SPF級BALB/c裸小鼠的生產管理與質量控制

管理科學

SPF級BALB/c裸小鼠的生產管理與質量控制

劉科，夏冠玲，田青鷺，楊林，饒子亮，唐小江

(廣東省醫學實驗動物中心，廣東 佛山528248)

【摘要】SPF級裸小鼠的飼養及質量控制涉及多方面的環節和工作。生產管理及質量控制效果，直接影響動物的數量和質量。我中心2007年開始，逐步建立了規范的SPF級BALB/c裸小鼠生產繁育體系。裸小鼠生產繁育至今，數量和質量得到較好的保證。本文通過介紹我中心SPF級BALB/c裸小鼠的設施、種群、飼養管理及質量控制的具體做法和經驗體會，為SPF級BALB/c裸小鼠相關繁育和研究提供參考和借鑒。

【關鍵詞】BALB/c裸小鼠；SPF級；生產管理；質量控制

[作者簡介]廣東省醫學科研基金(A2014143)。

[通訊作者]唐小江(1967-)，男，主任醫師，博導， 主要從事實驗動物和毒理學研究。

【中圖分類號】R332【文獻標識碼】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.001.016

Breeding management and quality control of SPF BALB/c nude mice

LIU Ke，XIA Guang-lin，TIAN Qing-lu，YANG Lin，RAO Zi-liang，TANG Xiao-jiang

(Guangdong Medical Laboratory Animal Center, Guangdong Foshan 528248, China)

Abstract【】 Breeding and quality control of SPF nude mice involves many links and works. The quality and quantity of animals are directly affected by breeding management and quality control. A standardized breeding system of SPF BALB/c nude mice were gradually established at the center after 2007. This paper introduces specific practices and experience in facilities, stock, breeding management, and quality control of SPF BALB/c nude mice, in order to provide the reference for related breeding and study in SPF BALB/c nude mice.

【Key words】BALB/c nude mice；SPF；Breeding management；Quality control

裸小鼠是先天性免疫缺陷動物，已成為醫學、生物學研究領域不可缺少的實驗動物模型，特別是在腫瘤學、免疫學、毒理學、遺傳學等領域廣泛應用[1-2]。BALB/c裸小鼠又是裸小鼠品系中發現較早，使用量較多的品系，也是我國使用最廣泛的裸小鼠品系。我國在1979年開始引進，但因BALB/c裸小鼠先天性免疫缺陷，對飼養繁育條件極為嚴格，在微生物控制方面，難以長久維持SPF級別，至今能長期規模化提供SPF裸小鼠的單位仍較少。作者于2007年建立SPF級BALB/c裸小鼠生產種群，規范生產繁育、管理、質量控制體系，注重供應動物質量。多年來，已在裸小鼠繁育和質量控制方面積累了實踐經驗。本文簡介BALB/c裸小鼠生產管理與質量控制實際做法，供科研及生產人員參考和借鑒。

1SPF級裸小鼠生產設施

SPF級裸小鼠飼養繁育對環境設施要求較高，生產設施必需符合國家屏障設施標準【GB14925-2010】[3]，且需實施嚴格的環境控制措施。為穩定的供應高質量的SPF級裸小鼠，建設了屏障配套隔離包的裸小鼠保種設施，以及2個獨立SPF裸小鼠擴大生產群飼養室。裸小鼠保種設施形成隔離包加屏障的雙重保障，隔離包和屏障采用單獨的送排風系統，以實現動物環境和人員操作的獨立，良好控制，可長期維持高級別的裸小鼠種群，并為擴大生產區源源不斷的提供種源。擴大生產群分2個獨立的飼養室，可實現規模化提供SPF裸小鼠品系，并可隨時更換質量下降飼養室種群。SPF級裸小鼠保種配套設施(彩插5圖1)。

2SPF裸小鼠種群

SPF級BALB/c裸小鼠種源來自國家種子中心或國家認可的種源單位，質量合格[4]。目前，BALB/c裸小鼠種群為3000對，月可提供BALB/c裸小鼠約4500只，裸小鼠微生物質量符合SPF級別【SCXK(粵)2013-0002】。

3SPF裸小鼠飼養管理及質量控制

3.1保種、生產繁殖方式

裸小鼠是一種先天性免疫缺陷型動物，雌性純合子(nu/nu)裸小鼠母鼠母性差，乳腺發育不良，本身不能育成仔鼠。本中心采用nu/+雌鼠與nu/nu雄鼠交配方法。保種核心群雌雄按1∶1比例交配，采用單線法繁育方式，生產擴大群采用雌雄2∶1比例長期同居交配，交配方式為隨機交配，每對動物生產四胎后淘汰。用此繁殖方式，生產仔鼠有純合子(nu/nu) 和雜合子(nu/+)。(nu/nu) 小鼠21 d斷奶，雜合子(nu/+)小鼠若不留種，7 d內(最好3 d內)根據胡須多少和表皮有無絨毛全部挑出，需留種的每窩雜合子不超過2只，若有代乳鼠母鼠，雜合子應單獨代乳，從而確保純合子小鼠正常哺乳，良好的生長發育。生產繁育設立繁殖登記卡和生產記錄，對每只動物進行詳細登記。

