌絲的生長（圖2）。

2.4 光照、通氣條件對菌絲生長影響以及菌絲致死溫度

病菌在光/暗為12 h/12 h交替的條件下生長最好，菌落直徑達（47.18±0.72） mm，其次是24 h/0 h光照，菌落直徑為（38.96±0.47） mm，完全黑暗條件下生長最差，菌落直徑僅為（28.97±0.72） mm。且三者之間差異明顯。可見，晝夜光節律對病原菌生長最有利。

在培養皿封口與不封口條件下，生長速率分別為10.47、10.80 mm/d，菌絲生長速率無明顯變化（P>0.05）。

經過40 ℃以上6個溫度水浴處理菌餅10 min，只有40 ℃處理下的菌絲生長良好，能在PDA培養基上形成菌落，菌落直徑為（35.1±3.9） mm，其余溫度下均未能在PDA培養基上形成菌落。因此初步確定病原菌菌絲的致死溫度為45 ℃。

2.5 不同藥劑對病原菌的毒力

供試的9種農藥對病原菌菌絲生長均有明顯的抑制作用。其中以多菌靈和咪鮮胺效果最好，分別在1.000 mg/L和1.250 mg/L濃度下，抑菌率均達85.0%。但是將藥劑分別稀釋2倍和4倍后，咪鮮胺的抑菌率降低幅度較大（圖3）。

多菌靈最低濃度0.250 0 mg/L時，抑菌率達到76.9%，EC50僅為8.78 mg/L，咪鮮胺的EC50為75.22 mg/L（表3）。代森錳鋅對病原菌菌絲抑制率效果最差，在濃度為1.670 mg/L條件下，抑制率僅為40.8%，其EC50達2 621.71 mg/L。苯醚甲環唑在濃度為0.286 mg/L條件下，抑菌率達到80.3%，效果良好。由此可知，在9種常用藥劑中，多菌靈對病原菌菌絲生長的抑制效果最好，咪鮮胺和苯醚甲環唑次之，代森錳鋅效果最差。

3 小結與討論

木瓜早期落葉主要由褐斑病（M. nacoronaria）和圓斑病（Phyllosticta solitaria）引起[8]。褐斑病在整個木瓜生長季節均有發生，尤以7～8月最為嚴重。發病初期葉片出現褐斑，隨后逐漸擴大呈黑褐色斑，嚴重時布滿整個葉面，直至葉片枯死脫落。該病害的發生嚴重影響木瓜的產量和品質。除云南之外，山東、安徽和湖北等省均有發生。該病菌也是導致蘋果樹早期落葉的主要病原，其有性態為蘋果雙殼菌（Diplocarpon mali）。目前該病已成為阻礙中國蘋果產業健康發展的主要病害之一[16]。但目前為止還沒有此病原物的生物學特性和藥劑篩選的報道。

本研究測試了不同培養基、pH、光照、通氣狀況、碳源、氮源和溫度等條件對病原菌菌絲生長的影響。結果表明，該病原菌在pH為4～10范圍內均能生長，以pH 7生長最好；最適碳源為可溶性淀粉，氮源為尿素；在光暗交替的條件下菌落生長較好，最適培養基為PDA培養基。

室內藥劑篩選研究了9種不同藥劑不同用藥量對菌絲生長的影響。結果表明，抑制病原菌菌絲生長的最佳藥劑為多菌靈，EC50最小，在濃度為1.000 mg/L時，相對抑制率為85.0%。咪鮮胺1.250 mg/L濃度下，相對抑菌率為85.0%，但是將藥劑分別稀釋2倍和4倍后，效果不如前者。其次是10%苯醚甲環唑，在濃度為0.286 mg/L時，相對抑制率為80.3%，代森錳鋅藥劑的抑制效果不佳。所測試的農藥有殺真菌劑、殺卵菌劑、殺細菌劑和昆蟲生長調節劑，其對病原真菌均有一定的抑制作用。有報道稱，咪鮮胺與多菌靈混用有顯著的增效作用，因此藥劑防治篩選還應考慮藥劑混合后的防治效果。

試驗對木瓜斑點落葉病的生物學特性和室內藥劑篩選做了初步研究，為進一步認識該病原以及該病害的發生規律和防治奠定了一定基礎。

參考文獻：

[1] 張 茜，王 光，何禎祥，等.木瓜種質資源的植物學歸類及管理原則[J].植物遺傳資源學報，2005，6（3）：339-343.

[2] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學出版社，1988.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）[S].北京：化學工業出版社，2005.

[4] 宋亞玲，封智兵，程永現，等.木瓜化學成分的研究[J].西北植物學報，2007，27（4）：831-833.

[5] 段 霞.桐柏山區木瓜的病蟲害及其防治[J].落葉果樹，2007（1）：27-28.

[6] 施再喜.宣木瓜病蟲害綜合防治技術[J].林業科技開發，2001， 15（5）：56-57.

[7] 何家寶，李程斌，鄭 艷，等.地道藥材宣木瓜產區病蟲害調查初報[J].現代中藥研究與實踐，2008，22（1）：7-9.

[8] 向一兵.長陽木瓜產區主要病蟲及危害[J].湖北農業科學，2003，42（1）：47.

[9] 方中達.植病研究方法[M].北京：農業出版社，1998.

[10] 傅本重，楊 敏，李國元，等.滇楸葉斑病病原菌的生物學特性及其抑菌藥劑篩選[J].華中農業大學學報（自然科學版），2013， 32（6）：65-69.

[11] 傅本重，王政又，伍建榕，等.美人蕉葉斑病病原菌的生物學特性及其抑菌藥劑篩選[J].中國農學通報，2011，27（31）：105-108.

[12] 劉志恒，劉芳岑，黃欣陽，等.西瓜菌核病菌生物學特性的研究[J].沈陽農業大學學報，2013，44（1）：32-36.

[13] 羅 臻，張敬澤，胡東維.大麥葉枯病菌的生物學特性[J].植物保護學報，2008，35（5）：469-470.

[14] 蔣軍喜，戴兆基，唐自文，等.5種殺菌劑對梨輪紋病菌的毒力測定和田間藥效試驗[J].江西農業大學學報，2010，32（4）：710-713.

[15] 趙新海，鐘麗娟，徐 沖，等.康地蕾得對黃瓜枯萎病的室內毒力測定及田間防效試驗[J].農藥，2008，47（9）：697.

[16] 趙 晶，朱 剛，黃 園，等.冠盤二胞Marssonina coronaria侵染不同抗性蘋果葉片的組織病理學研究[J].菌物學報，2012， 31（4）：548-559.