抗菌肽來源、分類方式、生物學活性、作用機制及應用研究進展

劉秀，郭中坤，王可洲

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抗菌肽來源、分類方式、生物學活性、作用機制及應用研究進展

劉秀，郭中坤，王可洲

近年來，抗生素的濫用引發大量耐藥菌株產生、抗生素療效下降等一系列問題，嚴重威脅著人類和動物的健康。作為抗生素的一類可能替代物，抗菌肽（antimicrobial peptides，AMPs）具有廣譜抗菌活性，對部分病毒、寄生蟲、腫瘤細胞等也具有抑殺作用，且不易產生耐藥性，在醫學、獸醫學和生命科學等研究領域有著良好的應用前景。本文從抗菌肽的來源、分類方式、生物學活性、作用機制和應用研究等幾個方面，綜合闡述了國內外關于抗菌肽的研究動態。

抗菌肽又名抗微生物肽，是生物機體天然免疫系統的重要組成部分，是一類在自然界生物中廣泛存在的，分子組成通常小于 100 個氨基酸，具有抗細菌、抗真菌等多種生物學活性小分子多肽的統稱[1-2]。1972 年，瑞典學者 Boman 等[3]在對果蠅的相關研究中首先發現并報道了一類有抗菌活性的多肽分子。隨后，研究人員從經大腸桿菌刺激的惜古比天蠶中獲得第一種真正的 AMPs——天蠶素（cecropin）[4]。資料顯示，截至目前，文獻已報道的 AMPs 多達 2000 余種。

研究表明，多數 AMPs 不僅對細菌、真菌和抗寄生蟲具有一定的抑制作用，而且對包膜病毒、腫瘤細胞也有一定的抑殺作用，具有較廣的生物學活性，且不易引發相應的耐藥性[5]。因此，AMPs 被譽為“天然超級抗生素”。

1 天然 AMPs 的來源

自 20 世紀 70 年代以來，相關學者相繼在昆蟲、甲殼動物、軟體動物、兩棲動物、哺乳動物、人、植物等生物體內研究發現類似的具有抗菌活性的多肽。

1.1 植物來源 AMPs

由于植物不具備哺乳動物機體內的特異性免疫系統，在其生長過程中遭受病原微生物侵襲時，非特異性免疫防御系統的作用顯得尤為重要[6]。而 AMPs 就是該系統發揮防御作用的一類重要分子。植物機體在遭受生物侵襲或非生物條件刺激時，能迅速產生一類對入侵病原生物具有抑制或殺滅作用的活性成分——AMPs[7]。據報道，相關學者根據氨基酸序列及其二級結構的不同，將植物源AMPs 分為 9 類：包括硫素、植物防御素、轉脂蛋白、橡膠素、打結素、鳳仙花素、薺菜素、蛻皮素和環肽[8]。

1.2 動物來源 AMPs

動物源 AMPs 是動物免疫防御系統的重要組成部分，是動物機體為應對外源性病原體的致病作用，在外界條件誘導下產生的免疫防御性活性成分。作為天然免疫系統的重要效應分子，動物源 AMPs 除擔負著廣譜抗菌職能之外，在體內還發揮著多種多樣的免疫調節作用，又被稱為宿主防御肽。根據其物種來源，動物源 AMPs 可被分為無脊椎動物源和脊椎動物源 AMPs 兩大類[9]。

1.2.1 無脊椎動物源 AMPs 無脊椎動物種類繁多，約占動物物種種類總數的 95%；而昆蟲即為其中的第一大類。而且由于昆蟲對外界的環境具有極強的適應性和防御能力，在世界上的分布也最為廣泛。昆蟲 AMPs 是昆蟲在受到外界刺激或感染后，由體內血淋巴細胞合成分泌的一類具有分子量小、易合成、不易形成耐藥性等特點的小分子堿性多肽[10]；該類堿性多肽對多種致病菌、真菌、病毒等均有抑殺作用，但不會對生物體的正常細胞造成破壞[11]。資料顯示，截至目前，被報道的昆蟲 AMPs 已有 200 余種。根據其氨基酸序列和結構特點，將昆蟲 AMPs 主要分為分子內二硫鍵類、富含甘氨酸類、富含脯氨酸類和 α 螺旋兩性分子類[2]。

