乙型肝炎病毒DNA定量檢測與臨床的關(guān)系

朱建奎

【摘要】 目的 探討乙型肝炎（乙肝）病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）定量檢測與臨床的關(guān)系。方法 100例乙型肝炎血清標(biāo)志物陽性患者作為研究組， 22例正常健康人作為對照組， 通過微板核酸雜交技術(shù)對其進(jìn)行HBV-DNA 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的定量檢測。結(jié)果 所有研究對象依據(jù)血清學(xué)標(biāo)志物可分為五組， 乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝E抗原（HBeAg）、乙肝核心抗體（抗-HBc）陽性患者的HBV-DNA陽性率遠(yuǎn)高于其他組患者， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 乙肝血清學(xué)標(biāo)志物不能完全反映出患者機(jī)體中HBV病毒復(fù)制情況， 而HBV-DNA 的定量檢測， 對于乙肝病毒感染病情進(jìn)展的檢測和抗HBV復(fù)制藥物治療有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒；脫氧核糖核酸；定量檢測；血清學(xué)標(biāo)志物

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.03.016

HBV是誘發(fā)病毒性感染的最主要病原， 而我國在世界范圍內(nèi)是一定肝炎病毒感染率相對較高的國家之一， 大約2億左右人口感染乙型肝炎病毒， 因而其引發(fā)原發(fā)性肝癌的危險系數(shù)也大幅度增加。所以， 防治乙型肝炎病毒感染一向是我國控制傳染病的首要問題[1]。但是， 乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物無法滿足醫(yī)生判斷患者病情和評估抗病毒藥物的臨床療效[2]。因此本次研究中， 選取2014年1月～2015年1月本院收治的100例乙型肝炎血清標(biāo)志物陽性患者作為研究組， 同期選取22例正常健康人作為對照組， 運(yùn)用微板核酸雜交技術(shù)對其進(jìn)行HBV-DNA PCR的定量檢測， 分析乙型肝炎病毒DNA定量檢測與臨床的關(guān)系， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2014年1月～2015年1月本院收治的乙型肝炎血清標(biāo)志物陽性患者100例作為研究組， 其中男55例， 女45例， 年齡26～74歲， 平均年齡（58.43±6.34）歲；同期選擇22例正常健康人作為對照組， 其經(jīng)檢查均為肝功能正常、HBV血清學(xué)標(biāo)志物陰性者， 其中男13例， 女9例， 年齡26～73例， 平均年齡（58.23±6.04）歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 試劑與儀器 試劑：上海浩源生物科技有限公司所提供的HBV微板核酸雜交定量檢查試劑盒， 上海科華公司所提供的HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測試劑盒；儀器：英國TECHNE-GEN IUS PCR擴(kuò)增儀， 奧地利生產(chǎn)的SLT-SPECTRA型酶標(biāo)儀。

1. 3 檢測方法 試劑準(zhǔn)備：將PCR主反應(yīng)液、稀釋液和裂解液進(jìn)行分裝處理；標(biāo)本制備：在50 μl裂解液中混入50 μl標(biāo)本， 并在37℃的保溫箱中進(jìn)行1 h的保溫處理， 并置入100 μl中和液， 再使用樣品稀釋液A予以稀釋， 使之成為樣品原液， 再使用樣品稀釋液B對樣品原液進(jìn)行稀釋， 并取稀釋后樣品15 μl， 將其置入主反應(yīng)液中， 再加入50 μl的石蠟油。標(biāo)本處理完畢后進(jìn)行擴(kuò)增與雜交， 并使用TMB系統(tǒng)對雜交后的標(biāo)本進(jìn)行顯色處理， 使用酶標(biāo)儀獲取讀數(shù)， 并予以定量計(jì)算。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

所有研究對象依據(jù)血清學(xué)標(biāo)志物可分為五組， HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性患者的HBV-DNA陽性率遠(yuǎn)高于其他組患者， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

HBV血清標(biāo)志物檢查是最早應(yīng)用于臨床的檢測方法之一， 其在判斷HBV復(fù)制和診斷HBV感染情況上曾發(fā)揮較大作用[3]。然而， 因?yàn)椴《咀儺愐约凹w對于免疫應(yīng)答不同等原因， HBV血清標(biāo)志物檢查指標(biāo)已經(jīng)無法準(zhǔn)確反映乙型肝炎病毒全貌[4]。而患者血清中HBV-DNA定量檢測則能準(zhǔn)確反映患者血清內(nèi)HBV-DNA復(fù)制情況， 且逐漸成為HBV治療的臨床療效檢測指標(biāo)[5]。因此， 分析HBV血清標(biāo)志物與HBV-DNA的定量結(jié)果， 對于乙型肝炎診斷和抗HBV藥物的療效判定提供重要依據(jù)。

本組研究結(jié)果顯示， HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性組為乙肝病毒感染期標(biāo)志， 該組患者的HBV-DNA檢出率為94.6%， 其DNA的拷貝數(shù)是（4.2±0.6）×107 copies/ml， 可見該組患者的乙肝病毒復(fù)制的活躍性最高， 此類型患者的傳染性最強(qiáng)。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc組是乙肝病毒長期攜帶標(biāo)準(zhǔn)， 其HBV-DNA含量拷貝數(shù)是（7.5±2.9）×105 copies/ml， 提示其病毒復(fù)制仍然比較活躍。HBsAg、抗-HBc陽性組患者的DNA拷貝數(shù)為（6.3±2.1）×105 copies/ml， 明顯低于HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性組， 可見其病毒復(fù)制水平相對較低， 且傳染性也比較弱。目前認(rèn)為， 其為HBV感染恢復(fù)期。

綜上所述， 乙肝血清學(xué)標(biāo)志物作為是否存在乙肝病毒感染的檢測無法正確反映患者機(jī)體中乙肝病毒復(fù)制情況， 但HBV-DNA定量檢測， 對于評估乙型肝炎病毒感染進(jìn)展和抗病毒藥物療效有重要的臨床意義， 其在乙型肝炎治療方案的選擇與療效判定方面有廣泛應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)

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[2] 金怡， 魏飛力， 馬麗娜， 等. 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)和直接測序法檢測乙型肝炎病毒逆轉(zhuǎn)錄區(qū)耐藥變異的比較. 中華肝臟病雜志， 2010， 18（9）：641-642.

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[收稿日期：2015-06-09]