革蘭氏陰性細(xì)菌感染患者血清內(nèi)毒素檢測(cè)臨床探討*

袁平宗，湯雪彪，王小龍，李傳達(dá)(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川內(nèi)江 641100)

革蘭氏陰性細(xì)菌(G-)是臨床上常見的致病菌，每年的院內(nèi)感染80%以上屬G-感染，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道[1]，細(xì)菌內(nèi)毒素(endotoxin ET)是導(dǎo)致患者死亡的重要原因。ET是G-菌細(xì)胞壁的主要成分，其化學(xué)成分為脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)，由類脂A、核心寡聚糖O及多肽側(cè)鏈組成[2]。ET能夠直接作用于人體，激活組織內(nèi)的炎性細(xì)胞和炎癥因子，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱并產(chǎn)生全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，繼而引起彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、休克、多臟器功能衰竭等嚴(yán)重的病理生理癥狀，危及生命[3]，病原菌培養(yǎng)檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，且操作繁瑣，靈敏度也較低，無法用于易感患者的篩查[4]，為此筆者根據(jù)革蘭氏陰性菌的特點(diǎn)，采用內(nèi)毒素動(dòng)態(tài)定量比濁檢測(cè)的方法對(duì)患者進(jìn)行G-菌感染的篩查，探討內(nèi)毒素檢測(cè)在G-菌感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 2014年1月～6月，內(nèi)江市第二人民醫(yī)院200例住院發(fā)熱患者，其中男性131例，女性69例，年齡35～89歲，平均年齡61.5±15.3歲，分別進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)和細(xì)菌培養(yǎng)。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器：細(xì)菌內(nèi)毒素分析儀(珠海迪耳生物工程有限公司提供)，BD血培養(yǎng)儀，37℃細(xì)菌培養(yǎng)箱。

1.2.2 試劑：血液細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑(珠海迪耳生物工程有限公司提供)；血培養(yǎng)瓶(BD公司提供)；細(xì)菌培養(yǎng)皿(安圖公司提供)；細(xì)菌鑒定板條(法國(guó)梅里埃提供)。

1.2.3 質(zhì)控品：內(nèi)毒素質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)參考值0.500 EU/ml，質(zhì)控結(jié)果為0.468 EU/ml。

1.3 方法

1.3.1 內(nèi)毒素檢測(cè)：采集早晨空腹靜脈血2 ml，按內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒說明書的要求處理標(biāo)本后采用內(nèi)毒素檢測(cè)儀進(jìn)行內(nèi)毒素水平檢測(cè)，操作嚴(yán)格按照儀器說明書進(jìn)行。

1.3.2 血培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)室收到血標(biāo)本后，將血培養(yǎng)瓶置全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中。當(dāng)標(biāo)本有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，儀器發(fā)出陽(yáng)性報(bào)警，抽取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種血瓊脂平板及麥康凱平板，置35℃二氧化碳培養(yǎng)箱18～24 h，同時(shí)作直接涂片革蘭染色、鏡檢，之后挑取1～3個(gè)菌落至2.0 ml無菌生理鹽水中，校正濁度至0.5麥?zhǔn)媳葷岫龋缓蠼臃N至鑒定藥敏板，上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

1.3.3 平板培養(yǎng)：細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采用無菌容器收集，將送檢標(biāo)本接種血平板，37℃培養(yǎng)18～24 h，將可疑菌落接種至血平板進(jìn)行純培養(yǎng)，同時(shí)做直接涂片革蘭染色、鏡檢，之后挑取1～3個(gè)菌落至2.0 ml無菌生理鹽水中，校正濁度至0.5麥?zhǔn)媳葷岫龋缓蠼臃N至鑒定藥敏板，上機(jī)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

1.4 ET結(jié)果判讀 0～0.030 EU/ml，無明顯內(nèi)毒素血癥；0.030～0.100 EU/ml，臨床觀察期；0.100～1.000 EU/ml，內(nèi)毒素血癥；>1.000 EU/ml，重度內(nèi)毒素血癥。