1.2.2 脊椎動物源 AMPs Cathelicidins 和防御素是迄今為止在哺乳動物體內分離獲得的主要的兩大類 AMPs[12]。其中，脊椎動物 cathelicidins 家族 AMPs 的抗菌譜更廣、抗菌活性更高，且細胞毒性較低，不易引發機體細胞的溶血，在新型抗菌藥物研發領域中具有廣闊的應用前景[13]。防御素是天然免疫系統中具有廣譜抗菌活性的一類重要組成部分，在人類 AMPs 中的種類也最為豐富。近年來，隨著生物信息學和分子生物學技術的廣泛應用，研究人員在對多種動物基因組測序和分析中發現并報道了大量新型 AMPs。目前，學者僅在豬體內發現的具有明確序列的 AMPs 已達 30 余種；實驗表明，這些 AMPs 均具有良好的免疫調節功能和廣譜抗菌活性，但對真核細胞沒有毒性或具有較弱的細胞毒性[14]。在許多無尾目類動物（青蛙和蟾蜍）的表皮分泌物中，也發現了豐富的具有廣譜抗菌活性的多肽[15]。

1.3 微生物來源 AMPs

目前，微生物來源 AMPs 被學者分為源自細菌的AMPs——細菌素（bacteriocins）和源自病毒的 AMPs 兩大類。細菌素是一類由 G+和 G-細菌核糖體合成的具有抑菌活性的小分子多肽，在各種環境條件下和細菌的各個生長階段均能發揮抗菌作用。研究表明，微生物來源的 AMPs 的種類和數量相對較少，且細菌素的種類多于病毒來源的 AMPs。G+菌可產生糖肽、脂肽和環形肽等典型窄譜 AMPs，如乳鏈菌肽、多粘菌素、桿菌肽等；其中，短桿菌肽 S 和多粘菌素為一類帶有高正電荷的兩親性 AMPs[16]。據報道，多粘類芽孢桿菌 CP7 菌株能夠產生包括抗 G+菌的cpacin 抗菌肽在內的多種抗菌活性物質，是一種具有廣譜抗病原菌活性的拮抗性細菌[17]。

資料顯示，目前已發現病毒源 AMPs 種類相對較少。其中，慢病毒跨膜蛋白的 C-端富含精氨酸的 AMPs為一種具有抗菌活性和細胞毒性的強兩親性多肽[18]。源自丙型肝炎病毒（HCV）NS5A 的 α 螺旋肽（C5A）可以使其在細胞外和細胞內感染顆粒失活，對 HCV 的從頭感染及其進行性感染具有阻礙和控制作用[19]。

1.4 人工合成抗菌蛋白

資料顯示，盡管天然 AMPs 在多種動物的特定組織中廣泛存在，但含量較低，化學合成成本又較高，制約著 AMPs 進一步的開發和應用。隨著基因工程技術的成熟和發展，采用基因工程手段實現重組 AMPs（rAMPs）的生物合成正逐漸成為抗菌蛋白研究的重要途徑之一。近年來，相關學者借助計算機生物信息預測等相關軟件輔助技術，設計和優化抗菌蛋白編碼序列，獲得一系列改良型重組抗菌肽/抗菌蛋白，并在臨床試驗中逐漸應用開來[20]。楊麗敏等[21]采用 Java 技術，對 NCBI 中已有的 AMPs 序列重新進行剪接，并利用計算機技術對獲得的新型 AMPs 的活性和功能進行模擬預測，大幅降低了天然抗菌肽/抗菌蛋白的改造成本。

為解決部分 AMPs 空間結構不穩定和具有溶血活性等相關問題，研究人員嘗試通過替換 AMPs 分子內的部分氨基酸、改造其分子結構等方法進行相關試驗研究，以增強其抗菌活性、減少其免疫反應。Hicks 等[22]研究發現，一些含有由兩種非天然氨基酸四氫異喹啉羧酸（Tic）和八氫吲哚-2-羧酸（Oic）組成的二肽單元肽鏈能與細菌細胞膜的不同組成部分相結合，從而發揮較強的殺菌效果。另有研究發現，改變 AMPs 中某些氨基酸的含量也能進一步增強 AMPs 的殺菌活性，并且還有一定的降低溶血反應的作用[23]。

