2種外周血涂片血小板估測方法的評價

2種外周血涂片血小板估測方法的評價

朱建鋒，張莉，王蓓麗，郭瑋，潘柏申

(復旦大學附屬中山醫院檢驗科，上海 200032)

摘要：目的探討2種外周血涂片血小板估測方法在血小板減少標本中的臨床應用價值。方法收集227份乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血標本，采用Sysmex XE-2100全自動血液分析儀進行血小板計數，同時采用Sysmex SP1000i自動血液制片儀制作血涂片并染色，使用血涂片A、B方法進行血小板結果估測。2種血涂片法與血液分析儀法結果進行相關性與Bland-Altman一致性分析。結果血涂片A、B方法與血液分析儀法之間相關良好，相關系數分別為0.894、0.867， P<0.000 1；Bland-Altman分析表明2種方法與血液分析儀法無系統偏差，對血小板檢測結果具有較好的一致性。結論對血小板低值標本，血涂片法間接進行血小板估測具有直觀、簡便，且與血細胞分析法的結果相關性及一致性均較好，可用于血液分析儀血小板結果的復核，有一定的臨床應用價值。

關鍵詞：外周血涂片；血小板估測計數；全自動血液分析儀

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)10-1027-03R446.11

文獻標志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.015

Abstract:ObjectiveTo evaluate the clinical significance of 2 platelet estimation methods using peripheral blood smear in thrombocytopenia patients. MethodsA total of 227 ethylene diamine tetraacetic acid-K2 (EDTA-K2) anticoagulant blood samples were collected and performed by Sysmex XE-2100 automatic hematology analyzer. The blood smears were completed and stained by Sysmex SP1000i automatic blood smear instrument. Method A and B were used to estimate platelet count. The results of 2 platelet estimation methods were compared, and the correlations and Bland-Altman consistency analysis were performed. ResultsPlatelet counts from Method A and B showed correlation coefficients of 0.894 and 0.867 when compared with automatic hematology analyzer (P<0.000 1). Bland-Altman analysis showed that 2 methods and automatic hematology analyzer had no systematic bias, and it had consistency for platelet count. ConclusionsBlood smear platelet estimation shows good correlation and consistency with automatic hematology analyzer. It is useful for the verification of the low platelet results of automatic hematology analyzer in clinical practice.

作者簡介：朱建鋒，男，1977年生，主管技師，主要從事外周血與骨髓細胞形態學檢查。

通訊作者：潘柏申，聯系電話：021-64041990-2376。

收稿日期：(2014-12-25)

Evaluation of 2 platelet estimation methods using peripheral blood smearZHUJianfeng,ZHANGLi,WANGBeili,GUOWei,PANBaishen.(DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China)

Key words: Peripheral blood smear; Platelet estimation count; Automatic hematology analyzer

血小板計數作為血常規項目之一，其結果準確性對化學治療或血小板輸注的患者而言顯得十分重要，并為臨床診斷與治療決策提供依據，因此檢驗科與臨床都非常關心檢測的準確性。但目前自動血液分析儀在檢測血小板計數上存在一些方法學固有缺陷，以及一些影響血小板準確性的標本因素，尤其對需要采取臨床決策的低血小板計數值，血小板計數準確性顯得更為重要。我們探討2種間接的顯微鏡下外周血涂片估測血小板方法，將2種方法與自動血液分析儀結果進行對比，評價血小板估測法在血小板計數中的臨床價值。

材料和方法

一、材料

1. 對象收集復旦大學附屬中山醫院2014年5月至9月門診與住院血小板減少患者的乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標本231例，其中4例因在顯微鏡觀察血涂片時發現異常，未列入本次評價(2例血小板假性減低，1例巨大血小板，1例急性白血病)，本次實驗實際標本數量為227例，血小板范圍3×109/L至101×109/L之間。

2. 儀器與試劑Sysmex XE-2100全自動血液分析儀與SP1000i自動血液制片儀及其配套試劑，均為日本Sysmex 公司生產；Olympus CX-31型普通光學顯微鏡，購自日本Olympus公司；瑞氏-姬姆薩染色試劑，購自珠海貝索生物科技有限公司。

二、方法

1. 血液分析儀法Sysmex XE-2100全自動血液分析儀以電阻抗法原理檢測血小板，血液中的血細胞成分通過檢測通道時產生脈沖信號，根據白細胞、紅細胞和血小板的脈沖信號強弱歸類收集，計數2～20 fl的脈沖信號數值為血小板數值。2臺XE-2100儀器使用E-cal(Sysmex America Inc)校準，每日進行3個水平E-check(Sysmex America Inc)質控，在控。所有標本均于采集后4 h內完成檢驗。

2. 外周血涂片法SP1000i自動血液推片儀完成所有涂片標本的制作，每份標本制作2張血涂片，并由該儀器自動進行瑞氏-姬姆薩染色。血涂片由2位經驗豐富的檢驗工作人員(10年以上工作經驗)進行血小板的結果估測與形態觀察。2種評估法按照文獻報道的方法進行。分別為血涂片方法A：即傳統方法，選取紅細胞平均分布且細胞間無重疊區域計數10個油鏡視野(oil immersion field, OIF)下血小板總數，除以10即為平均血小板數 /OIF，乘以20 000得到血涂片的血小板估測值(單位：/μL)[1]；血涂片方法B：在油鏡視野下找到紅細胞平均分布且細胞間無重疊的區域，計數1 000個紅細胞的同時記錄血小板數值，求得血小板與紅細胞之比值，將此比值乘以Sysmex XE-2100檢測同一份標本的紅細胞總數，得到血小板估測值(單位：/μL)[2]。