3.2飼料、飲水

裸小鼠相對其他免疫功能正常小鼠而言，消化代謝功能較差，飼料吸收和利用率較低。所以，裸小鼠飼料蛋白質和脂肪等營養成分相對較高。SPF級裸小鼠飼料是由飼料生產部生產的裸小鼠專用全價配合飼料【SCXK(粵)2013-0002】，飼料成分：粗蛋白23.5%，粗纖維3.8%，粗灰分7.3%，粗脂肪5.4%，鈣1.2%，磷0.85%，鈉0.25%。飼料采用輻照劑量為20～25 kGY的CO60滅菌。我們對裸小鼠用水滅菌比較謹慎，嚴格控制，動物飲水由凈化水配置pH2.5～3.0的酸化水，然后再經真空高溫高壓滅菌，傳入屏障設施內使用。動物采用自由采食和飲水，在喂全價顆粒料的同時，每周加喂滅菌蛋黃、瓜子和黃豆各1次，確保裸小鼠繁育和生長良好。

3.3環境控制

3.3.1溫濕度

裸小鼠體表無毛或稀疏、較短的被毛，所以對溫濕度較為敏感。裸小鼠飼養室內溫濕度由水冷式中央空調控制，以確保屏障及隔離包內恒溫恒濕。送風經初效、中效、高效3級過濾，符合屏障環境標準。溫度控制在22℃～24℃，濕度50%～60%。為確保空調機組正常、穩定運行，對中央空調機組及空氣處理機加裝報警裝置，及溫濕度監控裝置，設備維護人員對其24 h巡查。

3.3.2光照

不同光照時間影響BALB/c裸小鼠的繁育性能[5]，裸小鼠光照時間為10 h/d，通過定時器自動控制開啟、關閉。

3.3.3墊料

使用的墊料有楊木刨花、玉米芯和楊木片，裸小鼠繁殖鼠籠使用墊料為楊木刨花，維持或供應裸小鼠籠盒使用玉米芯和楊木片墊料。為徹底殺滅墊料中微生物，墊料需滅菌爐132℃ 20 min高溫高壓滅菌2次，首次高溫高壓滅菌后，再裝入裸小鼠專用籠具，經高溫高壓滅菌傳入屏障系統和隔離包內。

3.3.4衛生消毒

屏障設施消毒后，各項環境指標均符合屏障環境標準要求。裸小鼠飼養籠具、墊料每星期更換1～2次，每次更換籠具時，用消毒液對隔離包和飼養籠架做1次大清潔，隔離包及用品(鑷子、毛刷等)每天工作后，進行清潔、消毒。屏障設施每天工作后，用消毒液進行拖地和噴霧消毒。此外設施內地面、墻壁、天花板、籠具、用品)1周全面消毒清潔1次。排風口及過濾膜1周清洗1～2次，消毒液定期更換，屏障及隔離包等區域日常使用的消毒液1周輪換1次，以確保消毒液的效力。目前，我們常用消毒液有：酒精，百毒殺，強力消毒靈，過氧乙酸等。

3.4人員管理

人員管理是裸小鼠高效生產繁育、供應，維持高級別和高質量的關鍵。裸小鼠生產工作人員嚴格遵守各項管理制度，按照標準操作規程開展工作，參加相關各類培訓。

3.4.1生產人員嚴格遵守各項管理制度。生產人員家里不能養寵物，SPF生產人員工作期間不能接觸普通級及疾病動物，患病、攜帶疾病及非工作人員均禁止進入裸小鼠屏障設施。時刻保持無菌意識，人員進出、物品進出、人員操作對設施和動物均不造成任何污染。

3.4.2生產人員嚴格執行各項標準操作規程，嚴格按屏障設施、保種、繁育、飼養管理規程要求開展工作。

3.4.3生產人員上崗前取得實驗動物上崗證，并進行內部崗前培訓，經考核合格后才能上崗，上崗后定期開展相關知識和技術培訓，及時掌握新知識和新技術。

3.5環境、微生物監測

裸小鼠自身免疫缺陷，對環境設施要求高，易受微生物感染，在飼養繁育過程要做好環境和微生物的監測。

3.5.1設施環境監測：除按照國家標準《實驗動物環境與設施》要求做好環境設施定期監測外，還要做好日常監測：包括溫度、濕度、壓差、送排風過濾系統，發現環境指標超出要求范圍，及時調節。