2 AMPs 的分類方式

AMPs 在分布、結構和生物學活性等方面存在著多樣性，因此人們可采用多種分類方式對其進行分類。第一種，根據 AMPs 的來源不同，將其分為動物源、植物源和微生物源 AMPs；第二種，根據其作用對象不同，將其分為抗細菌、抗真菌、抗病毒、抗腫瘤等 AMPs；第三種，根據其所含氨基酸的種類不同，將其分為富含脯氨酸殘基的蛙皮素（magainin）、天蠶素，富含 Cys 殘基的防御素和富含 Gly 殘基的蜂毒素（melittin）[24]；第四種，根據 AMPs 的空間結構和氨基酸組成，將其分為 α 螺旋、β 折疊、富含 Cys 殘基或其他某些規則氨基酸殘基的 AMPs[25]。其中，α 螺旋 AMPs 的分布最為廣泛，受到研究人員的密切關注。

3 AMPs 的生物學活性

AMPs 結構的多樣性從某種程度上決定了其生物學活性的多樣性。研究表明，AMPs 不僅對 G+細菌和 G-細菌具有較高的抗菌活性，而且對部分真菌、病毒、腫瘤細胞和原蟲等也具有一定的選擇性殺傷作用；但其對正常的哺乳動物細胞未見有明顯毒副作用[26]。

3.1 廣譜抗細菌活性

研究表明，在瓊脂糖彌散法抑菌活性測定試驗中，AMPs 可同時抑制一種或多種混合常見 G+/G-細菌（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌等）生長[27]。AMPs 擁有比傳統抗生素抗菌譜更廣的抑菌活性，引起了研究人員越來越多的關注。

資料顯示，兔腸源抗菌蛋白對 9 種測試菌株的殺菌率為 78% ~ 98%，具有較強的抗菌效果[28]。王煒和任偉宏[29]在對天蠶素多肽分子生物活性的研究中發現：天蠶素多肽分子可有效抑制標準大腸埃希菌株（ATCC25922 株）及多重耐藥菌株（臨床分離株）的生長；盡管天蠶素多肽分子對大腸埃希菌多重耐藥菌株（臨床分離株）的抑制效果相對較弱，但其抑菌活性可保持 10 h 以上，有效持續時間比多種抗生素更長。研究表明，雞源 Fowlicidin-3 AMPs 酵母重組表達產物對致病性大腸桿菌 K99、雞白痢沙門菌和金黃色葡萄球菌 Cowan I 等均具有抑殺作用[30]。

3.2 抗真菌活性

AMPs 不僅對細菌具有廣譜抗菌的作用，對一些真菌也有一定抑殺作用。Fehlbaum 等[31]從果蠅中分離出與富含 Cys 的 AMPs γ-thionins 及 Rs-AFP II 具有高度同源性的抗真菌肽 drosomycin，但試驗結果表明 drosomycin 不能有效抑制細菌和酵母菌的生長。此外，已發現的還有東北大黑鰓金龜幼蟲抗真菌肽holotricin III[32]、鱗翅目昆蟲抗真菌肽heliomicin 和白蟻死亡素termicin等[2]。另有資料表明，某些昆蟲源 AMPs 不僅可有效防治某些特殊植物性真菌病，還可以使某些谷類作物的產量增加。

3.3 抗病毒活性

目前臨床應用的抗病毒藥物均有不同程度的毒副作用，尋找更加安全且有效的抗病毒藥物是研究人員長期關注的焦點。研究表明，目前研究中發現的大多數 AMPs 對包膜病毒的殺滅效果優于無包膜病毒[32]。資料顯示，哺乳動物 defensin 家族和兩棲動物 magainin 家族、brevinin-1 家族、maximins 家族等 AMPs 對單純皰疹病毒、人免疫缺陷病毒、流感病毒等包膜病毒均有一定滅活作用[33]。有研究表明，重組表達的 α 防御素和 β 防御素，對包膜和非包膜病毒均具有抗病毒活性[34]。

