Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)及意義的研究

王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

·臨床醫(yī)學(xué)·

Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤中的表達(dá)及意義的研究

王鵬 張丹 宋永欣 冉德軍 孫德義

目的探討Mcm2和Survivin在鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤(SNIP)中的表達(dá)及其相互關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)Mcm2及Survivin在40例SNIP、20例鼻腔鱗狀細(xì)胞癌(NSCC)及40例正常鼻腔黏膜(NM)組織標(biāo)本中的表達(dá)。結(jié)果Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC 中的表達(dá)呈遞增趨勢(shì),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。SNIP中Mcm2和Survivin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.913,P＜0.01)。結(jié)論Mcm2和Survivin均參與SNIP的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,可作為衡量SNIP惡變與復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)之一。

鼻腔鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤；Mcm2；Survivin；增殖；凋亡

SNIP是鼻科常見(jiàn)的良性腫瘤,其在性質(zhì)上雖屬良性,但具有侵襲性、高復(fù)發(fā)率、易惡變和多中心的臨床特點(diǎn)［1］。本實(shí)驗(yàn)采取免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Mcm2和Survivin在NM、SNIP及NSCC中的表達(dá)情況,并對(duì)兩者在SNIP中的表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)分析,探討兩者在SNIP中表達(dá)的臨床意義,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科2009年1月～2012年9月手術(shù)切除的SNIP組織40例,2010年9月～2012年9月切除的40例慢性單純性鼻炎的部分NM組織以及本院2006年1月～2012年9月手術(shù)切除的20例NSCC組織。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。

1.2 試劑 S-P免疫組化試劑盒,鼠抗人Mcm2單克隆抗體,兔抗人Survivin多克隆抗體。

1.3 方法 將三種組織類(lèi)型蠟塊標(biāo)本制作成病理切片后,按S-P免疫組織化學(xué)試劑盒操作方法進(jìn)行染色,所有病理切片染色均在相同條件下進(jìn)行,每種組織類(lèi)型染色均設(shè)陽(yáng)、陰性對(duì)照。用已確認(rèn)染色陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照,用PBS替代一抗孵育切片做陰性對(duì)照。

1.4 染色結(jié)果及計(jì)數(shù)方法 Mcm2的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核,凡細(xì)胞核染成棕黃色或棕褐色者為染色陽(yáng)性細(xì)胞。同時(shí)按以下方法計(jì)算Mcm2標(biāo)記指數(shù)：每張切片于高倍鏡下隨機(jī)選5個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的平均值作為其標(biāo)記指數(shù),然后進(jìn)行評(píng)級(jí)：標(biāo)記指數(shù)＜5%為(-)；標(biāo)記指數(shù)6%～25%為(+)；標(biāo)記指數(shù)26%～50%為(++)；標(biāo)記指數(shù)＞50%為(+++)。

Survivin的表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞漿,凡細(xì)胞漿呈黃色、棕黃色、棕褐色者為染色陽(yáng)性細(xì)胞。同時(shí)按以下方法計(jì)算Survivin的陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果：每張切片于高倍鏡下隨機(jī)選5個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的平均數(shù),根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度獨(dú)立評(píng)判后綜合判定：①陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)：≤5%記為0分,6%～25%記為1分,26%～50%記為2分,51%～75%記為3分,＞75%記為4分；②染色強(qiáng)度：無(wú)染色記為0分,淡黃色記為1分,黃色記為2分,棕黃色記為3分。兩項(xiàng)結(jié)果乘積＞1分為陽(yáng)性,≤1分為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Spearman法進(jìn)行分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mcm2和Survivin在三種組織類(lèi)型中的陽(yáng)性表達(dá)情況 Mcm2和Survivin在NM、SNIP、NSCC中的表達(dá)呈遞增趨勢(shì),兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表1,表2。

2.2 SNIP中Mcm2和Survivin表達(dá)相關(guān)性分析 本研究顯示,Mcm2與Survivin表達(dá)之間呈正相關(guān)(r=0.913,P＜0.01)。Survivin蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性的組織標(biāo)本與Survivin蛋白表達(dá)呈陰性的組織標(biāo)本相比,前者的Mcm2中位標(biāo)記指數(shù)明顯高于后者(P＜0.01)。見(jiàn)表3。

3 討論

細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡狀態(tài)的平衡,是維持機(jī)體組織細(xì)胞數(shù)量穩(wěn)定、清除突變細(xì)胞、防止細(xì)胞癌變所必須的。細(xì)胞增殖與凋亡狀態(tài)平衡的紊亂與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,如損傷的細(xì)胞不能啟動(dòng)相應(yīng)的凋亡機(jī)制,體內(nèi)細(xì)胞的增殖與凋亡兩者間的狀態(tài)就會(huì)失去平衡,兩者平衡的破壞使存在基因缺陷的細(xì)胞獲得生存優(yōu)勢(shì),促使細(xì)胞基因突變的發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化,最終促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此,細(xì)胞的增殖與凋亡狀態(tài)的異常可能在SNIP的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。

