姜黃浸膏散對CCl4所致小鼠急性肝損傷的保護作用研究

摘要：為了考察姜黃浸膏散對CCl4所致的小鼠急性肝損傷的保護作用，采用不同劑量姜黃浸膏散（50、100、200 mg/kg）口灌給藥小鼠一周，隨后腹腔注射0.12% CCl4攻毒，觀察小鼠血清中AST、ALT以及肝組織勻漿中SOD、CAT、GSH-Px和MDA的變化情況。結果顯示，姜黃浸膏散能夠顯著降低CCl4所致肝損傷小鼠血清ALT、AST值（P<0.01或P<0.05），降低肝勻漿中MDA含量，增加SOD、CAT、GSH-Px活性，明顯改善肝組織的病理變化。表明姜黃浸膏散對CCl4所致的小鼠急性肝損傷具有顯著的保護作用。

關鍵詞：姜黃浸膏散；CCl4；肝損傷；小鼠

中圖分類號：S948；R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）02-0425-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.040

姜黃（Curcuma longa L.）是姜科姜黃屬多年生草本植物，粉末可作藥用。其主要成分為姜黃素，經研究表明具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗微生物、清除自由基、抗突變、保肝等多方面藥理作用[1，2]。在肝臟疾病研究方面發現姜黃素可以通過抗炎、抗氧化、抗纖維化、抗肝癌等作用來發揮保肝護肝作用[3]。本試驗以小鼠CCl4肝損傷模型為基礎，考察姜黃浸膏散對CCl4引起的小鼠急性肝損傷的保護作用，為姜黃浸膏散在水產養殖中制劑化應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

雄性昆明小鼠，體重（20±2）g，購自湖北省疾病預防控制中心。

聯苯雙酯購自藥店；姜黃浸膏散為實驗室自制；谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗分組及給藥[4]

試驗鼠被隨機分為6組，即正常對照組、損傷組、陽性對照組（聯苯酸酯，200 mg/kg）、3個給藥組（按姜黃素計，劑量分別為50、100、200 mg/kg），每組10只小鼠，采取口灌給藥（10 mL/kg），姜黃素、聯苯雙酯均溶于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中，正常對照組和損傷組口灌生理鹽水。給藥10 d后除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射0.12% CCl4-橄欖油溶液（10 mL/kg），禁食不禁水。

1.3 樣品制備及指標測定觀察

腹腔注射24 h后，小鼠摘除眼球取血，放置析出血清后，4 000 r/min 離心10 min，收集血清置于 -20 ℃保存待測。將小鼠拉頸脫臼處死，取出肝臟，在預冷的生理鹽水中漂洗，除去血液并用濾紙拭干，取0.2 g加入9倍預冷生理鹽水進行勻漿，制備10%肝組織勻漿，然后以4 000 r/min 離心10 min，收集上清液，置于-20 ℃保存待測。血清ALT、AST活性、組織中SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA含量均采用相應的試劑盒檢測。

另取小塊肝臟用10%中性甲醛固定，經洗滌、脫水、透明、滲透和包埋后，切成厚度為5 μm的薄片，HE染色，再經脫水和透明后用中性樹膠封片，光鏡下觀察組織學特征。

1.4 數據處理

所有數據均采用x±s表示，采用SPSS17.0統計分析軟件進行單因素方差分析和LSD多重比較分析。

2 結果與分析

2.1 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠血清轉氨酶活性的影響

由表1可見，CCl4攻毒后，損傷組小鼠血清中AST、ALT活性較正常對照組均極顯著升高（P<0.01）；陽性對照組及姜黃浸膏散不同劑量組小鼠血清中AST、ALT活性均極顯著低于損傷組（P<0.01），姜黃浸膏散高劑量組（200 mg/kg）同陽性對照組間差異不顯著（P >0.05）。表明姜黃浸膏散能夠降低CCl4引起的小鼠血清中轉氨酶活性的升高，并呈現劑量效應關系。

