肺癌組織中SPARC與CD105表達(dá)變化及意義

肺癌組織中SPARC與CD105表達(dá)變化及意義

鄭英娟，張志華，張秀瓏，湯建華，張志林，馮平

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北張家口075000)

摘要：目的觀察富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)與CD105在肺癌組織中的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 選擇71例肺癌組織、30例癌旁正常肺組織，用免疫組化法檢測(cè)組織中SPARC陽性表達(dá)率，采用CD105單克隆抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)數(shù)微血管密度(MVD)。結(jié)果 SPARC在肺癌組織中的陽性表達(dá)率高于正常肺組織，肺癌組織中CD105標(biāo)記的MVD高于正常肺組織(P均<0.05)。SPARC陽性表達(dá)率、CD105標(biāo)記的MVD與肺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。SPARC陽性表達(dá)的肺癌組織中MVD高于陰性表達(dá)者(P<0.05)。結(jié)論 肺癌組織中SPARC、CD105呈高表達(dá)，SPARC陽性表達(dá)的肺癌組織中MVD高；聯(lián)合檢測(cè)SPARC與CD105對(duì)判斷肺癌的性質(zhì)及預(yù)后有重要意義。

關(guān)鍵詞：肺腫瘤；富含半胱氨酸酸性分泌蛋白；CD105；新生血管生成

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.024

中圖分類號(hào)：R734.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-05-02)

通信作者：張志華

新生血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，腫瘤在生長過程中打破了促血管生成和抑制血管生成各因素間的平衡，以滿足其自身血供的需要。肺癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均依賴血管生成。富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)具有抗黏附、抗增殖、抗腫瘤血管生成和調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)組成的作用。近年有學(xué)者認(rèn)為，SPARC有抑制腫瘤血管生成的作用。CD105是一種主要表達(dá)于新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞黏附分子，是更具有特異性的腫瘤新生血管標(biāo)志物。本研究觀察肺癌組織中SPARC及CD105表達(dá)情況，探討二者與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集本院2008～2012年收治的肺癌患者71例，均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)診斷。其中，男51例、女20例，年齡45～73歲、中位年齡59歲。按WHO(2000)肺癌分類標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)分級(jí)：高分化6例、中分化41例、低分化18例、未分化6例；組織病理學(xué)分類：非小細(xì)胞肺癌67例(腺癌50例、鱗狀上皮細(xì)胞癌15例、類癌1例、肉瘤樣癌1例)、小細(xì)胞癌4例；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期41例、Ⅲ、Ⅳ期30例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例、無轉(zhuǎn)移30例。同時(shí)收集30例相應(yīng)癌旁正常肺組織(距腫瘤切緣>5 cm)作為對(duì)照組。患者術(shù)前均未行放療、化療。

1.2SPARC、CD105表達(dá)檢測(cè)正常肺組織及肺癌組織標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，用免疫組化PV6000法染色。兔抗人SPARC多克隆抗體工作濃度1∶150，鼠抗人CD105單克隆抗體為即用型抗體，嚴(yán)格按說明書操作，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽性切片作陽性對(duì)照。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野進(jìn)行觀察。SPARC陽性表達(dá)結(jié)果判定：參照文獻(xiàn)[1]，根據(jù)著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分，兩項(xiàng)得分相乘后≥4分為陽性。采用CD105單克隆抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，計(jì)數(shù)微血管密度(MVD)。參照Weinder等[2]方法在低倍鏡下掃視整張切片，確定微血管最密集的5個(gè)視野，然后在400倍視野下計(jì)數(shù)所有染色的微血管，取5個(gè)視野計(jì)數(shù)結(jié)果的均數(shù)為該切片的微血管數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)凡呈現(xiàn)單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞群者只要其與鄰近的微血管、腫瘤細(xì)胞或其他結(jié)締組織分開,就作為1個(gè)微血管，但肌層較厚及管腔面積>8個(gè)紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。MVD以中位數(shù)[M(P25,P75) ]表示，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)及Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1正常肺組織及肺癌組織中SPARC、CD105表達(dá)比較SPARC主要表達(dá)于癌細(xì)胞周圍的間質(zhì)纖維細(xì)胞胞質(zhì)中，少數(shù)表達(dá)于胞核，在癌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞偶見陽性表達(dá)，陽性表現(xiàn)為棕黃色彌漫狀或顆粒狀。SPARC在肺癌組織、正常肺組織中的陽性表達(dá)率分別為56.34%(40/71)、20%(6/30)，二者比較，P<0.05。CD105主要表達(dá)于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色，排列多不規(guī)則，較少形成明顯管腔。在大血管不表達(dá)，在正常組織中表達(dá)極弱或不表達(dá)。在肺癌組織、正常組織中MVD分別為11.20(7.80，15.00)個(gè)/視野、0.30(0，0.80)個(gè)/視野，二者比較，P<0.05。

2.2肺癌組織中SPARC陽性表達(dá)、CD105表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見表1。

表1　 肺癌組織中SPARC陽性表達(dá)、CD105表達(dá)

2.3肺癌組織中SPARC陽性表達(dá)與MVD水平的關(guān)系SPARC陽性表達(dá)者M(jìn)VD中位數(shù)為9.60個(gè)/視野，陰性表達(dá)者為12.80個(gè)/視野，二者比較，P<0.05。

