高效液相色譜法測(cè)定銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛含量

高效液相色譜法測(cè)定銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛含量

陳繼舜，陳琴華*

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院，湖北 十堰 442008)

摘要：目的建立用HPLC測(cè)定銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛含量的方法。方法采用色譜條件為L(zhǎng)inksil-ODS色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm),流動(dòng)相為乙腈-1%的冰醋酸(30∶70)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。結(jié)果原兒茶醛在線性范圍為5～100 μg/mL,線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 5。平均回收率在97.6%(n=5)，日間精密度為1.25%。結(jié)論該方法準(zhǔn)確性好，重現(xiàn)性好,快速準(zhǔn)確，可用于銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛的含量測(cè)定以及銀丹心腦通軟膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：銀丹心腦通軟膠囊；原兒茶醛；含量測(cè)定；色譜法，高效液相

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.01.021

中圖分類(lèi)號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)01-0071-03

基金項(xiàng)目:十堰市科學(xué)技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)項(xiàng)目(14Y55,2013st33)；湖北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)計(jì)劃項(xiàng)目(2013Z-B04)；湖北省2011協(xié)同創(chuàng)新中心基金(4)。

作者簡(jiǎn)介:陳繼舜(1974-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事冠心病基礎(chǔ)及臨床研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2014-08-03)

*通信作者:陳琴華,電話-(0719)8272351,電子信箱-cqh77@163.com

Determination of the content of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule by HPLC

CHEN Jishun,CHEN Qinhua*

(Dongfeng Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,Hubei Province,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method to determine the content of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.MethodsChromatographic column was Linksil-ODS (5 μm,4.6 mm×250 mm) at the gradient elution mode with the now rate of 1.0 mL/min,mobile phase was acetonitrile-water(7∶3),including 1% acetic acid.The detection wavelength

was 280 nm,column temperature was 30 ℃ and injection volume was 20 μL.ResultsThe line range was 5～100 μg/mL and standard curve showed good linear regression in test ranges (r=0.9995).And the main recovery was in the range of 97.6% with RSD 1.25% (n=5).ConclusionThe method is acute,rapid and has good reproducibility for protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.It can be used to control the quality of protocatechualdehyde in Yindan Xingnaotong Capsule.

Keywords:Yindan Xingnaotong Capsule;protocatechualdehyde;content determination;HPLC

銀丹心腦通軟膠囊主要由銀杏葉、丹參、燈盞細(xì)辛、三七等8種中藥組成[1-3]，具有活血化瘀、行氣止痛、消食化滯的作用，用于氣滯血瘀引起的胸痹，癥見(jiàn)胸痛、胸悶、氣短、心悸等，以及冠心病、心絞痛、高血壓、腦動(dòng)脈硬化、腦卒中、腦卒中后遺癥見(jiàn)上述癥狀者[4-10]。原兒茶醛是主要組成藥物丹參的主要有效成分之一。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究[11-15]證明其具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量，擴(kuò)張心腦血管等作用。為了控制該膠囊質(zhì)量，筆者對(duì)銀丹心腦通軟膠囊中的原兒茶醛進(jìn)行含量測(cè)定，為銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

Ultimate3000高效液相色譜儀，chromeleon工作站。KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器，蘇州江東精密儀器有限公司。HP-01溶劑過(guò)濾器，杭州賽析科技有限公司。日本島津AEU-210電子天平，TG16G離心儀。原兒茶醛,中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110810-200506。銀丹心腦通軟膠囊，貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥有限公司，批號(hào)：130302，由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院藥學(xué)部提供。乙腈為色譜級(jí)，水為純化水，其他試劑為分析純。

2方法和結(jié)果

2.1色譜條件Linksil-ODS色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流動(dòng)相為1%的冰醋酸水：乙腈=7∶3，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

2.2溶液的制備對(duì)照品溶液的制備：取原兒茶醛對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為原兒茶醛對(duì)照品(1.0 mg/mL)貯備液。精密吸取適量，用甲醇稀釋得100 μg/mL的工作溶液。

