肝癌組織中NF-κBp65的表達變化及意義

肝癌組織中NF-κBp65的表達變化及意義

陳增銀1,趙業民1,商和振1,史光軍2

(1青島市城陽區人民醫院,山東青島266300；2青島市市立醫院)

摘要：目的觀察核轉錄因子(NF)-κBp65在肝癌患者癌組織中的表達變化，并探討其意義。方法收集經手術切除的肝癌組織、癌旁組織及正常肝組織，采用免疫組化法檢測三種組織中NF-κBp65蛋白表達情況。結果 NF-κBp65蛋白在肝癌組織、癌旁組織、正常組織中的陽性表達率分別為60.67%、22.67%、12.00%，三組間兩兩比較，P均<0.05。HBsAg陽性與陰性肝癌組織中NF-κBp65陽性表達率分別為64.44%、26.67%，二者比較，P<0.05。NF-κBp65蛋白陽性表達與肝癌患者病理分級、淋巴結轉移有關(P均<0.05)。NF-κBp65陰性表達的肝癌患者生存時間分布好于NF-κBp65陽性表達者,但兩者生存率的差異無統計學意義(P>0.05)。結論 NF-κBp65在肝癌患者癌組織中表達明顯升高，且HBsAg陽性肝癌組織中的陽性表達率高于HBsAg陰性肝癌組織, NF-κBp65可能參與了肝癌的發生、發展

關鍵詞：肝腫瘤；肝癌；核轉錄因子；核轉錄因子-κBp65

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.003

中圖分類號：R735.7 文獻標志碼：A

基金項目：青島市衛生局課題(2007Y004)。

作者簡介：第一陳增銀(1981-)，男，主治醫師，碩士，主要研究方向為肝癌的臨床診治。E-mail：chzy8168@sina.com

作者簡介：通信史光軍(1966-)，男，主任醫師，博士，主要研究方向為肝癌的臨床診治及細胞移植治療肝癌。E-mail：sgjzp@hotmail.com

收稿日期：(2015-08-15)

Expression changes of NF-κBp65 in hepatocellular carcinoma tissues

and its clinical significance

CHENZeng-yin1, ZHAO Ye-min, SHANG He-zhen, SHI Guang-jun

(1QingdaoChengyangPeople'sHospital,Qingdao266300,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression changes of nuclear transcription factor (NF)-κBp65 in the hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and to explore its clinical significance. Methods The expression of NF-κBp65 protein was detected by immunohistochemistry in the resected HCC tissues, adjacent tissues and normal liver tissues through surgery. ResultsThe positive expression rates of NF-κBp65 protein in the HCC tissues, adjacent tissues and normal tissues were 60.67%, 22.67% and 12.00%, respectively. There were significant differences between each two groups (all P<0.05). The positive rates of NF-κBp65 in HCC tissues with positive or negative HBsAg were 64.44% and 26.67%, and the difference was statistically significant (P<0.05). The positive expression of NF-κBp65 protein was related with pathological grade and lymph node metastasis (all P<0.05). The survival time distribution of NF-κBp65 negative group was better than that of the NF-κBp65 positive group, but the difference was not significant (P>0.05). ConclusionsThe expression of NF-κBp65 was increased significantly in the carcinoma tissues of HCC patients, and the positive expression rate is high in HBV positive cancer tissues. NF-κBp65 may be involved in the occurrence and development of liver cancer.

Key words: liver neoplasms; liver carcinoma; nuclear transcription factor-κBp65

肝細胞性肝癌 (HCC)是一種病死率較高的惡性腫瘤，該病的發生、發展是多基因作用、多因素影響、多個階段遞進形成的一種生物學過程。我國乙型肝炎病毒 (HBV)感染是發生HCC的主要原因。核轉錄因子(NF)-κB是一種核蛋白因子，廣泛存于身體的多種細胞中,其參與多個生理、病理的基因調控過程，如身體的炎癥反應、免疫應答、細胞分裂、增殖及凋亡過程。該因子在腫瘤產生、增殖及轉移過程中有重要作用，NF-κB活化狀態可促進瘤細胞增殖、降低瘤細胞凋亡率、提升腫瘤組織毛細血管的生成并增強對瘤細胞的遠處轉移能力[1]。2010年1月～2013年12月，我們檢測了肝癌患者癌組織中NF-κBp65表達情況,探討其在HCC發生、增殖、轉移和浸潤過程中的作用。

1材料與方法

1.1材料收集2010～2013年青島市市立醫院與青島市城陽區人民醫院手術切除并經病理檢查證實的肝癌組織標本150份(肝癌組)，患者男105例、女45例，年齡31～72歲、中位年齡52歲。其中血清HBsAg陽性135例，HBsAg陰性15例。包膜完整55例，無包膜95例；有淋巴結轉移35例，無淋巴結轉移115例；腫瘤長徑<5 cm者59例，5～10 cm者61例，>10 cm者30例。分別取相應癌旁組織(距癌組織2 cm)150份(癌旁組)。取因非腫瘤因素行肝切除的肝組織25份為對照組，其中肝血管瘤旁肝組織20份，肝外傷肝組織5份。

1.2NF-κBp65蛋白表達檢測采用免疫組化染色，以PBS為空白對照。兔抗人NF-κBp65單克隆抗體購自上海滬震實業有限公司,免疫組化染色SP9000 通用型SP Kit 試劑盒、即用型快捷免疫組化Maxvision檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司。NF-κBp65免疫組化蛋白表達以細胞質和核膜中出現棕黃色細顆粒狀反應為陽性。高倍鏡下計數, 隨機選擇高倍視野3個，分別計數高倍視野中的100 個細胞,表達陽性產物的著色強度以Handel分級標準[2]判斷:陰性表達<5%,陽性表達≥5%。