2 結(jié)果

2.1 200例標(biāo)本內(nèi)毒素和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果比較 送檢的200份標(biāo)本中，ET≥0.030 0 EU/ml共140例(占70.0%)，細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性42例(占18.7%)，其中G-菌24例(占10.7%)，G+菌15例(占6.7%)；在24例G-菌感染患者內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果均>0.115 EU/ml，ET水平明顯升高，15例G+菌感染患者內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果0.008～0.068 0 EU/ml，只有2例>0.030 EU/ml，結(jié)果見表1。

表1 200例內(nèi)毒素和細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果比較(EU/ml)

注：*革蘭陰性菌組與革蘭陽(yáng)性菌組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義t=28.23，P<0.05。

2．2 患者隨訪結(jié)果分析 培養(yǎng)確診革蘭陰性菌感染患者24例，經(jīng)抗菌藥物治療1周后，內(nèi)毒素定量檢測(cè)結(jié)果顯示，21例患者內(nèi)毒素水平：0.023～0.068 EU/ml，與治療前檢測(cè)結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.13，P<0.05)。

3 討論

臨床上革蘭氏陰性菌引起的敗血癥常常并發(fā)內(nèi)毒素血癥、休克肺、DIC、心臟抑制及口腔疾病等，死亡率為20%～30%[4]。有研究[5]表明內(nèi)毒素是一系列連鎖反應(yīng)及全身炎癥反應(yīng)的重要觸發(fā)劑、介導(dǎo)革蘭氏陰性菌膿毒癥的重要啟動(dòng)因子。通過調(diào)節(jié)蛋白或結(jié)合受體誘導(dǎo)宿主細(xì)胞因子的合成和釋放，從而激發(fā)機(jī)體一系列病理、生理改變，危害相當(dāng)大[6]。內(nèi)毒素是臨床醫(yī)生診斷和監(jiān)測(cè)病人革蘭氏陰性菌感染的重要參考指標(biāo)[7，8]。

本研究對(duì)200份細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果與內(nèi)毒素水平檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示：G-菌感染患者血液內(nèi)毒素水平顯著高于革蘭氏陽(yáng)性菌、真菌感染患者；內(nèi)毒素定量檢測(cè)結(jié)果與培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果的一致性較好。24例G-感染患者經(jīng)過1周抗生素治療后，21例G-菌感染患者的ET水平較治療前顯著下降，且下降幅度與患者的臨床癥狀緩解程度相一致。因此，ET水平檢測(cè)用于G-菌感染患者的療效評(píng)價(jià)有一定的價(jià)值[9]。研究還發(fā)現(xiàn)，200份標(biāo)本中，115份標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果為陰性，而內(nèi)毒素為陽(yáng)性，一方面是培養(yǎng)為假陰性：感染的細(xì)菌難以培養(yǎng)；感染的細(xì)菌量不夠；未能正確掌握采樣時(shí)機(jī)和頻率；培養(yǎng)基質(zhì)量和培養(yǎng)環(huán)境不符合要求；由于患者在抽血培養(yǎng)前已使用大量廣譜抗生素，血液中細(xì)菌已經(jīng)變異或者死亡；內(nèi)毒素血癥≠細(xì)菌感染(肝病或腸源性內(nèi)毒素也可引起內(nèi)毒素增高)[10]；另一方面內(nèi)毒素為假陽(yáng)性：操作環(huán)境及操作過程中污染；人血紅蛋白、球蛋白、抗凝血酶Ⅲ；某些抗生素如β-酰胺內(nèi)酯類、氨基糖苷類和喹諾酮類等患者均可導(dǎo)致內(nèi)毒素假陽(yáng)性結(jié)果，在實(shí)際工作中應(yīng)注意鑒別。

測(cè)定內(nèi)毒素可以作為細(xì)菌培養(yǎng)的重要補(bǔ)充，彌補(bǔ)血培養(yǎng)(G-菌)陽(yáng)性率低的缺陷；內(nèi)毒素水平檢測(cè)具有檢測(cè)速度更快、操作更簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，一般標(biāo)本送檢數(shù)小時(shí)后即可獲得檢測(cè)結(jié)果，指導(dǎo)臨床對(duì)細(xì)菌感染病人盡快合理使用抗生素提供理論依據(jù)。

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