益生菌對南美白對蝦生長和免疫力的影響

摘要：為了研究益生菌對南美白對蝦生長和免疫力的影響，采用含不同嗜酸乳酸桿菌濃度的餌料對南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）同時飼養進行試驗，分成4組（對照組，濃度為0.5%、1.0%、1.5%的試驗1組、試驗2組、試驗3組）。結果表明，隨著餌料中嗜酸乳酸桿菌濃度增加，增重率和特定生長率也增加，試驗2組、試驗3組均顯著高于對照組和試驗1組（P<0.05），試驗組的餌料系數顯著降低（P<0.05），而成活率顯著升高（P<0.05）。免疫指標也呈現類似變化，試驗2組、試驗3組的AKP、ACP、PO活性都顯著高于試驗1組和對照組（P<0.05），POD活性各試驗組間則差異不顯著（P>0.05），但都顯著高于對照組（P<0.05）。因此，添加一定濃度嗜酸乳酸桿菌能有效提高南美白對蝦的生長指標和免疫指標。

關鍵詞：南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）；嗜酸乳酸桿菌；生長性能；免疫

中圖分類號：S968.22 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）02-0437-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.044

南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）又名凡納濱對蝦、萬氏對蝦、白對蝦，原產于太平洋西海岸至墨西哥灣中部，具有生長快、抗應激能力強、肉味鮮美，易進行集約化養殖等優點[1]。隨著規模化養殖，一方面養殖過程中出現的大量應激因素（如營養、擁擠、環境變化等），導致蝦體代謝紊亂、抗病力下降[2，3]；另一方面病害流行日趨嚴重，例如細菌[4，5]、病毒[6，7]和寄生蟲[8]等，給對蝦養殖業造成嚴重經濟損失。因此，由于健康養殖的需要，人們加大了綠色、環保藥物和添加劑的研發力度，添加劑在水產養殖中的應用日趨廣泛[9]。益生菌是一類可以促進健康的活體微生物制劑。作為抗生素替代品，近年來得到快速發展，益生菌的主要作用是防治消化道疾病、促進吸收和刺激免疫系統等方面[10-12]。魚類消化道定植乳酸菌后，可抵抗革蘭氏陰性致病菌，增強機體抗感染力，還能促進腸黏膜的免疫調節活性，促進生長，提高抗病力[13]。石軍等[14]指出乳酸菌能夠分泌細菌素、H2O2、有機酸等物質，降低消化道pH，從而抑制腸道有害微生物生長及繁殖，這與Ring等[15]和Lewus等[16]得出的結論相似。華雪銘等[17]試驗發現在暗紋東方鲀幼魚飼料中添加殼聚糖和益生菌，能使腸道淀粉酶活性顯著增強，促進暗紋東方鲀生長；高進[18]在15日齡大黃魚稚魚基礎飼料中分別添加不同梯度的益生菌和益生元（酵母細胞壁多糖），進行為期30 d的攝食生長試驗，發現顯著提高了大黃魚稚魚的存活能力和抗脅迫能力；溫俊[19]選用健康牙鲆為試驗對象，探討了飼料中添加不同水平微生態制劑對牙鲆生長、免疫和抗病力的影響，促進牙鲆生長、提高非特異性免疫力和抗病力。而蝦類基礎餌料中添加益生菌研究較少，本研究通過添加不同濃度益生菌制劑的餌料喂養南美白對蝦，對南美白對蝦生長、免疫力及抗病性的影響，為生產實際中合理使用益生菌喂養南美白對蝦提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

將大小、體重均勻的南美白對蝦饑餓處理1 d后分別等量隨機放養到編號為對照組、試驗1組、試驗2組、試驗3組，每組3個重復，分別投喂0.5%、1.0%、1.5%的3個不同濃度的嗜酸乳酸桿菌（活菌數達到1010 CFU/g上）餌料，飼養20 d。每2 d換水1次，以水渾濁程度適當調整換水頻率。池水為已曝氣的自來水，添加適量的海鹽。每天分別在9：30和17：30投喂飼料，投放量為蝦體重的10%～15%，根據攝食量適當調節，觀察并測定對蝦的生長及免疫指標。

1.2 試驗方法

在養殖結束后，在各組剩余蝦中隨機取3只，稱重計算生長指標；存活率則從養殖開始到結束期間計算；每隔5 d測定1次免疫指標，每次測定均隨機取樣。樣本采集具體操作為：取一尾蝦，去頭去皮，用剪刀先初步剪碎后研磨成勻漿狀態，將勻漿倒入刻度離心管中，加生理鹽水到3 mL，2 000 r/min離心10 min后迅速將離心管置于低溫環境中以保持酶活性，取上清液保存備用。

1.3 指標測定

試驗前的體重定義為初體重，試驗結束時定義為末體重，養殖20 d后，測定南美白對蝦生長性能指標。酚氧化酶（PO）活性的測定參照Ashida等[20]方法進行；酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）活性的測定采用磷酸苯二鈉法[21]；過氧化物酶（POD）活性的測定采用愈創木酚法測定[22]。

1.4 數據處理

試驗結果用平均數±標準差（mean±SD）表示，采用單因子方差分析，如果差異顯著（P<0.05），再以Duncan法進行多重比較。所有數據均采用SPSS 17.0統計軟件進行分析。