3.4 抗腫瘤活性

鑒于 AMPs 具有理化性質穩定、抗菌譜較廣，且不易引發細菌產生耐藥性等優點，相關學者對 AMPs 的早期研究主要致力于將其開發為新一代高效抗菌藥物。近年來，隨著人類對 AMPs 逐步地研究和探索，一些 AMPs 在體內和體外的試驗中所表現出的抗腫瘤活性引起國內外專家學者的日益關注。人們在腫瘤治療的研究中發現，多數化療藥物在消除癌細胞的同時也會對正常細胞造成一定程度的損傷，具有較強毒副作用。研究表明，從果蠅幼蟲中分離獲得的富含甘氨酸的抗菌肽 SK84 對多種癌細胞系（人白血病 THP-1、肝癌 HepG2 和乳腺癌 MCF-7 細胞）的增殖均有特異性抑制作用，且無溶血活性[35]。這表明，AMPs 不僅可以特異性地抑制某些腫瘤細胞的生長，而且不會損傷機體的正常細胞。因此，AMPs 在今后的研究中有可能成為一種新型的抗腫瘤藥物。

4 抗菌作用機制

近年來，相關學者針對 AMPs 的抗菌機制開展大量研究，但仍未能完全闡明。研究資料表明，AMPs 對微生物的廣譜抗菌作用可能與其對細胞膜通透性、核酸復制及蛋白質等物質的生物合成有關。

4.1 對細胞膜的作用

研究表明，陽離子 AMPs 通過靜電相互作用先結合在表面帶負電荷的細胞膜上，破壞細胞膜的完整性并誘使其產生孔隙，致使細胞的內容物外溢而死亡[24]。破膜型 AMPs 的作用機制假說主要有以下三種：環孔模型、氈毯模型和桶板模型[36]。

第一種，環孔模型。AMPs 垂直插入磷脂雙分子層內，并始終與其磷脂頭部相結合，共同形成環孔形跨膜通道，破壞細胞的跨膜電位和滲透調節功能，抑制細胞的呼吸作用，最終導致菌體死亡。第二種，氈毯模型。由于 AMPs 分子具有水脂兩親性，可與磷脂雙分子層的磷脂“頭”部結合，且親水性朝向水溶液，致使 AMPs 以與氈毯類似的結構平行地排列在磷脂雙分子層表面，待 AMPs 達到臨界濃度時，磷脂雙分子層穩定性降低，內外受力不均而變形，最終導致細胞膜破裂[37]。AMPs 對革蘭陰性菌和寄生蟲的作用多屬于此類機制，如抗菌肽 aurein 1.2，人類 cathelicidin 衍生 LL37、丙氨酸取代 magainin-2 酰胺、uperin-3.1 和cecropin-LL37 混合物抑制牛痘病毒的過程符合該模型[38]。第三種，桶板模型。AMPs 借助疏水作用力在細胞膜表面富集，通過改變磷脂雙分子層構象形成 AMPs 多聚體，垂直插入細胞膜的磷脂雙分子層中；AMPs 的疏水部分與雙分子層內部相互作用，親水部分朝向細胞內部形成孔隙或通道。由于此類模型的排列與水桶上的木排形狀相似故被命名為“桶板模型”。從青蛙的皮膚分泌物中分離出的抗菌肽 Ctx-Ha 就是基于桶板模型的作用機制[39]。

4.2 對核酸生物合成過程的作用

AMPs 發揮抗菌作用另一種可能機制是抗菌物質進入胞內，作用于基因組，從而引起細胞結構功能的破壞而導致細菌死亡。苑園園等[40]在多粘類芽孢桿菌 CP7 菌株的抗菌蛋白（CP7ACP）對嗜水氣單胞菌 S12 菌的生長、細胞結構、生物大分子和磷泄漏影響的研究中發現，CP7ACP 能使嗜水氣單胞菌 S12 菌細胞壁、細胞膜、細胞器以及菌體均受到不同程度的破壞，致使胞內磷和生物大分子發生明顯外泄，S12 菌基因組 DNA 呈現增色效應。此外，鱟素可通過基因組 DNA 和 RNA 結合，阻礙相關基因的轉錄。豬小腸抗菌肽 PR-39 可以通過阻止蛋白質的生物合成，誘導在 DNA 復制過程中的關鍵蛋白質降解，從而抑制細菌的繁殖生長[41]。

