聯用CD-CIK細胞和養肝解毒丸治療丙型肝炎的效果研究

李 楊

（山東省泰安市中醫醫院肝病科 山東 泰安 271000）

丙型肝炎是丙型病毒性肝炎的簡稱，多由丙型肝炎病毒感染所致，其主要的傳播途徑是輸血、針刺及吸毒，臨床治療的效果效差。在本次研究中，為了探討分析聯用CD-CIK細胞和養肝解毒丸治療丙型肝炎的臨床效果，筆者進行了以下研究：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本文的研究對象是近年來我院收治的160例丙型肝炎患者，我們將其隨機分為DC-CIK細胞組（40例）、養肝解毒丸組（40例）、DC-CIK細胞聯合養肝解毒丸組（40例）及長效干擾素組（40例），這4組患者的臨床表現及各項檢查結果均符合中華醫學會肝病學分會、中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會在《丙型肝炎防治指南》中制定的關于丙型肝炎的臨床診斷標準，并且這4組患者在年齡、性別、體重等一般資料方面的差異均不顯著（P＞0.05），不具有統計學意義，具有可比性。

1.2 中醫診斷及辨證標準

這160例患者的臨床癥狀均符合中國中醫藥學會在《病毒性肝炎中醫辨證標準》中制定的關于肝腎陰虛[1]的證候診斷標準，均伴有神疲乏力、口咽干燥、脅肋隱痛、腰膝酸軟、腹脹、皮膚存在蛛絲紋縷、面色晦暗等癥狀，舌質紅、少苔，脈弦細、弦緩、弦沉或弦澀。

1.3 方法

使用DC-CIK細胞為DC-CIK細胞組患者進行治療，使用養肝解毒丸為養肝解毒丸組患者進行治療，聯用DCCIK細胞和養肝解毒丸為DC-CIK細胞聯合養肝解毒丸組患者進行治療，使用長效干擾素為長效干擾素組患者進行治療，然后觀察對比這4組患者的臨床療效，并將對比的結果及4組患者的臨床資料進行回顧性的分析。DC-CIk細胞的制備方法及用法是：分離患者血液樣本中的外周血單個核細胞（PBMC），在無菌及嚴格監控的條件下進行細胞誘導和培養，獲得DC-CIK細胞，然后采用靜脈滴注的方式將增殖數百倍的DC-CIK細胞分3次回輸至患者的體內，每次滴注的間隔時間為1～2天。此后，每個月培養DCCIk細胞1次，分3次回輸至患者的體內，連續治療6個月為1個療程。養肝解毒丸（由泰安市中醫醫院自制，魯藥制字為Z0920030155）的用法及用量是：口服，9g/次，3次/日，連續服用6個月為1個療程。長效干擾素的用法及用量是：①使用180ug的聚乙二醇干擾素α-2a為患者進行皮下注射，每周注射1次，或使用1.5ug/kg體重的聚乙二醇干擾素α-2b為患者進行皮下注射，每周注射1次。②讓患者每日口服1000mg的利巴韋林片，連續服用6個月為1個療程。

1.4 觀察指標

①臨床療效。②肝功能指標。③安全性。

1.5 臨床療效判定標準

肝腎陰虛癥狀、體征記分，癥狀體征內容以病例選擇納入標準為準，記分（參照中國中醫藥學會內科肝病專業委員會，病毒性肝炎中醫辨證標準擬定）。西醫標準時：①治愈：HCV抗體陰轉，HCV-RNA＜103copy/ml，隨訪48周患者未復發。②顯效：HCV抗體未陰轉，HCV-RNA＜103copy/ml。③有效：HCV抗體未陰轉，HCV-RNA下降至103copy/ml-106copy/ml。④無效：HCV抗體未陰轉，HCV-RNA未下降或升高。

1.6 統計學方法

應用SPSS13.0 for windows統計學軟件對本次研究所得數據進行統計學分析，正態分布計量資料采用均數±標準差（X±S）表示，采用t檢驗，非正態分布計數資料采用例數或百分率表示，采用X2檢驗，當P＜0.05時，視為差異顯著，具有統計學意義。

2 結果

2.1 4組患者臨床療效的比較

DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者治療的總有效率為82.5%，DC-CIk細胞組患者治療的總有效率為75.0%，養肝解毒丸組患者治療的總有效率為32.5%，長效干擾素組患者治療的總有效率為40.0%。DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者的臨床療效明顯優于其他三組患者，差異顯著（P＜0.05），具有統計學意義。詳情見表1。

表1 4組患者臨床療效的比較

2.2 4組患者治療前后各項肝功能指標的比較

在治療前，4組患者各項肝功能指標之間的差異均不顯著（P＞0.05），不具有統計學意義。經過一段時間的治療，這4組患者的各項肝功能指標較治療前均有明顯的改善，且DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者各項肝功能指標的改善程度更為明顯，差異顯著（P＜0.05），具有統計學意義。詳情見表2。