三、統計學方法

實驗數據采用SPSS 17.0軟件進行相關分析及MedCalc 11.4.2.0 軟件進行Bland-Altman統計。

結果

一、相關性分析

血涂片方法A、B與血液分析儀法計數血小板結果相關性曲線分別見圖1, 2。血涂片A、B法與血液分析儀法比較，結果顯示相關系數分別為0.894，0.867，差異均有顯著的統計學意義(P<0.000 1)。兩者在估測血小板結果與血液分析儀均有較好的相關性。

二、Bland-Altman一致性分析

Bland-Altman一致性分析是一種定量資料的一致性分析方法，通過繪制Bland-Altman散點圖觀察2種方法的差值與均值之間的關系，從而進行一致性判斷[3-4]。圖3、4分別是本次研究的血涂片方法A、B與血液分析儀法計數血小板結果的Bland-Altman散點圖。從圖中可以看出，227個點中分別有9個點(9/227)與14個點(14/227)落在95%的一致性界限(Limits of agreement, LoA)以外，比例分別為4.0%和6.2%，均<10%。圖3顯示方法A與血液分析儀法差值的均數為7.34×103/μL，差值的標準差為12.56×103/μL，則95%一致性界限為7.34±1.96×12.56×103/μL，即(-17.27×103/μL，31.97×103/μL)。圖4顯示方法B與血液分析儀法差值的均數為2.12×103/μL，差值的標準差為13.02×103/μL，則95%一致性界限為2.12±1.96×13.02×103/μL，即(-23.40×103/μL，27.64×103/μL)。這些表明2種方法與血液分析儀法一致性較好。

圖1　血涂片方法A與血液分析儀法相關性曲線

圖2　血涂片方法B與血液分析儀法相關性曲線

圖3　血涂片A法與血液分析儀血液分析儀法

圖4　血涂片B法與血液分析儀血液分析儀法檢測血小板結果的Bland-Altman圖

討論

目前，全自動血液分析儀在血細胞計數應用中的優勢是簡單、快速、準確，是其它手工方法無法比擬的。但是血小板具有體積小、易黏附等特性，對此類血小板數量減少或形態異常的標本而言，血液分析儀對血小板計數的準確性往往存在一些不足，無論是阻抗法或光學法。此外血液中存在一些“非血小板顆粒”，小紅細胞與紅細胞碎片等情況，這些都是影響血液分析儀計數血小板準確與否的因素之一[5]。所以如何準確做好血小板的計數一直是檢驗科工作人員關注與急需解決的問題。

血液分析儀對血小板計數減少，尤其是極低值血小板標本，不能很好地反映血小板的真實數量，此時診斷血小板減少癥往往需要依靠顯微鏡血涂片觀察輔助。文獻報道血涂片法血小板計數與相差顯微鏡計數結果差別不大[6]。國內也有報道，認為儀器法對檢測血小板低值標本的可信度較差，應以血小板手工計數法復檢，以保證準確性[7]。近來有報道使用細胞成像系統進行血小板計數的估測研究[8-9]。本實驗采用血涂片方法來估測血小板數量，通過在顯微鏡下仔細辨認與識別血小板的形態，而后進行估測計數。我們對227例血小板減少標本，血液分析儀法計數血小板同時進行了2種血涂片方法估測。相關性與Bland-Altman分析可以看出2種血涂片血小板估測法與血液分析儀法的相關性很好，方法A相關系數略高于方法B，分別為0.894，0.867；Bland-Altman一致性分析顯示對超過95%一致性界限的點，分別為4.0%(9/227)與6.2%(14/227)，A法略好于B法，A法低于5%，表明2種方法與血液分析儀血液分析儀法具有較好的一致性。同時從操作上而言，A法計數10個OIF中血小板總數，除10換算成平均血小板數/OIF，乘20 000得到血小板估測值；而B法計數1 000個紅細胞的同時計數血小板數值，求得血小板/紅細胞比值，乘紅細胞總數得到血小板估測值。可見A法在實際操作中較B法簡便、省時，更利于年輕檢驗人員掌握操作，容易推廣。

血涂片鏡檢的另一優點是可直觀地觀察到巨大血小板、纖維蛋白絲、血小板假性聚集等，進而采取其它方法及時校正血小板計數，得到真實的血小板結果。此次實驗中我們還發現了乙二胺四乙酸二鉀引起的血小板假性減低2例，巨大血小板1例，急性白血病1例，對前2種情況分別采取枸櫞酸鈉抗凝管糾正法與網織通道檢測法，得到準確的血小板結果；而1例急性白血病也因此得到了及時收住入院診治。這些情況僅通過儀器重新復做血小板是無法解決的。此外，對血小板減低的標本進行血涂片血小板估測，可在一定程度減少標本的復做頻率，降低檢驗成本，并能加快檢驗周轉時間。

總之，血涂片估測血小板數量與儀器法相關性及一致性均較好，同時對血液分析儀有重要補充作用，是值得推廣應用的快速、簡便之方法。

參考文獻

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(本文編輯：范基農)