淺析可影響抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的因素

胡 艷 李曉紅

（成都市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川 成都 610031）

抗凝血酶Ⅲ是人體內(nèi)重要的天然抗凝蛋白，其作為血液中最重要的活性凝血因子阻礙因子，具有凝固血液和溶解纖維蛋白的作用[1]。臨床研究證實(shí)，人體血液中抗凝血酶Ⅲ的活性可因其罹患不同的疾病而發(fā)生變化[2]。因此，檢測(cè)患者抗凝血酶Ⅲ的活性對(duì)于評(píng)估其身體的出、凝血狀態(tài)、檢測(cè)其病情、判斷其預(yù)后等具有重要的意義。最新的臨床實(shí)踐表明，血漿樣本的存放溫度和存放時(shí)間可影響其抗凝血酶Ⅲ的活性。為了進(jìn)一步探討可影響抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的因素，我院對(duì)近年來(lái)在我院進(jìn)行健康體檢的38例健康人血漿樣本的抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧性研究。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究的對(duì)象為2015年3月～2016年3月期間在我院進(jìn)行健康體檢的38例健康人血漿樣本的抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果。

1.2 研究方法 本次研究所使用的儀器和試劑主要包括：由張家港市銳騰機(jī)械制造有限公司提供的離心機(jī)，由上海涵飛醫(yī)療器械有限公司提供的全自動(dòng)凝血分析儀及其配套的實(shí)驗(yàn)試劑、質(zhì)控血漿、抗凝血酶Ⅲ（批號(hào)：1612054）和PC（protein.C，蛋白C，批號(hào)：124596）。本次研究所使用的質(zhì)控品是由上海涵飛醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的正常質(zhì)控品和病理質(zhì)控品（質(zhì)控品批號(hào)：150485）。質(zhì)控品每天隨血漿樣本一起進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果需在質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)方可進(jìn)行試驗(yàn)，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。我院使用含有109 mmon/L枸櫞酸鈉抗凝劑的定量真空采血管采集患者的肘部靜脈血3 ml，患者的肘靜脈血量與抗凝劑的比例為9：1。將患者的肘靜脈血與抗凝劑充分混合后，置于離心機(jī)中，用3000 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，操作10 min后分離出血漿。采用全自動(dòng)凝血分析儀對(duì)血漿樣本中抗凝血酶Ⅲ的活性進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)。然后，將每例血漿樣本分為3份，分別在常溫（20℃～25℃）、4℃和-20℃的條件下密封保存，并在放置4h、12h、24h、7d和14d時(shí)分別對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ的活性檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 我們采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)P＜0.05時(shí)視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在常溫條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響 在常溫條件下，血漿樣本在放置4h、12h和24h時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血漿樣本在放置7d和14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均明顯弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳情見(jiàn)表1。

表1 在常溫條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響（±s）

表1 在常溫條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響（±s）

注：與即時(shí)檢測(cè)相比，#P＞0.05、*P＜0.05。

時(shí)間 n 抗凝血酶Ⅲ的活性（mg/L）即時(shí)檢測(cè) 38 110.8±11.7 4h 38 107.3±10.5#12h 38 104.2±11.3#24h 38 102.2±12.7#7d 38 92.8±9.85*14d 38 83.5±10.2*

2.2 在4℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響 在4℃的條件下，血漿樣本在放置4h、12h、24h和7d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血漿樣本在放置14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果明顯弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。詳情見(jiàn)表2。

表2 在4℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的影響（±s）

表2 在4℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的影響（±s）

注：與即時(shí)檢測(cè)相比，#P＞0.05、*P＜0.05。

時(shí)間 n 抗凝血酶Ⅲ的活性（mg/L）即時(shí)檢測(cè) 38 110.8±11.7 4h 38 108.9±12.4#12h 38 107.2±11.9#24h 38 106.9±10.5#7d 38 107.2±10.8#14d 38 91.7±9.76*

2.3 在-20℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響 在-20℃的條件下，血漿樣本在放置4h、12h、24h、7d和14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。詳情見(jiàn)表3。

表3 在-20℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響（±s）

表3 在-20℃條件下血漿樣本的放置時(shí)間對(duì)其中抗凝血酶Ⅲ活性的影響（±s）

注：與即時(shí)檢測(cè)相比，*P＞0.05。

時(shí)間 n 抗凝血酶Ⅲ的活性（mg/L）即時(shí)檢測(cè) 38 110.8±11.7 4h 38 109.8±11.2*12h 38 110.2±12.4*24h 38 109.5±11.8*7d 38 111.2±9.74*14d 38 110.5±10.6*