1.1 3.5.2微生物監測：我中心3個月對裸小鼠進行1次微生物質量監測，監測微生物種類和方法參照國家標準GB 14922. 2-2011《實驗動物微生物學等級及監測》[6]和GB 14922. 1-2001《實驗動物寄生蟲學等級及監測》[7]。每月對裸小鼠飼料、飲水、墊料、籠具進行1次微生物監測，監測方法參照GBB 14926. 41-2001《實驗動物無菌動物生活環境及糞便標本的檢測方法》[8]。

4裸小鼠生產繁育及質量控制情況

4.1繁殖情況

嚴格按照上述方法對SPF裸小鼠進行繁育、飼養，選取2代裸小鼠保種群的繁育情況進行分析，結果顯示裸小鼠生長、繁育良好，裸鼠生產繁育率較高。裸小鼠不同胎次繁育情況見表1。

4.2微生物控制情況

根據自檢結果，裸小鼠生產用滅菌飼料、墊料、飲水均無微生物檢出。裸小鼠符合SPF等級，2013-2014年BALB/c裸小鼠檢測結果見表2。

4.3動物生理生化、臟器特性

對成年BALB/c裸小鼠生理、生化，臟器特性進行了測定，測定結果顯示，不同性別裸小鼠血液生理生化參數、臟器指標有所不同，具體指標及測定結果詳見論文《不同性別BALB/c裸小鼠血液學及臟器系數觀察》[9]。

表1　SPF級BALB/c裸小鼠不同胎次繁育情況

5經驗體會

裸小鼠的飼養繁育及質量控制涉及多方面的環節和工作，任何一方面工作沒有做到位，一個環節沒有控制好，都難以繁育出高質量的動物。(1)設施的質量好壞直接影響動物的質量，裸鼠長期飼養，并維持SPF級，最好配置隔離包或IVC系統。(2)裸鼠飼養做好運行管理、設施維護、各參數指標的控制，設施、用品、動物應定時自檢，并及時調整和整改。設施內使用物品做好及時、定期清潔消毒，盡量減少屏障設施及隔離器內物品的存放，做到使用的物品整齊、潔凈，多余的物品及時移除。屏障設施內滅菌過的籠具、墊料盡量3 d內用完、開封的飼料應當天用完。(3)裸小鼠的營養需求較高，飼料最好選用輻照，且要添加輔料雞蛋、瓜子、黃豆。(4)裸小鼠較有毛小鼠體型小和活動能力弱，飼養籠盒飼料架最好定制，飼料架底部距籠盒底部應滿足裸鼠站立便可吃到飼料，否則，對裸小鼠的生長影響較大。(5)加強人員管理、培訓，建立無菌意識，防止人員、物品、操作，污染設施和動物。(6)加強裸小鼠特性認知，雖裸小鼠表現為無毛、裸體，但裸小鼠并非真正意義上無毛鼠，部分個體長有稀疏被毛的現象[10]；而且，裸小鼠隨著鼠齡的增加，皮膚變薄、頭頸部皮皺褶、發育遲緩等特點；裸小鼠是先天性免疫缺陷，T 淋巴細胞功能缺陷，無胸腺，僅有胸腺殘跡或異常上皮。

總之，裸小鼠的飼養、管理及質量控制涉及多方面的環節及工作。只有當這些條件滿足后，才能保證裸小鼠質量，使繁育的動物及相關科學實驗符合標準、規范。

表2　2013-2014年BALB/c裸小鼠微生物及寄生蟲檢測結果

參考文獻：

[1]吳細丕，錢林法．實驗動物與腫瘤研究[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2000．

[2]富群華．裸小鼠生物學特性簡介[J]．上海實驗動物科學，1988，8(1)：48-49．

[3]中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，中國質檢出版社第一編輯室． GB 14922. 2-2010 實驗動物環境及設施[S]． 中國質檢出版社，中國標準出版社．2011．

[4]廣東省人民代表大會常務委員會．廣東省實驗動物管理條例[S]． 2010年6月2日公布，2010年10月1日實施．

[5]李志東，王暉，歐陽軼強，等．不同光照時間對BALB/c裸小鼠生長發育及繁殖影響的比較研究[J]．實驗動物科學，2008，25(8)：13-15．

[6]中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，中國質檢出版社第一編輯室． GB 14925-2011 實驗動物微生物學等級及監測[S]． 中國質檢出版社，中國標準出版社． 2011．

[7]中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，中國質檢出版社第一編輯室． GB 14922. 1-2001 實驗動物寄生蟲學等級及監測[S]． 中國質檢出版社，中國標準出版社． 2011．

[8]中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，中國質檢出版社第一編輯室．GBT 14926. 41-2001實驗動物無菌動物生活環境及糞便標本的檢測方法[S]． 中國質檢出版社，中國標準出版社． 2011．

[9]劉科，劉盛來，楊林，等．不同性別BALB/c裸小鼠血液學及臟器系數觀察[J]．實驗動物與比較醫學，2014，34(1)：65-67．

[10]Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. Learning from nudity: lessons from the nude phenotype [J]. Exp Dermatol, 2005, 14: 797-810．

〔修回日期〕2014-11-20