5 AMPs 的應用

5.1 AMPs 在畜牧業生產中的應用

近年來，由于抗生素類藥物在動物飼料生產中的過度添加和使用，破壞了機體腸道正常微生物種群的平衡，并在動物性產品和環境中出現大量藥物殘留，致使致病菌的耐藥性不斷產生、畜禽機體的自身抵抗力下降等問題日益嚴重，給畜產品的質量和人類的健康帶來了嚴重威脅。為解決面臨的上述問題，嘗試將 AMPs 作為新一代抗生素的理想替代物，添加至畜禽飼料中的研究越來越多。

研究表明，用天蠶素代替抗生素飼喂雛雞，可以明顯提高雛雞的日均增重量和機體發育早期免疫器官的重量指數，從而增強機體腹腔巨噬細胞的吞噬功能[42]。另有研究表明，在飼料中添加一定比例的天蠶素可明顯提高蛋用仔公雞的生長性能和免疫器官重量指數，并可以有效降低機體前炎性細胞因子的 mRNA 表達水平，抑制炎癥反應，從而增強機體的免疫功能[43]。此外，在飼料中適當地添加 AMPs，不僅可以促進仔豬的生長，增強機體的免疫力，還可以提高飼料的利用率[44]。

5.2 AMPs 在醫藥研究領域中的應用

目前，AMPs 憑借自身獨特的優點已在生物醫藥研究領域獲得初步應用。一方面，AMPs 具有較強的膜活性，可作為運輸載體將一些特殊藥物遞送至細胞內。現已有部分 AMPs 開始被用作各種活性分子在細胞內轉運的有效載體[45]。另一方面，AMPs 的廣譜抗菌活性已開始被作為抗生素的替代藥品進行應用性研究。牛明福等[46]采用基因工程方法實現了抗菌肽 CP 在巴斯德畢赤酵母中的重組表達，通過比較其與幾種常用抗菌藥物聯合使用前后的生物學活性，利用分級抑制濃度指數（FIC）探究和分析 AMPs 與不同抗生素間的抗菌作用關系；研究結果表明，抗菌肽 CP 與鏈霉素、卡那霉素、四環素及多粘菌素 B 聯用后展現出不同程度的協同或相加作用；但抗菌肽 CP 與具體各類抗生素之間的相互作用受所試細菌種類和特性的差異性影響又有所不同。這表明該 AMPs 與某些抗生素間存在一定程度的協同或疊加作用，可在某種程度上有效減少或替代抗生素的使用。

6 結語

AMPs 憑借其抗菌譜廣、作用迅速、熱穩定性好、不易產生耐藥性等優點，已逐步發展成為生物醫學、獸醫學和環境科學等相關方面的研究熱點。但 AMPs 在某些方面仍存在一些相應問題：①目前國內外對 AMPs 的作用機制研究主要在人工制作的脂質膜上進行，得出的結論也不盡相同，難以獲得一致的解釋；②AMPs 雖然在生物體中廣泛存在，但因其為免疫系統受到刺激后產生的物質，組織含量極低，且缺少較為成熟、高效的提取純化方法，加之化學合成成本較高等原因，制約著 AMPs 的廣泛應用；③研究表明，AMPs 在某種情況下作為治療藥物長期使用，可能會給機體的天然免疫系統帶來一定的威脅，不能完全排除使細菌產生一定耐藥性的可能；④為獲得更穩定的 AMPs，國內外很多學者利用基因工程技術和計算機輔助技術對其編碼序列進行優化或進行結構改造，但所得到的改良型 AMPs 的生物安全性并沒有準確的定論，以及基因重組表達載體的構建、表達和純化等方面，還需要進一步的研究。因此，盡管人們目前已在 AMPs 方面取得了很多的應用性研究成果，但針對 AMPs 的抗菌作用機制、安全性以及耐藥性等方面的研究仍需要相關專家和學者不懈地努力探索。

[1] Lapis K. Physiologic and pathophysiologic significance of antimicrobial (host defensive) small peptides. Orv Hetil, 2008, 149(51):2419-2424.