2.2 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠肝組織中SOD、CAT、GSH-Px活性、MDA含量的影響

由表2可見，CCl4攻毒后，損傷組小鼠肝組織中SOD、CAT及GSH-Px活性較正常對照組均極顯著降低（P<0.01），MDA含量極顯著升高（P<0.01）；陽性對照組及姜黃浸膏散不同劑量組小鼠肝組織中SOD、CAT及GSH-Px活性均顯著高于損傷組（P<0.05或P<0.01），MDA含量顯著低于損傷組（P<0.05或P<0.01），姜黃浸膏散高劑量組（200 mg/kg）同陽性對照組間差異不顯著（P >0.05）。表明姜黃浸膏散能夠有效緩解CCl4所致的小鼠肝組織SOD、CAT、GSH-Px活性降低及MDA含量升高。

2.3 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠肝組織病理學影響

正常對照組小鼠肝小葉結構完整，肝細胞排列整齊，細胞結構完整，染色均勻，無細胞腫大及脂肪變性（圖1A）。損傷組小鼠部分肝細胞出現水腫，細胞體積增大，胞質水分含量增多，呈現透明、淡染的現象；部分肝細胞出現脂肪變性（圖1B）。陽性對照組和姜黃浸膏散不同劑量組小鼠僅少數肝細胞出現水腫及脂肪變性（圖1C-F）。

3 討論

小鼠CCl4急性肝損傷模型在形態學及病理學方面均與人類肝損傷極為相似，是經典的篩選和研究肝炎治療藥物的病理模型[5]。CCl4在肝內經微粒體細胞色素P450代謝激活，生成三氯甲基過氧自由基及氯自由基，氧化體系過度活化，導致氧化生物膜發生脂質過氧化反應，改變細胞膜的流動性及通透性，破壞肝細胞結構及功能，導致肝損傷發生[6]。

血清轉氨酶（AST、ALT等）是肝細胞受到損傷的敏感指標，轉氨酶的升高在一定程度上反映了肝細胞受到損傷的程度[7]。本試驗中經過預試驗，選擇0.12% CCl4腹腔注射小鼠造模，損傷組小鼠血清中AST、ALT活性極顯著升高（P<0.01），說明CCl4引起了小鼠肝細胞受損，內源性轉氨酶大量釋放到胞外，模型建立成功[8]；用藥組給予姜黃浸膏散提前干預后，血清中AST及ALT活性極顯著低于損傷組（P<0.01），且肝細胞病理變化減輕，說明姜黃浸膏散減輕了CCl4引起的小鼠肝細胞損傷。SOD、CAT和GSH-Px是體內重要的抗氧化酶，而MDA是脂質過氧化的終產物，其含量變化間接反映了機體脂質過氧化水平及肝細胞損傷程度[6]，損傷組小鼠肝組織勻漿中SOD、CAT和GSH-Px活性明顯降低，MDA含量顯著升高（P<0.01），提示損傷組小鼠體內有過氧化反應的發生。姜黃浸膏散不同劑量組小鼠SOD、CAT和GSH-Px活性升高，MDA含量降低，說明姜黃浸膏散對CCl4引起的小鼠過氧化反應起到了抑制作用，高劑量組效果尤為顯著。姜黃浸膏散表現出與陽性對照組藥物同樣的作用趨勢，進一步說明姜黃浸膏散能夠緩解CCl4所致的小鼠急性肝損傷，具有開發保肝護肝制劑的前景。

姜黃浸膏散中主要成分為姜黃素，而姜黃素具有較強的抗氧化作用[9]，在緩解CCl4所致的急性肝損傷中發揮重要作用。有研究表明，姜黃素分子結構中的酚羥基在姜黃素的抗氧化活性中起決定性的作用[10]。推測姜黃浸膏散保肝作用與清除自由基相關。

參考文獻：

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