2 結果與分析

2.1 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦生長指標的影響

不同嗜酸乳酸桿菌濃度對南美白對蝦生長的影響參見表1。由表1可知，與對照組相比，試驗組的餌料系數顯著降低（P<0.05），但各試驗組間沒有顯著性差異（P>0.05），成活率則剛好相反，試驗組均顯著高于對照組（P<0.05）。增重率和特定生長率變化情況類似，隨著餌料中嗜酸乳酸桿菌濃度增加而增加，試驗2組、試驗3組均顯著高于對照組（P<0.05），而試驗1組和對照組差異不顯著（P>0.05）。這說明在基礎餌料中添加嗜酸乳酸桿菌，能夠顯著提高南美白對蝦生長指標。

2.2 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦AKP活性的影響

由圖1可以看出，從養殖第5天開始，添加嗜酸乳酸桿菌的試驗組中的AKP活性已經和對照組對存在顯著性差異（P<0.05），且隨著嗜酸乳酸桿菌含量增加，AKP活性升高明顯，試驗2組和試驗3組活性顯著高于試驗1組（P<0.05）；隨后從第10天到第20天，對照組AKP活性增長緩慢，而添加嗜酸乳酸桿菌的試驗組活性升高明顯，試驗2組和試驗3組從試驗開始到結束期間均與試驗1組有顯著差異（P<0.05）。

2.3 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦ACP活性的影響

嗜酸乳酸桿菌影響南美白對蝦ACP活性的影響見圖2。由圖2可以看出，養殖第5天開始，添加嗜酸乳酸桿菌的試驗組ACP活性已經顯著高于對照組（P<0.05），試驗3組活性最高，顯著高于其他試驗組（P<0.05）。第15天時，試驗2組ACP活性增加明顯，達到最大。

2.4 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦PO活性的影響

如圖3所示，嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦PO活力影響顯著，從第5天開始，試驗組PO活性就顯著高于對照組（P<0.05），但試驗組之間無顯著差異（P>0.05）。隨著喂養飼料的天數增加，投喂高含量嗜酸乳酸桿菌餌料的試驗組PO活性增加明顯，其中試驗2組和試驗3組顯著高于試驗1組（P<0.05），且試驗組均顯著高于對照組（P<0.05）。

2.5 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦POD活性的影響

如圖4所示，嗜酸乳酸桿菌能在一定程度上影響南美白對蝦POD活性，投喂嗜酸乳酸桿菌餌料初期，南美白對蝦POD活性增加不明顯，試驗組和對照組間無顯著差異（P<0.05）。隨著時間的延長，試驗組POD活性增加速度高于對照組，到第10天時，高嗜酸乳酸桿菌含量試驗組顯著高于對照組（P<0.05），到第15天后，所有試驗組POD活性都顯著高于對照組（P<0.05）。

3 小結與討論

從Kozasa[23]首次將益生菌應用到水產養殖中，此后這種綠色的添加劑迅速發展。研究報道和生產實踐證明，益生菌是水產養殖中傳統化學藥物的良好替代選擇。目前益生菌應用已經十分普遍，能有效提高養殖對象的生長性能，能直接影響動物腸道代謝作用。益生菌的作用機制之一就是通過與腸道內的病原菌爭奪附著位點和營養成分，在腸道內達到一定數量成為優勢菌，通過影響腸道微生態而起作用。芽孢桿菌在水產養殖中的使用可以增加養殖水體和養殖動物腸道中芽孢桿菌的比例，通過營養和空間的競爭或者抗生素的產生抑制其他細菌尤其是有害菌的生長，從而提高養殖動物的成活率[24]。本研究中與對照組相比，試驗組中的南美白對蝦其相對增重率、特定生長率和成活率均有明顯改善（P<0.05），說明嗜酸乳酸桿菌能夠促進對蝦養分的吸收，穩定內環境，能夠拮抗魚類致病菌。通過分泌有機酸、過氧化氫、二氧化碳、丁二酮等抑制有害菌的入侵，糾正腸道菌群失調，塑造健康的生態環境[25]。因此，喂食含有嗜酸乳酸桿菌的飼料試驗組比喂食不含嗜酸乳酸桿菌的對照組，其生長指標得到大大提升。益生菌可以通過增強機體免疫功能來提高抗病能力，增強抗病毒能力[26]。蝦體內水解酶具有破壞和消除侵入體內異物的功能[27]，對機體免疫起重要作用，其中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶是比較重要的水解酶，是反映對蝦免疫能力的重要指標，在對蝦防御反應中發揮重要作用。而對蝦類的酚氧化酶系統與高等動物的補體系統存在很大的相似性，是一種酶級聯系統[28]，主要是由絲氨酸蛋白酶和其他因子組成，在蝦類非特異性免疫當中起關鍵作用。在試驗周期內，試驗組的酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、酚氧化酶等均顯著高于對照組，說明嗜酸乳酸桿菌在養殖過程的應用，能夠在一定程度上改善養殖魚的水環境或腸道內微生物平衡，通過激發機體的體液免疫來增強機體免疫機能，其作用機理可能是通過細菌本身或細胞壁成分刺激非特異性免疫系統使其發揮作用，從而可以作為良好的免疫增強劑提高動物免疫力[29]。

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