中成藥天智顆粒對(duì)血管性癡呆大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖的影響

黎秀平 詹琳 李海燕 劉廣倩

·實(shí)驗(yàn)研究·

中成藥天智顆粒對(duì)血管性癡呆大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖的影響

黎秀平 詹琳 李海燕 劉廣倩

目的研究中成藥天智顆粒對(duì)血管性癡呆大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖的影響。方法80只健康雄性SD大鼠,將其隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組、治療組,各20只。模型對(duì)照組和治療組大鼠均建立血管性癡呆模型,治療組在造模后的60 d給予中成藥天智顆粒灌胃處理,分別通過(guò)尿嘧啶脫氧核苷染色法和膠質(zhì)纖維酸性蛋白染色法對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞增殖情況進(jìn)行測(cè)定和比較。分別對(duì)四組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果、免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果空白對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠的行為學(xué)習(xí)次數(shù)、尿嘧啶脫氧核苷(BrdU)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),且均顯著優(yōu)于天智顆粒治療組和模型對(duì)照組,比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療組優(yōu)于模型對(duì)照組(P＜0.05)。結(jié)論中成藥天智顆粒可以抑制大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,但會(huì)促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖,并發(fā)揮改善大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的作用,效果良好。

天智顆粒；血管性癡呆；神經(jīng)細(xì)胞增殖

血管性癡呆指的腦血管病變引起腦損害并致癡呆的情況,會(huì)對(duì)患者的學(xué)習(xí)記憶能力造成較為嚴(yán)重的損傷,特別是在我國(guó)老齡化程度加深,腦血管疾病發(fā)病率不斷增加的情況下,血管性癡呆會(huì)嚴(yán)重影響老年患者的生存質(zhì)量［1］。本文選擇健康的SD大鼠建模并通過(guò)中成藥天智顆粒干預(yù)血管癡呆模型后,對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞的增值情況進(jìn)行分析,了解大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力改善情況,并探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取老年健康SD大鼠80只作為研究對(duì)象,大鼠月齡14～18個(gè)月,平均月齡(16.1±0.4)個(gè)月,體重500～550 g,平均體重(522.4±20.5)g。將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型對(duì)照組、治療組,每組20只。實(shí)驗(yàn)前,四組大鼠一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 所有大鼠均在適宜條件下行1周的適應(yīng)性喂養(yǎng)后,開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.1 動(dòng)物模型建立 除空白對(duì)照組外的三組大鼠均在建模前禁食12 h,禁水4 h,經(jīng)腹腔注射3ml/kg水合氯醛實(shí)施麻醉。常規(guī)備皮消毒后,選擇在大鼠的頸正中線(xiàn)做縱切口,切口長(zhǎng)度約1.5cm。其中,假手術(shù)組的大鼠切開(kāi)之后,僅做雙側(cè)頸總動(dòng)脈鈍性分離,但不結(jié)扎；模型對(duì)照組和治療組大鼠則實(shí)施雙重頸總動(dòng)脈結(jié)扎處理,對(duì)慢性腦灌注不足的情況進(jìn)行模擬,建立血管性癡呆模型。術(shù)后再次送入飼養(yǎng)室中進(jìn)行飼養(yǎng),并以造模后大鼠出現(xiàn)形體消瘦、精神萎靡、皮毛光澤下降、反應(yīng)遲鈍甚至是共濟(jì)失調(diào)等的情況為血管性癡呆模型造模成功。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 四組大鼠均常規(guī)置于條件適宜的動(dòng)物房中飼養(yǎng),60 d后空白對(duì)照組不給予任何處理,假手術(shù)組和模型對(duì)照組的大鼠均給予生理鹽水灌胃處理,治療組大鼠給予中成藥天智顆粒(河南省宛西制藥股份有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字Z20040041)灌胃,給藥劑量為5 g/(kg·d)。

采用三等分Y型迷宮箱測(cè)定大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,大鼠受到電擊后的正常反應(yīng)為：足底通電10 s內(nèi)可一次性跑向安全區(qū)域。每只大鼠進(jìn)行連續(xù)10次檢測(cè),以反應(yīng)正確次數(shù)≥9次為學(xué)會(huì),并通過(guò)大鼠達(dá)到“學(xué)會(huì)”標(biāo)準(zhǔn)所需電擊次數(shù)來(lái)對(duì)其認(rèn)知功能障礙程度進(jìn)行判斷。

迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后,分別對(duì)大鼠進(jìn)行BrdU染色和GFAP染色。經(jīng)24 h禁食,將其送至實(shí)驗(yàn)室處死,經(jīng)后頸部斷頭、顱骨去除等處理,將大鼠腦部皮質(zhì)進(jìn)行分離,獲得左側(cè)海馬,同時(shí)切取海馬齒狀回前后組織各5mm,按照固定、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋、切片等的順序?qū)ζ溥M(jìn)行處理,制作蘇木精-伊紅染色法(HE)切片備用。

