應用NCCLS EP10-A2文件初步評價唾液酸試劑性能

應用NCCLS EP10-A2文件初步評價唾液酸試劑性能

齊立民1，孫安吉2

(1.聊城市冠縣人民醫院，山東 聊城 252500；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江 寧波 315104)

摘要：目的利用美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP10-A2文件初步評價唾液酸(SA)試劑盒的臨床應用性能。 方法按照NCCLS EP10-A2文件規定，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序連續測定各濃度樣本，連續5 d，計算測定結果的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移。結果低、中、高濃度SA樣本偏差分別為0.1、0.2 和0.7 mg/L；總不精密度分別為0.76%、0.51%、0.53%；截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移分別為-0.273、1.006、-0.032、0.000、-0.005(-4.60.01)。結論SA試劑盒準確度、精密度良好，均在允許范圍內，線性達到標準，攜帶污染率較低，穩定性較好，能滿足臨床應用要求。

關鍵詞：唾液酸；EP10-A2文件；評價

中圖分類號：

文章編號：1673-8640(2015)10-1030-03R446.1

文獻標志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.016

作者簡介：齊立民，男，1977年生，主管技師，主要從事臨床生物化學檢驗工作。

收稿日期：(2014-11-27)

唾液酸(sialic acid，SA)是九碳糖神經氨酸衍生物的總稱，存在于各種組織細胞膜上，在細胞惡性轉化時起著特殊的作用，是一種廣泛、有效的腫瘤標志物[1-3]。為評估該項目在常規生化分析儀上應用的可行性，我們參照美國臨床實驗室標準化協會(the National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)EP10-A2(《定量臨床檢驗方法的初步評價：批準指南》)文件，對其試劑盒的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移[4-6]進行分析，初步評價其是否適用于臨床。

材料和方法

一、儀器與試劑

7180全自動生化分析儀由日本日立公司生產；SA試劑盒(批號：20130928)購自寧波美康生物科技股份有限公司。

二、分析樣本

樣本為寧波美康生物科技股份有限公司生產的定值質控品。低值樣本(批號：20130928)靶值為55 mg/L。高值樣本(批號：20130928)靶值為160 mg/L 。將上述高值樣本和低值樣本1∶1混合，得到中值樣本，靶值為107.5 mg/L。高、中、低值樣本按每天用量進行分裝，置2～8 ℃保存備用，測定前取出，室溫放置30 min后混勻使用。

三、方法

1.樣本測定根據 NCCLS EP10-A2文件，每天按中、高、低、中、中、低 、低、高、高、中的順序測定各濃度樣本一批，連續測定5 d。每批測定均為連續測定，第1個中值僅作為測定起始用，不納入統計，其余9個數據若任何1個不合格，則該批數據都棄掉，重新測定。

2.繪圖散點圖以標準品靶值(X)為橫坐標、實測值(Y)為縱坐標作圖；偏差圖以標準品靶值(X)為橫坐標、實測值與靶值的差值(Y-X)為縱坐標作圖；觀察線性和離群點情況。

3.偏差及總不精密度的允許范圍參照SA試劑生產商企業標準，偏差允許范圍設定為標準的1/2，即靶值±5%；總不精密度的允許范圍設定為標準的1/2，即5%。

四、統計學方法

采用Microsoft Excel 2002軟件進行統計分析。計算偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移。對截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移作回歸分析，其校正回歸值做t檢驗，當t>4.6或t<-4.6時，P<0.01為差異有統計學意義。

結果

一、繪圖、目測離群點和線性

SA試劑盒的偏差圖和線性趨勢圖見圖1、圖2，目測各濃度樣本測定結果無離群點，精密度良好，實測值與靶值間線性良好。

圖1　SA實測值與靶值的偏差圖

圖2　SA實測值與靶值的線性趨勢圖

二、數據分析

按照NCCLS EP10-A2文件所設計的數據處理表格要求進行計算，得出最后統計結果。

1.偏差評估以各濃度5 d的測定結果均值與其對應靶值之差計算偏差，偏差均未超過設定的±5%范圍，臨床均可接受。見表1。

表1　SA試劑盒偏差分析結果

2.總不精密度分析按照 EP10-A2文件提供的方法，計算總不精密度。各濃度總精密度均未超過允許誤差，臨床均可接受。見表2。

表2　SA試劑盒不精密度分析結果

3.測定結果多重回歸分析表每天結果進行回歸分析，計算每天測定結果的截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移，見表3。結果顯示截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移的差異均無統計學意義(-4.60.01)。