3討論

腫瘤生長需豐富的血液供應(yīng)，新生血管生成可為腫瘤提供氧氣、營養(yǎng)、促進(jìn)其生長、轉(zhuǎn)移的細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)移通道，腫瘤體積迅速增大，發(fā)生擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。肺癌如無新生血管生成來供應(yīng)營養(yǎng)，腫瘤直徑1～2 mm后將不再增長，腫瘤血管的生成機(jī)制在不同腫瘤細(xì)胞、不同器官生長點(diǎn)可能不同。腫瘤組織MVD是目前衡量新生血管的最主要量化指標(biāo)。

SPARC是一種富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，其與胚胎發(fā)育、血管生成、細(xì)胞更新、組織修復(fù)及重塑等均有密切關(guān)系。在不同組織不同微環(huán)境中，SPARC作用不同。SPARC在結(jié)直腸癌[6]、胃癌[7]、胰腺癌[8]、前列腺癌[9]、卵巢癌[10]等腫瘤組織中起抑制作用，在乳腺癌[11]、肝癌[12]等腫瘤組織中起促進(jìn)作用。但SPARC在肺癌中的作用仍不明確，研究結(jié)果不盡相同。本研究結(jié)果顯示，SPARC主要表達(dá)于癌細(xì)胞周圍的間質(zhì)纖維細(xì)胞胞質(zhì)中，在臨床分期越低、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的患者中其陽性表達(dá)率越高，考慮SPARC主要表達(dá)于間質(zhì)纖維細(xì)胞中，有可能起到維持腫瘤微環(huán)境的作用，進(jìn)而抑制肺癌進(jìn)展。隨著肺癌臨床分期與淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時(shí)，MVD逐漸增加，而相應(yīng)的SPARC陽性表達(dá)降低，在臨床早期、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移時(shí)，SPARC表達(dá)陽性時(shí)，MVD減少。提示肺癌組織中SPARC可能通過抑制新生血管生成來抑制肺癌的進(jìn)展。

CD105是一種同型二聚體的膜結(jié)合糖蛋白，可選擇性表達(dá)于增殖狀態(tài)的血管中[3]。在腫瘤新生血管構(gòu)筑的研究中發(fā)現(xiàn)，CD105僅在處于增殖狀態(tài)的腫瘤組織血管內(nèi)皮細(xì)胞即新生血管內(nèi)皮細(xì)胞上強(qiáng)表達(dá)，而在正常組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞上無表達(dá)或弱表達(dá)，CD105可準(zhǔn)確反映血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖狀態(tài)[4]。因此CD105主要標(biāo)記腫瘤新生血管。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CD105標(biāo)記的微血管較幼稚，多數(shù)微血管僅由1～2個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞組成，個(gè)別甚至尚未形成管腔，提示CD105標(biāo)記的多是剛形成的微血管。而且有研究報(bào)道CD105有促進(jìn)腫瘤血管生成的作用[5]。

綜上所述，SPARC在肺癌組織中的高表達(dá)可能有抑制腫瘤進(jìn)展的作用，肺癌組織中SPARC陽性表達(dá)者M(jìn)VD低，聯(lián)合檢測(cè)SPARC與CD105對(duì)判斷肺癌的性質(zhì)及預(yù)后有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1] Yiu GK, Chan WY, Ng SW, et al. SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine) induces apoptosis in ovarian cancer cells [J] .Am J Pathol, 2001,159(2):609-622.

[2] Weidner N, Carrall PR, Flax J. Tumor angiogenesis correlates w- ith metastasis in invasive prostate carcinoma [ J] .Am J Pathal, 1993,143(2):401-409.

[3] 顧金霞，張振新. CD105與惡性腫瘤的關(guān)系[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2015,21(12):16-18.

[4] 肖興國.胃腺癌組織中RhoC、CD105蛋白的表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(11):21-23.

[5] 崔亞艷,笪冀平，張杰，等.浸潤性肺腺癌中Endoglin(CD105)的表達(dá)和血管新生狀態(tài)研究[J].心肺血管病雜志,2013,32(1):71-74.

[6] Aoi W, Naito Y, Takaqi T, et al. A novel myokine secretedprotein acidic and rich in cysteine (SPARC),suppressescolon tumorigenesis via regular exercise[J]. Gut, 2013, 62(6):882-889.

[7] Lifeng W, Miling Y, Lihui S, et al. The role of SPARC protein expression in the progress of gastric cancer[J]. Pathol Oncol Res, 2012,18(3):697-702.

[8] 吳冬梅,賀修勝,郭杏丹,等.SPARC基因DNA甲基化與胰腺癌的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,14(16):3188-3190.

[9] Shin M, Mizokami A, Kim J, et al. Exogenous SPARC suppresses proliferation and migration of prostate cancer by interactingwith integrin β1[J]. Prostate, 2013,73(11):1159-1170.

[10] 謝一泓,鐘艷平,王琪,等.SPARC基因過表達(dá)對(duì)卵巢癌淋巴結(jié)高轉(zhuǎn)移細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2015,37(3):343-350.

[11] 孫孝媛,于國華,張居民.乳腺癌組織SPARC和MMP-2表達(dá)相關(guān)性研究[J].中華腫瘤防治雜志,2015,22(9): 674-681.

[12] 鄭向文,李文省,劉景峰.肝細(xì)胞肝癌組織中Bcl-2核表達(dá)和SPARC表達(dá)臨床意義的探討[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,23(24)：58-62.