每只大鼠隨機(jī)抽取6張非連續(xù)性腦組織切片,采用雙盲隨機(jī)方法在200倍光學(xué)顯微鏡下對(duì)雙側(cè)海馬區(qū)的BrdU、GFAP標(biāo)記的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行觀(guān)察和計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

分別對(duì)四組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果、免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較,結(jié)果可見(jiàn)空白對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠的行為學(xué)習(xí)次數(shù)、BrdU陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；且均顯著優(yōu)于治療組和模型對(duì)照組,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療組優(yōu)于模型對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 四組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試結(jié)果、免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果比較(±s)

注：與空白對(duì)照組比較,aP1＜0.05,bP2＜0.05,cP3＞0.05；與模型對(duì)照組比較,dP4＜0.05

組別 例數(shù) 行為學(xué)習(xí)次數(shù)(次) BrdU陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)(n) GFAP陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)(n)治療組 20 10.55±0.56ad 8.69±1.03ad 24.11±3.08ad模型對(duì)照組 20 15.78±0.59b 3.57±0.78b 39.08±3.41b假手術(shù)組 20 7.56±0.38c 14.12±1.48c 15.98±2.99c空白對(duì)照組 20 7.23±0.34 14.59±1.82 14.07±2.89t1P1 23.198 0.000t2P2 12.907 0.000 15.045 0.000 35.827 0.000t3P3 23.109 0.000 29.762 0.000 0.552 0.891 0.691 0.743 0.901 0.553 21.382 0.000t4P4 16.091 0.000 18.620 0.000

3 討論

目前,血管性癡呆發(fā)病率已經(jīng)成為繼阿爾茨海默病后的第二大類(lèi)癡呆病［2］,在所有癡呆癥患者中,所占的比例高達(dá)30.6%。患者患病后以認(rèn)知功能障礙、記憶功能缺損等為主要臨床表現(xiàn),部分患者還伴有肢體運(yùn)動(dòng)障礙、語(yǔ)言交流障礙、視覺(jué)障礙或者人格障礙等,嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量［3］。

天智顆粒的組成成分主要包括：石決明、天麻、益母草、鉤藤、藤槐花、首烏、杜仲、梔子等,可以發(fā)揮清熱活血、平肝潛陽(yáng)、補(bǔ)肝益腎的功效［4］,并能一定程度改善血管性癡呆患者的認(rèn)知功能。本文以老年大鼠做動(dòng)物模型,并對(duì)天智顆粒對(duì)大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖、學(xué)習(xí)記憶能力改善的影響進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)其可以抑制大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,但會(huì)促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖,并發(fā)揮改善大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的作用,效果良好,雖然治療組與空白對(duì)照組、假手術(shù)組的比較尚有一定的差距,但是明顯優(yōu)于模型對(duì)照組(P＜0.05)。

已有研究證實(shí),患者的腦部發(fā)生缺血應(yīng)激性損傷之后,能夠通過(guò)促分裂素的釋放誘發(fā)腦神經(jīng)前體細(xì)胞增殖,進(jìn)而誘導(dǎo)室管膜下區(qū)、海馬齒狀回等區(qū)正常靜息休眠的前體細(xì)胞亞群增殖分化,促進(jìn)多種細(xì)胞因子的釋放,并進(jìn)一步經(jīng)自分泌或旁分泌作用促進(jìn)細(xì)胞增殖,神經(jīng)前體細(xì)胞數(shù)量的增加有利于患者學(xué)習(xí)記憶能力的改善。而膠質(zhì)細(xì)胞在整個(gè)腦組織系統(tǒng)中發(fā)揮反應(yīng)并反饋神經(jīng)元活動(dòng)信號(hào)的作用,通過(guò)特征性蛋白質(zhì)膠質(zhì)纖維酸性蛋白,能夠?qū)π切文z質(zhì)細(xì)胞活化情況進(jìn)行反映。一般情況下,腦缺血發(fā)生之后,患者的星形膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)迅速增殖,并可能對(duì)神經(jīng)纖維傳導(dǎo)、突觸構(gòu)建等過(guò)程造成影響,改變神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞的比例,并參與老年癡呆的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述,中成藥天智顆粒發(fā)揮抑制大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的作用,提示其對(duì)于改善血管性癡呆也有一定作用。

［1］吳斌,徐清,顧君董,等.天智顆粒治療輕、中度血管性癡呆療效觀(guān)察.中國(guó)健康心理學(xué)雜志,2013,21(12):1774-1775.

［2］馬永明,耿亞.天智顆粒治療血管性癡呆58例.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2013,11(16):20-22.

［3］靳瑋.甲酯化脂氧素A4對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響及對(duì)ERK/Nrf2和PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用.河北醫(yī)科大學(xué),2014.

［4］李建波,張殿印,侯玉琴.天智顆粒治療血管性癡呆59例療效觀(guān)察.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志,2012,15(3):84-86.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.211

2015-12-11］

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