表3　SA試劑盒多元回歸分析匯總

討論

SA是一種廣泛、有效的腫瘤標志物[1-3]，本研究參照EP10-A2文件對其進行了初步評估，以探討其在臨床的應用價值。偏差評價結果顯示低、中、高濃度的絕對偏差均在允許偏差范圍之內，故其偏差是可接受的，并且多元回歸總結分析結果顯示斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之間，差異均無統計學意義(P>0.01)，說明試劑測定的準確度較好。總不精密度評價結果顯示低、中、高濃度樣本的總不精密度均低于最大允許總不精密度，說明其總不精密度也可以接受。多元回歸總結分析結果顯示攜帶污染、非線性的差異均無統計學意義(P>0.01)，試劑線性能力良好，攜帶污染率低，能較好地滿足臨床常規檢測要求。

稀土元素具有重要的指示性作用，可以判斷地層和礦體成因及物質來源[10，12]。據徐紅偉(2009)等研究，礦區蝕變巖稀土配分曲線與花崗巖接近一致，反映出二者在成因上存在密切關系。

與傳統的評價方案相比，EP10-A2文件提供的評價方法需要的數據少，時間短，可操作性強，能完成傳統評價方法不具備的非線性度和漂移度檢驗，提供了幫助實驗室對實驗方法或分析儀器進行線性、偏差、精密度等方面進行初步評價的一種簡單方法，但此文件評價方法的結果僅建立于初步評價的基礎之上，忽略了很多影響因素。SA是一種新的廣泛、有效的腫瘤標志物，因此通過 NCCLS EP-10文件的初步評價后應參考NCCLS的其他文件，如EP5、EP6、EP7及EP9等文件進一步對試劑盒的空白吸光度及變化率、檢測限、分析靈敏度、精密度、準確度、線性范圍、干擾試驗和穩定性等性能進行評價[7-11]。

參考文獻

[1]VARKI A. Sialic acids in human health and disease [J]. Trends Mol Med，2008，14(8)：351-360.

[2]張嘉寧，汪淑晶. 唾液酸生物學與人類健康和疾病[J]. 生命科學，2011，23(7)：678-684.

[3]劉沛，王舒，李變榮. 血清唾液酸在惡性腫瘤診斷中的臨床應用 [J]. 檢驗醫學與臨床，2012，9(6)：687-688.

[4]National Committee for Clinical Laboratory Standards．Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods [S]．EP10-A2，NCCLS，2002.

[5]程明剛，程靜，劉香萍，等．應用NCCLS EP10-A2文件初步評價定量鈣測定的性能[J]．熱帶醫學雜志，2010，10(11)：1289-1292.

[6]劉懷平，劉樹業．實驗室認可中封閉檢測系統的性能驗證及評價[J]．現代預防醫學，2011，38(19)：3981- 3984．

[7]張葵．定量檢測系統方法學性能驗證實驗的基本方法[J]．臨床檢驗雜志，2009，27(5)：321-323．

[8]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices； approved guideline[S]. EP5-A2，NCCLS，1999.

[9]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods： a statistical approach; approved guideline[S]. EP6-A，NCCLS，2003.

[10]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples： approved guideline[S]. EP9-A2，NCCLS，2002.

[11]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference testing in clinical chemistry： approved guideline[S]. EP7-A2，NCCLS，2002.

(本文編輯：龔曉霖)

上海市臨床檢驗二級管理網絡年中總結會召開

2015年度上海市臨床檢驗二級管理網絡年中總結會8月9日下午在南昌召開。因上海市臨床檢驗二級管理網絡各區縣負責人、中心各專業科室負責人均作為上海代表參加華東六省一市第六次檢驗醫學學術會議，故本次會議合理利用華東六省一市會議間隙舉辦。會議由中心主任助理兼質控業務科主任張健主持。本次會議主要內容包括各區縣二級管理網絡負責人做2015年度上半年二級管理網絡工作總結、2015年度下半年工作計劃報告以及對區域化集中檢測及獨立實驗室設置等一些焦點問題進行討論。

在各區縣總結中提到了一些基層醫院的共性問題，比如基層醫院對儀器性能驗證的方式方法不了解甚至無從下手，基層醫院對實驗室人員的能力評估內容較為簡單、空洞。就這點而言，中心在前期對基層醫院的調研中，已經了解并針對這些問題起草了一些配套文件，目前相關文件基本完稿，正待專家討論后及早發布以解決醫院的燃眉之急。此外，有部分區縣提出基層醫院信息系統落后，尚有較多醫院無LIS系統；民營醫院兩極分化嚴重，甚至有民營醫院實驗室偽造檢驗結果；部分醫院外送樣本的管理欠缺，危急值的項目多為外送等問題，這些問題都值得進一步探討和專題研究。

關于集中化檢測的問題，大部分區縣認為這是發展趨勢。從目前已運作的區縣來看效果很好，但也存在一定的問題。

各區縣都認為獨立實驗室作為醫療機構臨床實驗室的補充，有其存在的意義，但應加強管理。建議衛生監督部門加大監督力度，審批過程中應有技術部門介入。

(本刊編輯部)