[2] Zhang DD, Shang DJ. Potential of antimicrobial peptides as novel anti-infective the rapeutics and application prospect. Chin J Biochem Pharm, 2016, 36(1):178-182. (in Chinese)

張東東, 尚德靜. 抗菌肽作為新型抗感染藥物的潛力及應用前景. 中國生化藥物雜志, 2016, 36(1):178-182.

[3] Boman HG, Nilsson I, Rasmuson B. Inducible antibacterial defence system in Drosophila. Nature, 1972, 237(5352):232-235.

[4] Guan N, Xia XJ, Long YH, et al. Research progresses and applications of antimicrobial peptides. Chin J Anim Nutr, 2014, 26(1):17-25. (in Chinese)

冠楠, 夏雪娟, 隆耀航, 等. 抗菌肽的研究進展及其應用. 動物營養學報, 2014, 26(1):17-25.

[5] Hoang VL, Kim SK. Antimicrobial peptides from marine sources. Curr Protein Pept Sci, 2013, 14(3):205-211.

[6] Salas CE, Badillo-Corona JA, Ramírez-Sotelo G, et al. Biologically active and antimicrobial peptides from plants. Biomed Res Int, 2015, 2015:102129.

[7] Zeitler B, Herrera Diaz A, Dangel A, et al. De-novo design of antimicrobial peptides for plant protection. PLoS One, 2013, 8(8): e71687.

[8] Hammami R, Ben Hamida J, Vergoten G, et al. PhytAMP: a database dedicated to antimicrobial plant peptides. Nucleic Acids Res, 2009, 37(Database issue):D963-D968.

[9] Giuliani A, Rinaldi AC. Antimicrobial peptides methods and protocols. Totowa, NJ: Humana Press, 2010:15.

[10] Chernysh S, Gordya N, Suborova T. Insect antimicrobial peptide complexes prevent resistance development in bacteria. PLoS One, 2015, 15, 10(7):e0130788.

[11] Müller H, Salzig D, Czermak P. Considerations for the process development of insect-derived antimicrobial peptide production. Biotechnol Prog, 2015, 31(1):1-11.

[12] Galdiero S, Falanga A, Berisio R, et al. Antimicrobial peptides as an opportunity against bacterial diseases. Curr Med Chem, 2015, 22(14): 1665-1677.

[13] Sharma S, Sahoo N, Bhunia A. Antimicrobial peptides and their pore/Ion channel properties in neutralization of Pathogenic Microbes. Curr Top Med Chem, 2016, 16(1):46-53.

[14] Dutta P, Das S. Mammalian antimicrobial peptides: promising therapeutic targets against infection and chronic inflammation. Curr Top Med Chem, 2016, 16(1):99-129.

[15] Fjell CD, Hiss JA, Hancock RE, et al. Designing antimicrobial peptides: form follows function. Nat Rev Drug Discov, 2011, 11(1): 37-51.

[16] Malmsten M. Antimicrobial peptides. Ups J Med Sci, 2014, 119(2): 199-204.

[17] Sumi CD, Yang BW, Yeo IC, et al. Antimicrobial peptides of the genus Bacillus: a new era for antibiotics. Can J Microbiol, 2015, 61(2): 93-103.

[18] Zhao J, Sun Y, Li J, et al. Antiviral function of animal antimicrobial peptides. J Med Mol Biol, 2008, 5(5):466-469. (in Chinese)

趙潔, 孫燕, 李晶, 等. 動物抗菌肽的抗病毒活性. 醫學分子生物學雜志, 2008, 5(5):466-469.

[19] Li GR, He LY, Liu XY, et al. Rational design of peptides with anti-HCV/HIV activities and enhanced specificity. Chem Biol Drug Des, 2011, 78(5):835-843.

[20] Brogden NK, Brogden KA. Will new generations of modified antimicrobial peptides improve their potential as pharmaceuticals? Int J Antimicrob Agents, 2011, 38(3):217-225.

