革蘭氏陰性細菌感染患者血清內毒素檢測臨床探討*

袁平宗，湯雪彪，王小龍，李傳達(內江市第二人民醫院檢驗科，四川內江 641100)

革蘭氏陰性細菌(G-)是臨床上常見的致病菌，每年的院內感染80%以上屬G-感染，國內外文獻報道[1]，細菌內毒素(endotoxin ET)是導致患者死亡的重要原因。ET是G-菌細胞壁的主要成分，其化學成分為脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)，由類脂A、核心寡聚糖O及多肽側鏈組成[2]。ET能夠直接作用于人體，激活組織內的炎性細胞和炎癥因子，導致機體發熱并產生全身性炎癥反應綜合征(SIRS)，繼而引起彌散性血管內凝血(DIC)、休克、多臟器功能衰竭等嚴重的病理生理癥狀，危及生命[3]，病原菌培養檢測耗時長，且操作繁瑣，靈敏度也較低，無法用于易感患者的篩查[4]，為此筆者根據革蘭氏陰性菌的特點，采用內毒素動態定量比濁檢測的方法對患者進行G-菌感染的篩查，探討內毒素檢測在G-菌感染診斷中的應用價值，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2014年1月～6月，內江市第二人民醫院200例住院發熱患者，其中男性131例，女性69例，年齡35～89歲，平均年齡61.5±15.3歲，分別進行內毒素檢測和細菌培養。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器：細菌內毒素分析儀(珠海迪耳生物工程有限公司提供)，BD血培養儀，37℃細菌培養箱。

1.2.2 試劑：血液細菌內毒素檢測試劑(珠海迪耳生物工程有限公司提供)；血培養瓶(BD公司提供)；細菌培養皿(安圖公司提供)；細菌鑒定板條(法國梅里埃提供)。

1.2.3 質控品：內毒素質控標準參考值0.500 EU/ml，質控結果為0.468 EU/ml。

1.3 方法

1.3.1 內毒素檢測：采集早晨空腹靜脈血2 ml，按內毒素檢測試劑盒說明書的要求處理標本后采用內毒素檢測儀進行內毒素水平檢測，操作嚴格按照儀器說明書進行。

1.3.2 血培養：實驗室收到血標本后，將血培養瓶置全自動血培養儀中。當標本有細菌生長時，儀器發出陽性報警，抽取瓶內培養液轉種血瓊脂平板及麥康凱平板，置35℃二氧化碳培養箱18～24 h，同時作直接涂片革蘭染色、鏡檢，之后挑取1～3個菌落至2.0 ml無菌生理鹽水中，校正濁度至0.5麥氏比濁度，然后接種至鑒定藥敏板，上機進行細菌鑒定。

1.3.3 平板培養：細菌培養標本采用無菌容器收集，將送檢標本接種血平板，37℃培養18～24 h，將可疑菌落接種至血平板進行純培養，同時做直接涂片革蘭染色、鏡檢，之后挑取1～3個菌落至2.0 ml無菌生理鹽水中，校正濁度至0.5麥氏比濁度，然后接種至鑒定藥敏板，上機進行細菌鑒定。

1.4 ET結果判讀 0～0.030 EU/ml，無明顯內毒素血癥；0.030～0.100 EU/ml，臨床觀察期；0.100～1.000 EU/ml，內毒素血癥；>1.000 EU/ml，重度內毒素血癥。

2 結果

2.1 200例標本內毒素和細菌培養結果比較 送檢的200份標本中，ET≥0.030 0 EU/ml共140例(占70.0%)，細菌培養陽性42例(占18.7%)，其中G-菌24例(占10.7%)，G+菌15例(占6.7%)；在24例G-菌感染患者內毒素檢測結果均>0.115 EU/ml，ET水平明顯升高，15例G+菌感染患者內毒素檢測結果0.008～0.068 0 EU/ml，只有2例>0.030 EU/ml，結果見表1。

表1 200例內毒素和細菌培養結果比較(EU/ml)

注：*革蘭陰性菌組與革蘭陽性菌組比較，差異有統計學意義t=28.23，P<0.05。

2．2 患者隨訪結果分析 培養確診革蘭陰性菌感染患者24例，經抗菌藥物治療1周后，內毒素定量檢測結果顯示，21例患者內毒素水平：0.023～0.068 EU/ml，與治療前檢測結果比較差異有統計學意義(t=8.13，P<0.05)。

3 討論

臨床上革蘭氏陰性菌引起的敗血癥常常并發內毒素血癥、休克肺、DIC、心臟抑制及口腔疾病等，死亡率為20%～30%[4]。有研究[5]表明內毒素是一系列連鎖反應及全身炎癥反應的重要觸發劑、介導革蘭氏陰性菌膿毒癥的重要啟動因子。通過調節蛋白或結合受體誘導宿主細胞因子的合成和釋放，從而激發機體一系列病理、生理改變，危害相當大[6]。內毒素是臨床醫生診斷和監測病人革蘭氏陰性菌感染的重要參考指標[7，8]。

本研究對200份細菌培養檢測結果與內毒素水平檢測結果進行了比較，結果顯示：G-菌感染患者血液內毒素水平顯著高于革蘭氏陽性菌、真菌感染患者；內毒素定量檢測結果與培養檢測結果的一致性較好。24例G-感染患者經過1周抗生素治療后，21例G-菌感染患者的ET水平較治療前顯著下降，且下降幅度與患者的臨床癥狀緩解程度相一致。因此，ET水平檢測用于G-菌感染患者的療效評價有一定的價值[9]。研究還發現，200份標本中，115份標本培養結果為陰性，而內毒素為陽性，一方面是培養為假陰性：感染的細菌難以培養；感染的細菌量不夠；未能正確掌握采樣時機和頻率；培養基質量和培養環境不符合要求；由于患者在抽血培養前已使用大量廣譜抗生素，血液中細菌已經變異或者死亡；內毒素血癥≠細菌感染(肝病或腸源性內毒素也可引起內毒素增高)[10]；另一方面內毒素為假陽性：操作環境及操作過程中污染；人血紅蛋白、球蛋白、抗凝血酶Ⅲ；某些抗生素如β-酰胺內酯類、氨基糖苷類和喹諾酮類等患者均可導致內毒素假陽性結果，在實際工作中應注意鑒別。

測定內毒素可以作為細菌培養的重要補充，彌補血培養(G-菌)陽性率低的缺陷；內毒素水平檢測具有檢測速度更快、操作更簡便的優勢，一般標本送檢數小時后即可獲得檢測結果，指導臨床對細菌感染病人盡快合理使用抗生素提供理論依據。

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