2.4 在血漿樣本存放時(shí)間相同的條件下，存放的溫度越低其中抗凝血酶Ⅲ的活性越強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳情見(jiàn)表1、表2、表3。

3 討論

抗凝血酶Ⅲ是人體內(nèi)重要的天然抗凝蛋白。抗凝血酶Ⅲ作為血液中最重要的活性凝血因子阻礙因子，具有凝固血液和溶解纖維蛋白的作用。人體血液中抗凝血酶Ⅲ的活性可因其罹患不同的疾病而發(fā)生變化。臨床研究證實(shí)，抗凝血酶Ⅲ活性的增高主要見(jiàn)于血友病、白血病、再生障礙性貧血等疾病的急性出血期。抗凝血酶Ⅲ活性的下降主要見(jiàn)于血栓栓塞性疾病[3-5]。因此，檢測(cè)患者抗凝血酶Ⅲ的活性對(duì)于評(píng)估其身體的出、凝血狀態(tài)、檢測(cè)其病情、判定其預(yù)后等具有重要的意義[6]。我院開(kāi)展抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的臨床科室較多，包括血管外科、血液科、神經(jīng)內(nèi)科、神經(jīng)外科等。由于各臨床科室血漿樣本采集的時(shí)間缺乏統(tǒng)一性，因此存在著血漿樣本數(shù)量多、送檢不及時(shí)、存放不合理等情況。這些情況均可影響進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果。為了探討可影響抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的因素，我院對(duì)近年來(lái)在我院進(jìn)行健康體檢的38例健康人的血漿樣本進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ的活性檢測(cè)。本次研究的結(jié)果顯示，在常溫條件下，血漿樣本在放置4h、12h和24h時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血漿樣本在放置7d和14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均明顯弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在4℃的條件下，血漿樣本在放置4h、12h、24h和7d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血漿樣本在放置14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果明顯弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在-20℃的條件下，血漿樣本在放置4h、12h、24h、7d和14d時(shí)對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)的結(jié)果均弱于即時(shí)檢測(cè)時(shí)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在血漿樣本存放時(shí)間相同的條件下，存放的溫度越低其中抗凝血酶Ⅲ的活性越強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這說(shuō)明，在常溫條件下抗凝血酶Ⅲ的活性可隨血漿樣本放置時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱，但在24h內(nèi)無(wú)明顯變化，在放置7d后其活性會(huì)顯著降低。在4℃的條件下，血漿樣本放置14d時(shí)其中抗凝血酶Ⅲ的活性可顯著降低。在-20℃的條件下，血漿樣本在放置14d內(nèi)其中抗凝血酶Ⅲ的活性無(wú)明顯變化。因此，在采集患者的血漿樣本后，若不能即時(shí)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，在室溫條件下放置的時(shí)間不宜超過(guò)24h。在4℃的條件下，血漿樣本可放置的時(shí)間最長(zhǎng)為7d，而在-20℃的條件下，血漿樣本可放置14d。

綜上所述，血漿樣本的存放溫度和存放時(shí)間是影響其抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的重要因素。因此，對(duì)血漿樣本進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)或低溫保存有利于保證其抗凝血酶Ⅲ活性檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1] 曹海軍,李長(zhǎng)清,王宗奎，等.不同吸附體系及因素水平對(duì)PCC中4類(lèi)抗凝蛋白的影響研究[J].中國(guó)輸血雜志,2012,25(12):1283-1287.

[2] 馮厚梅,李強(qiáng),許偉珊,陳東妙,鄭磊. 改良Bethesda方法、改良Nijmegen方法和空白法檢測(cè)凝血因子Ⅷ抑制物及其影響因素[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,15(04):592-595.

[3] 曹海軍,李志雄,葉生亮，等.洗脫條件及其因素對(duì)凝血酶原復(fù)合物有效成分的影響[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(4):349-353.

[4] 李蕾,王培昌.標(biāo)本存放溫度和時(shí)間對(duì)血漿中抗凝蛋白活性的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2015,09(17):2533-2534.

[5] 田倩,曹海軍,曹雅，等.人凝血酶原復(fù)合物中凝血因子活性測(cè)定的影響因素研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,2014,14(2):17-19.

[6] 劉曉薇,謝一舟,盧奎林,陳品全,黃潔,朱玥,席德慧. 人抗凝血酶Ⅲ效價(jià)檢測(cè)方法驗(yàn)證及應(yīng)用[J]. 生物技術(shù)世界,2016,06(02):169-170.