[21] Yang LM, Huang Y, Zhang RJ. Design of new antimicrobial peptides and prediction of its activity and function. Comput Modernization, 2013, (2):138-142. (in Chinese)

楊麗敏, 黃燕, 張日俊. 新抗菌肽設計及活性與功能預測. 計算機與現代化, 2013, (2):138-142.

[22] Hicks RP, Abercrombie JJ, Wong RK, et al. Antimicrobial peptides containing unnatural amino acid exhibit potent bactericidal activity against ESKAPE pathogens. Bioorg Med Chem, 2013, 21(1):205-214.

[23] Azmi F, Skwarczynski M, Toth I. Towards the development of synthetic antibiotics: designs inspired by natural antimicrobial peptides. Curr Med Chem, 2016. [Epub ahead of print]

[24] Wang G. Improved methods for classification, prediction, and design of antimicrobial peptides. Methods Mol Biol, 2015, 1268:43-66.

[25] Lee HT, Lee CC, Yang JR, et al. A large-scale structural classification of antimicrobial peptides. Biomed Res Int, 2015, 2015:475062.

[26] Libardo MD, Cervantes JL, Salazar JC, et al. Improved bioactivity of antimicrobial peptides by addition of amino-terminal copper and nickel (ATCUN) binding motifs. ChemMedChem, 2014, 9(8):1892- 1901.

[27] Miao JY, Ke C, Guo HX, et al. Extraction, isolation and antibacterial mechanism of antibacterial peptides. Mode Food Sci Technol, 2014, 30(1):233-240. (in Chinese)

苗建銀, 柯暢, 郭浩賢, 等. 抗菌肽的提取分離及抑菌機理研究進展. 現代食品科技, 2014, 30(1):233-240.

[28] Liu HZ, Wang KZ, Zhu RL, et al. Isolation and purification of an antimicrobial protein from rabbit small intestine and its antibacterial activity. Acta Lab Anim Scientia Sinica, 2007, 15(4): 253-257. (in Chinese)

劉紅珍, 王可洲, 朱瑞良, 等. 一種兔腸源抗菌蛋白分離純化及其抑菌活性. 中國實驗動物學報, 2007, 15(4):253-257.

[29] Wang W, Ren WH. Inhibition of Escherichia coli growth by cecropin A. Chin J Zoonoses, 2013, 29(6):533-536. (in Chinese)

王煒, 任偉宏. 天蠶素多肽分子對大腸埃希菌的抑制作用. 中國人獸共患病學報, 2013, 29(6):533-536.

[30] Li RR, He ZQ, Lü YJ, et al. Optimization of the expression and biological characteristic of antibacterial peptide Fowlicidin-3 and its therapeutic tests on Escherichia coli O1 infected chickens. J Nanjing Agric Univ, 2011, 34(2):113-118. (in Chinese)

李榮榮, 和禎泉, 呂英軍, 等. 雞源抗菌肽Fowlicidin-3表達條件的優化及生物學特性和體內療效研究. 南京農業大學學報, 2011, 34(2):113-118.

[31] Fehlbaum P, Bulet P, Michaut L, et al. Insect immunity. Septic injury of Drosophila induces the synthesis of a potent antifungal peptide with sequence homology to plant antifungal peptides. J Biol Chem, 1994, 269(52):33159-33163.

[32] Cespedes GF, Lorenzón EN, Vicente EF, et al. Mechanism of action and relationship between structure and biological activity of Ctx-Ha: a new ceratotoxin-like peptide from Hypsiboas albopunctatus. Protein Pept Lett, 2012, 19(6):596-603.

[33] Wilson SS, Wiens ME, Smith JG. Antiviral mechanisms of human defensins. J Mol Biol, 2013, 425(24):4965-4980.

[34] Kang SJ, Park SJ, Mishig-Ochir T, et al. Antimicrobial peptides: therapeutic potentials. Expert Rev Anti Infect Ther, 2014, 12(12): 1477-1486.

[35] Lu J, Chen ZW. Isolation, characterization and anti-cancer activity of SK84, a novel glycine-rich antimicrobial peptide from Drosophila virilis. Peptides, 2010, 31(1):44-50.