供試品溶液的制備：取銀丹心腦通軟膠囊適量，研碎，精密稱(chēng)定1.0 g，至容量瓶中，加入甲醇20 mL,稱(chēng)重,超聲30 min，補(bǔ)重，進(jìn)樣前用0.45 μm的超濾膜過(guò)濾并脫氣。

陰性對(duì)照品溶液的制備：取按照銀丹心腦通軟膠囊的組方配制獨(dú)缺丹參的陰性樣品，干燥，粉碎，過(guò)60目篩，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)按照“2.1項(xiàng)下”色譜條件，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL分別注入高效液相色譜儀，供試品溶液色譜圖上在與對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上有一相同的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在對(duì)照品溶液處無(wú)色譜峰，銀丹心腦通軟膠囊的其他成分在該色譜條件下不影響原兒茶醛的測(cè)定。因此可知，原兒茶醛專(zhuān)屬性較強(qiáng)，可以用來(lái)測(cè)定銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛的含量。

2.4線性關(guān)系考察取定量的原兒茶醛對(duì)照品溶液，配置一系列的原兒茶醛對(duì)照品溶液，相當(dāng)于原兒茶醛的濃度分別為5，10，20，40，80，100 μg/mL,按“2.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)樣。記錄色譜圖和峰面積，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，原兒茶醛的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得線性回歸方程：Y=14 099X+5 324,r=0.999 5。結(jié)果表明,原兒茶醛在5～100 μg/mL的濃度范圍線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一原兒茶醛對(duì)照品溶液(40 μg/mL)，在上述色譜條件下1 d內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算峰面積RSD為1.22%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一原兒茶醛對(duì)照品溶液(40 μg/mL)，分別于0，1，2，4，8，12 h在上述條件下進(jìn)樣測(cè)定，其RSD為1.36%，結(jié)果表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批銀丹心腦通軟膠囊，按“2.2項(xiàng)下”溶液的制備方法處理，按“2.1項(xiàng)下”色譜條件進(jìn)樣20 μL，計(jì)算原兒茶醛平均含量為366 μg/g，其RSD為1.35%。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率精密稱(chēng)取已知含量的銀丹心腦通軟膠囊5份(366 μg/g)，每份約0.5 g，分別精密加入對(duì)照品(原兒茶醛200 μg/mL) 1.0 mL，按“2.2項(xiàng)”的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣量20 μL，測(cè)定原兒茶醛的平均回收率為97.6%，RSD(n=5)為1.24%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　原兒茶醛加樣回收率

2.9樣品測(cè)定取3批銀丹心腦通軟膠囊藥品(批號(hào)為130302、130412、131203)適量,按“2.2項(xiàng)”下供試品溶液制備方法制備樣品，按“2.1項(xiàng)”下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，原兒茶醛含量分別為366，382，370 μg/g。

3結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相法建立了銀丹心腦通軟膠囊的活性成分原兒茶醛含量測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好。該方法可用于銀丹心腦通軟膠囊中的有效成分的含量測(cè)定，亦可作為銀丹心腦通軟膠囊中原兒茶醛有效含量的測(cè)定方法。在流動(dòng)相選擇的中，考慮到本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)的成分均為水溶性成分，故純化水占流動(dòng)相的70%，乙腈為30%，為保證分離效果良好，純化水中加入的冰醋酸改善峰型及分離度。得到流動(dòng)相為1%的冰醋酸水∶乙腈=7∶3可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相的要求。

在原兒茶醛提取上，方法加熱回流，其提取時(shí)間超過(guò)2 h,而超聲波技術(shù)可用于絕大多數(shù)中藥有效成分的提取, 已有實(shí)驗(yàn)證明利用超聲波提取可獲得比常規(guī)方法更佳的提取效果和提取率，與水提取工藝相比，超聲法具有省時(shí)、節(jié)能、不破壞有效成分、溶劑用量少、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)在樣品處理方面采用在溫度50 ℃時(shí)，超聲功率60 W,提取30 min，更加體現(xiàn)快速測(cè)定。所建立銀丹心腦通軟膠囊中的原兒茶醛的含量測(cè)定方法，其方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，精密度好，回收率高，適合于銀丹心腦通軟膠囊質(zhì)量評(píng)價(jià)。

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