表2 4組患者治療前后各項肝功能指標的比較

2.3 安全性分析

DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者、DC-CIk細胞組患者及養肝解毒丸組患者的甲狀腺功能、血糖水平均正常，而長效干擾素組患者中有1例患者出現了血糖升高的情況、有2例患者出現了甲狀腺功能亢進的情況。

3 討論

3.1 DC-CIK細胞對丙型肝炎的治療機制

DC-CIK療法是指將DC-CIK細胞（即DC細胞和CIK細胞）在人體外進行培養，然后回輸給患者的一種治療方法。嚴格地說，該方法最終的治療效應細胞是經DC體外活化的CIK細胞。多項研究表明，DC細胞與CIK細胞具有協同作用，將二者共同孵育后，DC細胞表面的刺激分子的表達及抗原遞呈能力均明顯提高，而CIK細胞的增殖能力和體內外細胞毒活性也顯著提高，因此，與單獨的CIK細胞相比，DC-CIK細胞的治療效果更佳。CIK細胞治療屬于自體免疫細胞治療范疇，回輸后無排斥反應；此外，經過體外培養的CIK細胞對病毒感染細胞或腫瘤細胞具有很強的細胞毒作用，還可以通過分泌大量的細胞因子，如IL-2、IL-6以及IFN-r等調節機體的免疫反應。早期CIK細胞主要應用于臨床上各種腫瘤的治療，包括肝癌、肺癌、淋巴瘤等[2-4]。近期研究表明CIK細胞對慢性乙型肝炎、慢性丙肝都具有良好的療效[5-6]。據統計，目前全世界約有1.7億人感染HCV。70%的HCV感染者會轉為慢性感染，并在長期的慢性炎癥作用下產生肝纖維化，最終形成肝硬化甚至肝癌[7]。這主要由于HCV作為一種RNA病毒，在復制過程中經常發生錯誤的“拼寫檢查”。與DNA病毒相比較，只有少數RNA病毒可以被完全無誤地讀取和復制。所以，HCV的變異速度遠遠大于HBV，這就使得HCV可以輕而易舉地逃避免疫系統“追擊”，并在與機體長期 －的相互作用中導致免疫系統的耗竭（exhausted）或者失能（anergy）。研究表明，HCV在感染早期可以迅速復制，產生的結構蛋白能夠抑制宿主DC和NK細胞的活化，無法產生足夠強度的天然免疫反應[8-10]，進而影響到適應性免疫的應答。另外，HCV的高變異性可以迅速地逃避機體產生的特異性免疫應答，使得機體針對病毒的免疫反應無法被充分調動[11-12]。所以尋找可以重新激活免疫系統的方法顯得尤為重要。CIK細胞誘導培養方案可以提高培養體系中CD3+CD8+、CD3+CD56+細胞的比例，增強其分泌IFN-r和脫顆粒（CD107a）的能力。CD3+CD8+以及CD3+CD56+細胞具有很強的抗病毒作用，這主要通過細胞裂解和非裂解兩個途徑。對于細胞裂解途徑，效應細胞通過分泌各種顆粒酶，穿孔素直接殺傷、裂解靶細胞，從而破壞HCV感染、復制的場所；而在非裂解途徑中，效應細胞分泌的IFN-r可以作用于被感染的肝細胞，通過一系 列細胞內信號途徑，抑制HCV在肝細胞內的復制過程[13]。另外，CIK技術通過CD3+CD8+以及CD3+CD56+細胞分泌大量促炎因子，包括IFN-r、IL-6，還具有重新調動免疫學反應的作用。

3.2 養肝解毒丸的組方意義

養肝解毒丸以扶正、解毒、化瘀為配伍原則，所使用的藥物主要有熟地、敗醬草、山萸肉、山藥、赤靈芝、丹皮、夏枯草、苡米、砂仁等，具有滋補肝腎、祛毒化瘀的功效，其中熟地、敗醬草為君藥，具有補肝腎、解毒邪的功效；山萸肉、山藥、赤靈芝、夏枯草為臣藥，具有助君藥滋補肝腎、扶正祛毒的功效；丹皮、苡米為佐藥，具有助君藥清血中虛熱、引藥入血、滋補肝腎、活血化瘀的功效；砂仁為使藥，具有免除滋補藥的副作用（妨害消化、減低食欲）、引熟地歸腎的功效，可謂一舉兩得。

本次研究結果顯示，經過一段時間的治療，這4組患者的各項肝功能指標較治療前均有明顯的改善，且DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者各項肝功能指標的改善程度更為明顯，差異顯著（P＜0.05），具有統計學意義。DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者的臨床療效明顯優于其他三組患者，差異顯著（P＜0.05），具有統計學意義。DC-CIk細胞聯合養肝解毒丸組患者、DC-CIk細胞組患者及養肝解毒丸組患者的甲狀腺功能、血糖水平均正常，而長效干擾素組患者中有1例患者出現了血糖升高的情況、有2例患者出現了甲狀腺功能亢進的情況。

綜上所述，聯用CD-CIK細胞和養肝解毒丸治療丙型肝炎的臨床效果顯著，值得在臨床上推廣應用。

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