Mcm2是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種較好地反映細(xì)胞增殖活性的標(biāo)志物。在所有進(jìn)入細(xì)胞周期的細(xì)胞中均有表達(dá),但在靜止期及分化成熟的細(xì)胞中則不表達(dá),因此,在突變和增殖發(fā)育異常的細(xì)胞中,Mcm2可作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物來(lái)標(biāo)記細(xì)胞所處的狀態(tài)［2］。且Ramnath等［3］研究證實(shí),Mcm2的細(xì)胞表達(dá)陽(yáng)性度與細(xì)胞變異的嚴(yán)重程度相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Mcm2在NM中表達(dá)較少,但在SNIP、NSCC中表達(dá)范圍和層次廣泛、染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。Mcm2的蛋白標(biāo)記指數(shù)也呈一遞增趨勢(shì),符合三者細(xì)胞增殖活性逐一遞增的規(guī)律。Gonzalez等［4］研究指出,Mcm2高表達(dá),意味著隨后的細(xì)胞突變轉(zhuǎn)化增加。本實(shí)驗(yàn)中有些SNIP病例的Mcm2的標(biāo)記指數(shù)較高,甚至達(dá)到NSCC的Mcm2中位標(biāo)記指數(shù),這說(shuō)明在某些SNIP中存在有惡變傾向或惡變的病灶,這些Mcm2的標(biāo)記指數(shù)較高的SNIP病例可能比Mcm2標(biāo)記指數(shù)低的SNIP病例易發(fā)生復(fù)發(fā)或惡變。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族中的新成員。它可以抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂,對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡界面的聯(lián)系起重要作用。Survivin除了在胸腺、生殖腺中微弱表達(dá)外,在其他正常組織中均未表達(dá),而在幾乎所有惡性腫瘤中都有高表達(dá)［5］。研究表明,Survivin在幾種前惡性損傷(如結(jié)腸息肉、乳腺腺瘤等)中表達(dá),表明Survivin的表達(dá)可能出現(xiàn)于細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的早期［6］。因此,Survivin的檢測(cè)可為診斷腫瘤及預(yù)測(cè)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后提供新的指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Survivin蛋白在NM中無(wú)明顯表達(dá),在SNIP及NSCC中表達(dá)逐漸升高,統(tǒng)計(jì)分析顯示三者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。SNIP中Survivin蛋白含量較高,并且Survivin在不同SNIP病例的染色表達(dá)強(qiáng)弱不等,Survivin強(qiáng)表達(dá)可能提示該腫瘤更趨向復(fù)發(fā)、惡變。

本實(shí)驗(yàn)中,Survivin蛋白陽(yáng)性表達(dá)與陰性表達(dá)相比,Mcm2中位標(biāo)記指數(shù)前者明顯高于后者。這表明在SNIP的發(fā)生發(fā)展中高增殖和低凋亡可能同時(shí)存在,Mcm2促增殖作用和Survivin的凋亡抑制作用相互促進(jìn),使細(xì)胞增殖和凋亡之間的差距進(jìn)一步擴(kuò)大,使得腫瘤細(xì)胞獲得生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。因此,SNIP中Mcm2與Survivin的表達(dá)水平有可能作為衡量SNIP惡變與復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)之一。

［1］鄔旭,韓德民.鼻腔、鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè),2002 ,26(2):95-97.

［2］Gakiopoulou H,Korkolopoulou P,Levidou G,et al.Minichromosome maintenance proteins 2 and 5 in non-benign epithelial ovarian tumours: relationship with cell cycle regulators and prognostic implications.Br J Cancer,2007,97(8):1124-1134.

［3］Ramnath N,Hernandez FJ,Tan DF,et al.MCM2 is an independent predictor of survival in patients with non-small-cell lung cancer.Clin Oncol,2001,19(22):4259-4266.

［4］Gonzalez MA,Pinder SE,Callagy G,et al.Minichromosome maintenance protein 2 is a strong independent prognostic marker in breast cancer.J Clin Oncol,2003,21(23):4306-4313.

［5］Athanassiadou AM,Patsouris E,Tsipis A,et al.The significance of Survivin and Nectin-4 expression in the prognosis of breast carcinoma.Folia Histochem Cytobiol,2011,49(1):26-33.

［6］Kobayashi Y,Yukiue H,Sasaki H,et al.Developmentally regulated expression of survivin in the human thymus.Hum Immunol,2002,63(2):101-107.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.011

2015-12-10］

163000 大慶油田總醫(yī)院耳鼻喉科

王鵬