[36] Rashid R, Veleba M, Kline KA. Focal targeting of the bacterial envelope by antimicrobial peptides. Front Cell Dev Biol, 2016, 4:55.

[37] Fernandez DI, Le Brun AP, Whitwell TC, et al. The antimicrobial peptide aurein 1.2 disrupts model membranes via the carpet mechanism. Phys Chem Chem Phys, 2012, 14(45):15739-15751.

[38] Splith K, Neundorf I. Antimicrobial peptides with cell-penetrating peptide properties and vice versa. Eur Biophys J, 2011, 40(4):387-397.

[39] Lee J, Lee DG. Antimicrobial peptides (AMPs) with dual mechanisms: membrane disruption and apoptosis. J Microbiol Biotechnol, 2015, 25(6):759-764.

[40] Yuan YY, Liu QM, Zhong YS, et al. Mechanism of CP7 antibacterial protein against Aeromonas hydrophila. Microbiology, 2012, 39(7): 949-957. (in Chinese)

苑園園, 劉清明, 鐘楊生, 等. CP7抗菌蛋白對嗜水氣單胞菌的抑殺作用機理. 微生物學通報, 2012, 39(7):949-957.

[41] Scocchi M, Mardirossian M, Runti G, et al. Non-membrane permeabilizing modes of action of antimicrobial peptides on bacteria. Curr Top Med Chem, 2016, 16(1):76-88.

[42] Wang YZ, Han FF. Advanced research in the antibacterial activity, immunity, expression and nutrition regulation of antibacterial peptides from swine //Zhang HF. Advanced research in feed nutrition. Yangling, Shaanxi, 2010. Beijing: China's Agricultural Science and Technology Press, 2010:291-301. (in Chinese)

汪以真, 韓菲菲. 豬源抗菌肽抗菌、免疫、表達特性及其營養調控的研究進展//張宏福. 飼料營養研究進展. 陜西楊凌, 2010. 北京: 中國農業科學技術出版社, 2010:291-301.

[43] Liu LR, Yang KL, Hua J, et al. Antimicrobial peptides: effects on growth performance, immune indices and mrna expression of related cytokine genes in jejunum of young roosters for egg production. Acta Zoonutrimenta Sinica, 2012, 24(7):1345-1351. (in Chinese)

劉莉如, 楊開倫, 滑靜, 等. 抗菌肽對蛋用仔公雞生長性能、免疫指標及空腸組織相關細胞因子基因mRNA表達的影響. 動物營養學報, 2012, 24(7):1345-1351.

[44] Guang HJ, Li Z, Wang YP, et al. Progress in cathelicidins antimicrobial peptides research. Zool Res, 2012, 33(5):523-526. (in Chinese)

廣慧娟, 厲政, 王義鵬, 等. Cathelicidins家族抗菌肽研究進展. 動物學研究, 2012, 33(5):523-526.

[45] Park YJ, Lee SK, Jung YS, et al. Promotion of formyl peptide receptor 1-mediated neutrophil chemotactic migration by antimicrobial peptides isolated from the centipede Scolopendra subspinipes mutilans. BMB Rep, 2016, 49(9):520-525.

[46] Niu MF, Li X, Wang C, et al. Research on the interaction in vitro between antibacterial CP and antibiotic//The fourth swine symposium of Animal infectious disease branch of Chinese association of animal & veterinary sciences. Zhengzhou, 2010:693-696. (in Chinese)

牛明福, 李翔, 王臣, 等. 抗菌肽CP與抗生素的體外聯合藥效研究//中國畜牧獸醫學會動物傳染病學分會第四次豬病學術研討會論文集. 鄭州, 2010:693-696.

山東省自然科學基金聯合項目（ZR2015YL036）；山東省醫學科學院醫藥衛生科技創新工程；山東省科技發展計劃（2013GC03010）；濟南市科技發展計劃項目（201401268）

250200 濟南大學山東省醫學科學院醫學與生命科學學院（劉秀、王可洲）；250002 濟南，山東省醫學科學院山東省實驗動物中心（郭中坤、王可洲）

王可洲，Email：wangkezhou_cn@163.com

2016-09-26

10.3969/j.issn.1673-713X.2016.06.010