1.3生存分析所有患者進行嚴格門診隨訪或電話隨訪，隨訪日期截至2015年6月。采用Kaplan-Meier 法計算生存時間。

1.4統計學方法采用SPSS12.0統計軟件。率的比較采用χ2檢驗?；颊呱鏁r間的比較用Log-Rank時序檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

NF-κBp65蛋白表達定位于癌旁組織、肝癌組織中的胞質, 部分胞核表達陽性。在感染HBV、未感染HBV肝癌及癌旁組織中皆可見NF-κBp65蛋白陽性表達。在135例HBsAg陽性肝癌組織中，NF-κBp65陽性表達率為64.44%，在15例HBsAg陰性肝癌組織中，NF-κBp65陽性表達率為26.67%，二者比較，P<0.05(χ2=7.452)。肝癌組、癌旁組、對照組NF-κBp65的陽性表達率分別為60.67%、22.67%、12.00%，三組比較，P<0.05(χ2=6.851)。NF-κBp65陽性表達率與肝癌的病理分級、腫瘤轉移相關，高分化、擴散能力差的瘤細胞該因子表達率低，低分化、擴散能力強的瘤細胞該因子表達率高(P<0.05),NF-κBp65蛋白陽性表達與腫瘤包膜大小不相關,見表1。

表1　 肝癌患者臨床病理參數與NF-κBp65蛋白

全組無失訪病例。NF-κBp65陽性表達和陰性表達HCC患者的Kaplan-Meier生存曲線見圖1。NF-κBp65陽性表達患者的生存曲線位于陰性表達者的曲線下方, HCC患者中NF-κBp65陽性表達者生存時間分布差于NF-κBp65陰性表達者,但兩者生存率比較差異無統計學意義(P=0.222)。

圖1　 不同NF-κBp65表達肝癌患者Kaplan-Meier

3討論

細胞的分化、增殖、生長受各種基因表達的調控，而核轉錄因子在基因表達過程中有開關的作用。癌基因的活化、抑癌基因的丟失、細胞凋亡的受抑對腫瘤發生、發展起關鍵作用。NF-κB自1986年被發現以來即引起重視[3]，該因子于B淋巴細胞中首先被發現，其與免疫蛋白中增強子的結合(輕鏈基因中增強子的B位點)能調控該免疫蛋白κ輕鏈基因轉錄，經過凝膠電泳遷移率實驗分析，提取了B淋巴細胞細胞核中能與免疫蛋白增強子(κ輕鏈基因的增強子的κB序列：GGGACTTTCC)結合的一種因子，我們稱之為NF-κB[4]。該因子是可被誘導的NF之一，在機體生理和病理活動中有重要作用，該因子與κB序列的特異性結合，促進κ輕鏈基因的表達，從而促進免疫蛋白的表達。在免疫應答、炎癥反應、細胞發生、發展及凋亡過程中均有核轉錄因子NF-κB的參與[5]。最近有學者認為，該因子的非正常活化與腫瘤的發生、發展關系密切[6]。之所以NF-κB的非正常活化與惡性腫瘤的發生、發展關系密切，是因該因子的氨基末端(約300多個氨基酸)與病毒癌基因v-Rel同源，其可抑制細胞凋亡，從而促進細胞的存活[7]。當部分因素使NF-κB的非正?；罨?，正常細胞的凋亡受抑制，細胞出現異常的克隆性增殖。此因子可啟動cyclinD1的轉錄，促進細胞由G1期向S期轉化，從而導致細胞增殖過度，最終出現細胞的惡性分化及轉變[8]。

NF-κB家族包括p65、p50、p52等，其中以p65最為常見。本實驗結果顯示，NF-κBp65在肝癌組織中陽性表達率高于癌旁組織, 該因子在HBV 陽性肝癌組織中的陽性表達率高于HBV陰性肝癌組織, 推測NF-κBp65可能參與了肝癌的發生,且在NF-κBp65致癌過程中HBV感染起了不可忽視的作用。HBV基因組含有四個開放讀碼框(ORF)，謂之S、C、P和X，最小的ORF即為HBX。HBX與很多肝臟疾患相關，包括慢性活動性肝炎、肝硬化和HCC。有研究顯示，HBX是NF-κB的激活劑，HBX啟動刺激NF-κB對抗Fas介導的細胞凋亡而使肝細胞存活，而NF-κB介導細胞凋亡的功能可被表達HBX細胞抑制[9]。在肝癌組中，不同大小腫瘤組織中NF-κB的表達并無明顯差別，但病理分級惡性程度越高，NF-κB陽性率越高，提示NF-κB與腫瘤的發生發展及預后密切相關。另外，NF-κBp65陽性表達HCC者的生存率低于陰性表達者, 雖經Log-Rank 時序檢驗該差異無統計學意義, 但HCC患者的實際生存情況還與術者的技術水平、腫瘤的發展階段、患者的一般狀況存在相關性。

總之，NF-κBp65在HCC患者癌組織中表達明顯升高，且該因子在HBV 陽性肝癌組織中的陽性表達率高于HBV陰性肝癌組織,NF-κBp65可能參與了肝癌的發生、發展。

參考文獻：

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